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高效液相色谱法测定颠茄合剂中两组分的含量



全 文 :面积 ,以每个点 6 次测定的峰面积平均值与浓度作线性回
归。回归方程:A=63 . 42C+207. 9 , r=0 . 999 8(n=6), 表明
在24 . 6~ 393 . 6 mg L -1范围内 , 峰面积与浓度呈良好的线
性关系。在上述色谱条件下 ,吲哚美辛的最低检测限为 0. 1
mg L -1(S /N=3)。
2. 4 回收率试验 取吲哚美辛对照品约 80 , 100 , 120 mg ,
精密称定 ,置 100 mL 量瓶中 , 按处方比例加入空白滴眼液
10 mL , 摇匀 ,加甲醇适量 , 超声溶解 , 用流动相稀释至刻度 ,
再用流动相稀释 10 倍 , 按“样品含量测定”项下方法测定 , 计
算回收率。结果吲哚美辛的平均回收率为100. 4%, RSD 为
1 . 2%(n=5),见表 1。
表 1 回收率测定结果(n=6)
Tab 1 Recov ry of method(n=6)
加入量 /g 测得量 / g 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
0. 080 22 0. 08028 100. 08
0. 082 16 0. 08354 101. 68
0. 102 36 0. 101 40 99. 06 100. 41 1. 15
0. 105 62 0. 10527 99. 67
0. 121 35 0. 12372 101. 95
0. 122 49 0. 12250 100. 01
2. 5 精密度和重复性试验 取“ 2. 7”项下 98 . 4 mg L - 1的
吲哚美辛标准溶液 , 1 d 内进样 5 次 , 以及 5 d 分别进样 , 以
峰面积考察日内 、日间精密度。结果日内 RSD 为0 . 36%(n
=5),日间 RSD为0 . 95%(n=5)。
另按“样品含量测定”项下方法 , 5 次平行测定同批吲哚
美辛滴眼液 , 考察重复性。测定结果的 RSD为 0. 68%(n=
5)。
2. 6 稳定性试验 取样品溶液 , 室温放置于暗处 ,分别于一
天内(24 h)进样测定 5 次 , 记录主峰面积 , 并用归一化法计
算杂质含量 ,考察溶液的稳定性。结果样品溶液在 24 h 内 ,
杂质含量与初始溶液相比无明显变化 , 没有新杂质出现 , 表
明样品溶液至少在 24 h 内性质稳定。
2. 7 样品含量测定 精密量取吲哚美辛滴眼液适量(约相
当于吲哚美辛 100 mg),以流动相稀释至 100 mg L -1 , 注入
20 μL定量进样环中 , 依法测定 , 记录峰面积。另精密称取
吲哚美辛对照品适量 ,制备 100 mg L - 1的对照溶液 , 同法测
定 ,按外标法计算样品含量。结果 3 批样品的标示百分含量
及 RSD(n =5)分别为:102. 5%, 0. 36%(批号 050706-1);
101 . 6%, 0 . 41%(批号 050706-2);98 . 5%, 0 . 58%(批号
050706-3)。
2. 8 样品有关物质测定 精密量取吲哚美辛滴眼液适量
(约相当于吲哚美辛 100 mg),用流动相稀释制成含吲哚美
辛浓度为 100 mg L- 1的溶液 , 作为供试品溶液;精密量取适
量 ,加流动相制成含吲哚美辛浓度为 1 mg L- 1的溶液 , 作为
对照溶液。照含量测定项下的色谱条件 , 取对照溶液注入
20 μL定量进样环中 , 调节检测灵敏度 ,使主成分能准确积
分。再取供试品溶液依法测定 ,记录色谱图至主成分保留时
间的 3 倍 ,量取除溶剂峰外各杂质峰面积总和 ,分别用自身
对照法和归一化法计算杂质含量。结果表明:吲哚美辛滴眼
液 3批样品杂质含量较小 ,采用自身对照法和归一化法的测
定结果基本一致。吲哚美辛滴眼液有关物质检查结果见表
2。
[作者简介] 毛桂福 ,男 ,学士 ,副主任药师 ,电话:0772-3923757 , E-m ail:m aogf2005@sina. com
表 2 吲哚美辛滴眼液有关物质检查结果(%)
Tab 2 The related substances determina tion results of indo-
metecin eyes drops(%)
样品批号 自身对照法 /% 归一化法 /%
050706-1 0. 65 0. 64
050706-2 0. 70 0. 69
050706-3 0. 68 0. 68
3 讨论
