全 文 ：复方土牛膝口腔喷雾剂的研制
叶沛光 1 ,龙晓英 2 ,卢绮雯 2 ,黄　洁 2
(1.东莞市人民医院 药剂科 ,广东 东莞 523018;2.广东药学院 药剂学教研室 ,广东 广州 510006)
摘要:目的通过口腔喷雾剂使有效成分直接达到治疗部位 ,提高疗效 ,同时增加患者的顺应性。方法用正交试验法 ,优选复方土牛膝
口腔喷雾剂有效成分的提取工艺条件 ,比较醇沉法和吸附沉淀法对腺苷含量的影响 ,通过增加溶解度、矫味及防腐设计口腔喷雾剂处
方及工艺 ,采用高效液相色谱法测定腺苷含量。结果有效成分的最优提取工艺条件为:加 8倍水量煎煮 3次 ,每次 1. 5 h,加入 3%(ρ)
吐温 - 80增加溶解度 , 0. 06%(ρ)阿斯巴甜和 0. 1%(ρ)薄荷脑调整口感 , 复方土牛膝喷雾剂中腺苷的含量为 153. 2μg /mL。结论复方
土牛膝口腔喷雾剂中有效成分的提取工艺合理 ,质量可控。
关键词:口腔喷雾剂;正交试验;质量控制
中图分类号:R944　文献标识码:A　文章编号:1006 - 8783(2006)03 - 0249 - 04
作者简介:叶沛光(1952 -),男 , 大学本科 , 副主任药师 ,从事
医院药学工作;通讯作者:龙晓英 , 女 , 教授 , 电话:39352117。
Preparation of ora l spray compound Achyran thes aspera
YE Pei-guang1 , LONG Xiao-y ing2 , HUANG Jie2 (1. D epartm ent of Pharmacy , Peoples Hospital of Dongguan , Dongguan 523018 ,
China;2. Guangdong College of Pharmacy , Guangzhou 510006 , China)
Abstract:Objective To optim ize the preparation procedu re of o ra l sp ray of compound Achyran thes aspera. M ethods Com pound
Achyranthes aspera mainly consisted ofAchyran thesaspera roo t, roughhaired ho lly roo t andRhizoma etRad ixBaph icacanth isCusiae. The
ex traction conditions were optim ized by orthogonal design based on the content of adenosine detected w ithHPLC. Results The op tim a l
ex traction conditions fo r adenosine were three tim es of decoc tion, 1. 5 h per tim e, 3% o f Tw een -80, 0. 06% o f aspartam e and 0. 1%
o fm entho.l The final content of adenosine in the oral spray was 153. 2 μg /m .l Conclusion The op tim ized ex traction cond itions are
re liable and suitable fo r the quality con tro l o f ora l spay of com poundAchyran thes aspera.
K ey words:oral spray;or thogonal test;qua lity contro l
　　复方土牛膝口腔喷雾剂处方来源于临床应用 20
多年的医院制剂复方土牛膝合剂 ,该方主要由土牛膝 、
岗梅根和南板蓝根等药材组成 ,具有清热解毒 、活血散
瘀 、利水渗湿的功效 ,临床上治疗急性扁桃体炎 、咽喉
炎等效果显著。咽喉炎是上呼吸道的常见疾病 ,患有
不同程度咽喉炎病人占人群的 40%。本文将其研制
成土牛膝口腔喷雾剂 ,主要目的是使药物直达作用部
位 ,提高疗效 ,而且可增加患者服用的顺应性。
1　仪器与试药
1. 1　仪器
日本岛津高效液相色谱仪:LC—COATUP泵 ,
SCL—COAVP控制器 , SPD— COAVP检测器 , CTO—
10ASUP控温箱 , LCso lution工作站;离心沉淀机 (上海
医用分析仪器厂);数显恒温水浴锅(金坛市富华仪器
有限公司)。
1. 2　试药
岗梅对照药材 (批号:121152 - 200502,中国药品
生物制品检定所),腺苷对照品(批号:879 - 200202,中
国药品生物制品检定所),土牛膝药材 、岗梅根药材及
南板蓝根药材均购于广东省东莞国药集团中药饮片有
限公司 ,经广东药学院生药教研室刘基柱副教授鉴定。
吐温 -80(上海申宇医药化工有限公司),壳聚糖 (上
海伯奥生物科技有限公司),薄荷脑(安徽巨邦香料有
限公司),尼泊金乙酯(天津市大茂化学试剂厂),阿斯
巴甜(美国 nutrasw eet公司),其余试剂均为分析纯。
2　实验部分
2. 1　提取有效成分
根据文献报道 ,板蓝根中以腺苷作为定量指标 [ 1] ,
经预试验发现本文所用三种药材都含有腺苷 ,见图 1,
所以以腺苷作为考察提取工艺及制剂质量标准中含量
测定的指标成分。
2. 2　提取工艺
2. 2. 1　正交试验设计 　根