吲哚美辛为非甾体抗炎药 , 在室温下空气中稳定 , 但对
光敏感。水溶液在 pH 2~ 8 时稳定。其所含酰胺键可被强
酸或强碱水解断裂 , 生成对氯苯甲酸和 5-甲氧基-2 , 3-甲基
吲哚-3-醋酸 ,后者可脱羧 , 还可被氧化为有色物质 , 温度升
高 ,水解变色更快[ 2] 。试验中发现吲哚美辛极易水解 , 用氢
氧化钠溶液(pH 12. 3)水浴 2 h 后 , 吲哚美辛已接近水解完
全 ,水解破坏样品图谱中吲哚美辛峰(约6. 7 min)几乎不见 ,
只有3 . 2 , 4. 0 min 的两分解产物峰。水解后溶液近无色 ,再
经强光照射后 , 变为黄棕色 ,此时又多出现一保留时间为3 . 0
min 的峰(如图 1D、E)。将对照品不经水解直接经强光照
射 ,则可见除上述 1 , 2 , 3 号峰外 , 另有保留时间分别为 4. 7 ,
5. 0 , 5. 2 , 8. 2 , 9 . 0 min 等一系列杂质峰(如图 1G), 这些峰在
强光照射后的吲哚美辛滴眼液图谱(图 1F)中也可见到。
虽然测定中 24 h 内溶液较稳定 , 但我们也发现如不避
光 , 1 周后样品含量有所下降(阳光直射处 , 1 周后含量降低
约8. 7%;室内日光散射下 , 1 周后含量降低约 0. 5%;凉暗处
几无变化),鉴于吲哚美辛的特点 , 该制剂应置于凉暗处 ,避
光保存。我们将进一步考察该制剂的稳定性。
本试验建立的 HPLC 方法能简单 、快速 、准确地测定吲
哚美辛滴眼液中吲哚美辛的含量及有关物质 , 可满足该制剂
稳定性研究的要求。
参考文献:
[ 1]  陈新谦 , 金有豫主编. 新编药物学[ M ] . 第 13版. 北京:人民
卫生出版社 , 1992. 162.
[ 2]  李正化主编. 药物化学[ M ] . 第 2版. 北京:人民卫生出版社 ,
1989. 77.
[ 3]  中国药典. 二部[ S] . 2005. 254.
[收稿日期] 2005-09-10
高效液相色谱法测定颠茄合剂中两组
分的含量
毛桂福 (柳州市第三人民医院 ,广西 柳州 545007)
[摘要]  目的:建立同时测定颠茄合剂中阿托品及羟苯乙酯
含量的高效液相色谱法。方法:采用 CLC-C8色谱柱 ,流动相
为 10 mmo l L - 1庚烷磺酸钠液(用冰醋酸调 pH 至3 . 3)-乙
腈-无水乙醇(66︰28︰6 , v /v), 流速为 1. 1 m L min-1 , 检测
波长为 210 nm。结果:阿托品和羟苯乙酯的线性范围分别
为0. 5~ 5 . 0 mg L - 1(r=0 . 999 7)、10. 0 ~ 100 . 0 mg L - 1(r
=0. 999 6), 平均回收率分别为100. 02%、100 . 24%, RSD不
大于1 . 38%。结论:本方法简便 、快速 、准确 , 适用于颠茄合
剂的质量控制。
1172 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2006 Sep , Vol 26 , No. 09
[ 关键词]  阿托品;羟苯乙酯;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号] R927. 2  [ 文献标识码] A   [ 文章编号] 1001-
5213(2006)09-1172-03
  颠茄合剂[ 1]是临床常用的内服制剂 , 有解除平滑肌痉
挛 、减少胃液分泌等作用 ,主要用于缓解胃肠痉挛引起的疼
痛 ,恶心 、呕吐等;其处方组成为:颠茄酊 50 mL、5%羟苯乙
酯 6 m L ,加纯化水至 1 000 mL。莨菪类生物碱的测定方法
有高效液相色谱法[ 2. 3] 、高效毛细管电泳法[ 4] 、薄层扫描
法[ 5] 、分光光度法[ 6]等。为有效控制颠茄合剂的质量 , 对同
时测定阿托品与羟苯乙酯的 H PLC 法进行了研究。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器 LC-10AD 高效液相色谱仪(日本岛津);LC-
10AD 泵;SPD -10A 可见-紫外检测器;CTO - 10A 柱温箱;
C-R7A 数据处理机;760CRT 双光束紫外可见分光光度计
(上海精密科学仪器有限公司)。
1. 2 试药 硫酸阿托品对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号 715-200010 , 供含量测定用);羟苯乙酯(广东省台州市
新宁制药厂 ,含量为 99 . 8%);盐酸山莨菪碱(山东省泗水希
尔康制药有限公司 , 含量为99 . 8%);氢溴酸东莨菪碱(广州
明兴制药有限公司 , 含量为99 . 9%);颠茄合剂(广西柳州市
第三人民医院药剂科自制 , 批号 20040916 , 20041009 ,
20050414);甲醇 、庚烷磺酸钠为色谱纯 ,其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Shim-pack CLC-C8柱(150 mm×6 . 0
mm , 5 μm);柱温:35 ℃;流动相:10 mmol L- 1庚烷磺酸钠溶
液(用冰醋酸调 pH 至3. 3)-乙腈-无水乙醇(66∶28∶6 , v /v),流
速:1. 1 mL min- 1 ;检测波长为 210 nm;进样量:20 μL。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 精密称取干燥至恒重的硫酸阿托品
(120 ℃)、盐酸山莨菪碱(105 ℃)、氢溴酸东莨菪碱(105 ℃)
对照品各25 . 00 mg 分别置 25 m L 量瓶中 , 加水至刻度 , 摇
匀 ,配成1 . 0 g L -1的对照品储备液。 精密称取 105 ℃干燥
至恒重的羟苯乙酯对照品 25. 00 mg 置 25 mL 量瓶中 , 加
50%乙醇溶解并定容 , 配成 1. 0 mg L - 1的贮备液。置 4 ℃
冰箱保存。临用前用流动相稀释成含硫酸阿托品和羟苯乙
酯分别为10 . 0 mg L -1或200 . 0 mg L - 1的混合对照品溶液。
2. 2. 2 样品溶液 精密量取样品 1 mL , 置 10 mL 的量瓶
中 ,加流动相溶液至刻度 , 摇匀并用 0. 45 μm 微孔滤膜滤过
即可。
2. 2. 3 阴性对照溶液 按处方配制缺颠茄酊及羟苯乙酯的
阴性样品 ,按照“ 2. 2 . 2”项下方法制成阴性对照溶液。
2. 3 系统适用性试验 分别取阴性对照溶液 、混合对照品
溶液 、样品溶液各 20 μL 进样分析 , 记录色谱 , 见图 1。在该
色谱条件下 ,阿托品 、羟苯乙酯与山莨菪碱 、东莨菪碱等其余
组分分离完全。阿托品的保留时间为 6. 85 min , 理论塔板数
为 7 200;羟苯乙酯的保留时间为10. 50 min , 理论塔板数为 5
128;二者的分离度为3. 0。阿托品与相邻的东莨菪碱分离度
为2. 2。表明该色谱条件下 , 柱效 、各峰之间的分离度均达到
了 2005年版中国药典的规定 ,且阴性对照无干扰。
图 1 高效液相色谱图
A. 阴性对照;B. 对照品;C. 样品;1-山莨菪碱;2-东莨菪碱;3-阿托
品;4-羟苯乙酯
Fig 1 HPLC chromatogram s
A. negative con t rol;B. reference substance;C. sample;1-raceaniso-
da mine;2-scopola mine;3-atropine;4-ethylparaben
2. 4 线性关系考察 分别精密量取“2 . 2 . 1”项下混合对照
品液0 . 5 , 1. 0 , 1. 5 , 2. 5 , 5 . 0 m L置 10 m L 量瓶中 , 加流动相
至刻度并摇匀 , 配成混合对照品溶液 , 分别进样 20 μL , 测定
峰高 ,以浓度 Y 对峰高积分值 X 进行线性回归。结果 ,硫酸
阿托品与羟苯乙酯的回归方程分别为:Y =1 . 305×10 -3 X+
2. 850×10-4( r=0 . 999 8)和 Y =4. 430×10 -4 X - 7 . 561×
10- 3(r=0 . 999 6), 线性范围分别为:0 . 5 ~ 5 . 0 mg L - 1和
10 . 0 ~ 100. 0 mg L- 1 。
2. 5 精密度和重复性试验 取“ 2. 4”项下混合对照品溶液
(硫酸阿托品和羟苯乙酯浓度分别为 2. 5 , 50. 0 mg L -1),
重复进样 6 次 ,测得硫酸阿托品及羟苯乙酯峰高的 RSD分
别为1 . 38%和1. 11%,结果表明精密度良好 。
取同一批号(批号 20050414)颠茄合剂的样品溶液 6
份 ,按“ 2. 3”项下方法制成样品液 , 依法测定 ,结果硫酸阿托
品及羟苯乙酯峰高的 RSD 分别为1. 82%和1 . 55%。结果表
明方法的重复性良好。
2. 6 稳定性试验 取同一批号(批号 20050414)颠茄合剂
的样品溶液 , 分别放置 0 , 2 , 4 , 8 , 12 h 后 ,分别进样 20 μL ,依
法测定 , 硫酸阿托品及羟苯乙酯峰高的 RSD分别为2 . 01%
和1. 79%,表明样品溶液 12 h 内含量稳定。
2. 7 加样回收率试验 精密量取 6 份已知含量的颠茄合
剂 ,分别准确加入“2 . 2 . 1”项下混合对照品液 1. 2 , 1 . 5 , 1 . 8
mL , 按“ 2. 3”项下方法制成样品液 ,测定峰高并计算回收率 ,
表 1 回收率试验结果
Tab 1 The re sult o f recovery test
硫酸阿托品 羟苯乙酯
取样量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
取样量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
7. 99 12. 00 19. 80 98. 42 120. 21 240. 00 357. 57 98. 90
7. 99 12. 00 20. 26 102. 25 120. 21 240. 00 362. 71 101. 04
7. 99 15. 00 23. 16 101. 13 100. 02 1. 49 120. 21 300. 00 419. 91 99. 90 100. 24 0. 89
7. 99 15. 00 22. 98 99. 93 120. 21 300. 00 421. 05 100. 28
7. 99 18. 00 25. 72 98. 50 120. 21 360. 00 485. 25 101. 40
7. 99 18. 00 25. 97 99. 89 120. 21 360. 00 479. 99 99. 94
1173 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2006 Sep , Vol 26 , No. 09
结果见表 1。
2. 8 含量测定 精密量取样品 1 m L , 按样品溶液制备方法
制成样品液 ,测定峰高 , 按外标法计算含量 ,结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果(n=5)
Tab 2 Test r esults o f content deter mination o f sample(n=
5)
批号 硫酸阿托品(无水) 羟苯乙酯含量 /mg L-1 RSD /% 含量 /m g L- 1 RSD /%
20040916 13. 70 1. 56 211. 68 1. 66
20041009 14. 85 2. 31 275. 30 1. 93
20050414 15. 97 1. 02 240. 42 1. 88
[作者简介] 彭东明 ,男 ,副研究员 ,博士研究生 ,电话:0731-5151098 , E-mai l:pengdmf@ public. cs. h n. cn
3 讨论
试验中对不同比例甲醇 /乙腈-水组成的二元流动相进
行了考察 ,结果阿托品与山莨菪碱 、东莨菪碱等莨菪类生物
碱不易分离;在乙腈-水组成的流动相中加入庚烷磺酸钠后 ,
离子对试剂与莨菪类生物碱可形成中性离子对 , 增加了在固
定相中的溶解度 ,因而较大程度地改善了这些生物碱的分离
度;但对羟苯乙酯比阿托品的保留时间约长 7 min , 不利于医
院制剂的快速分析;流动相中加入少量的无水乙醇 , 能较大
程度地缩短对羟苯乙酯的出峰时间 , 而对阿托品等莨菪类生
物碱影响不大 ,因而可大大地提高分析效率。
合剂中的羟苯乙酯主要起抑菌防腐作用 , 如其含量偏
低 ,不能有效抑制微生物的生长 , 含量过高 , 容易引起不良反
应 ,因此 ,有必要建立含量测定方法 , 对该制剂进行全面的质
量控制。试验证明 ,用本方法能同时测定合剂中阿托品及羟
苯乙酯 , 操作简单快速 、回收率高 、精密度好 , 适于医院制剂
的快速分析。
参考文献:
[ 1]  潘学田主编. 中国医院制剂规范[ M] . 第 2版. 北京:中国医药
科技出版 , 1995. 60.
[ 2]  金鸣 ,张福荣 ,蔡向阳 , 等. 高效液相色谱法快速测定人血 、尿
中阿托品[ J] . 中国医院药学杂志 , 2005 , 25(5):426.
[ 3]  李惠芬 ,张伟庆 ,张晓梅 ,等. 应用离子对色谱技术同时测定天
仙中的三种生物碱[ J] .中草药 , 1999 , 30(3):184.
[ 4]  林梅 ,张正行 ,安登魁 ,等. 高效毛细管电泳分离测定颠茄制剂
中莨菪类生物碱[ J] . 中草药 , 1998 , 29(8):518.
[ 5]  朱若华 ,苏文斌, 叶能胜 ,等. 薄层扫描法测定洋金花中 3种莨
菪生物碱的研究[ J] .分析实验室 , 2003 , 22(4):56.
[ 6]  祝明 ,胡梅素. 分光光度法测定颠茄片中莨菪类生物碱的含量
[ J] . 中国现代应用药学杂志 , 2001 , 18(1):51.
[ 收稿日期] 2005-10-19
注射用尼莫地平的处方制备及稳定性
考察
彭东明1 ,黄可龙1 ,周如仁2  (1. 中南大学化学化工学
院 ,湖南 长沙 410083;2. 长沙中南药物研究所 , 湖南 长沙
410007)
[ 摘要]  目的:研制注射用尼莫地平 , 并进行稳定性考察。
方法:采用正交试验法筛选最佳处方 , 加入乙醇 、聚山梨醇 80
为助溶剂和甘露醇为支架剂制成粉针剂;注射用尼莫地平在
强光(4 500±500) Lx , RH 75%、RH 92 . 5%, 高温(60 ℃)条
件下放置 10 d , 考察样品的性状 、pH 值 、溶液的澄清度及颜
色 、水分 、有关物质 、含量。 结果:样品稳定性考察除光照条
件不稳定外 ,其他条件下的各项指标均无明显变化。结论:
本制剂制备工艺简单 ,稳定性较好。
[ 关键词]  注射用尼莫地平;制备;稳定性考察
[ 中图分类号] R944  [ 文献标识码] A  [ 文章编号] 1001-5213
(2006)09-1174-03
  尼莫地平为第二代二氢吡啶类药物 , 主要作用于血管
平滑肌细胞膜上的钙通道 , 且能解除去甲肾上腺素 、5-羟色
胺 、前列腺素和组胺等血管活性物质和血液分解物引起的
血管痉挛 , 并能对抗钾离子外流所致的细胞去极化 ,对缺血
性脑损伤有保护作用。 临床上主要用于治疗:蛛网膜下腔
出血 、偏头痛 、脑梗死 、高血压脑出血 、脑损伤后脑功能恢
复[ 1 ~ 3] 。
国内目前使用的尼莫地平制剂有胶囊剂 、注射液 , 未见
注射用尼莫地平上市。考虑到粉针剂稳定性优于注射剂 ,运
输方便等 ,为了满足临床用药的需要 , 我们研制了尼莫地平
的粉针剂 ,并对其进行了稳定性考察。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 FDU - 506 型冷冻干燥机(日本);pH s- 3C 型
精密 pH 计(上海精科);KFS- 610 型卡氏水分测定仪(上海
大中分析仪器厂);高效液相色谱仪:Wate rs 515 泵 、2487 紫
外检测器 、7725 i手动进样器(美国Waters 公司)。
1. 2 试药 尼莫地平对照品(郑州瑞康制药有限公司);甘
露醇;乙醇;聚山梨醇 80;柠檬酸钠;活性炭。
2 注射用尼莫地平的制备
2. 1 制剂 pH 值的确定 参照相关文献报道[ 4] , 其 pH 暂定
5 . 5 ~ 7. 5。尼莫地平的 pH 值偏酸性 , 选择 10%柠檬酸钠溶
液为 pH 值调节剂。
2. 2 因素和水平的确定 在预试验基础上 , 确定考察因素
为乙醇用量(A)、聚山梨醇 80 用量(B)、甘露醇用量(C), 每
个因素安排 3 个水平进行优化 ,试验因素与水平安排见表 1。
表 1 因素水平设计表(%)
Tab 1 P roject o f factor s and levels(%)
因素水平 A B C
1 5 5 5
2 10 7. 5 10
3 15 10 17. 5
2. 3 处方筛选 按照 L9(34)正交表的设计 , 观察冷冻干燥
之前的样品溶液澄清度及样品外观 、溶解性 , 作为考察标准
进行综合评分。结果见表 2 及表 3。
从表 3 方差分析结果可知:A 、B 、C 因素差异具有显著性
(P<0 . 05),即:甘露醇 、聚山梨醇 80 及乙醇加入量均有显著
影响 ,但甘露醇的加入量对其影响最大。由极差分析可得 ,
对处方的影响顺序为:C>B>A , 即:甘露醇>聚山梨醇 80>
乙醇;C 因素中 C3 >C2 >C1 , 选择最好水平 C3 , B 因素中 B2
>B3 >B1 ,选择最好水平 B2 , A因素中 A2 >A3 >A1 , 选择最
好水平 A 2 , 直观分析结果表明最佳工艺组成为 A2B2C3 。即
甘露醇 35 . 0g , 乙醇 20 mL ,聚山梨醇 80 为 15 mL 。
1174 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2006 Sep , Vol 26 , No. 09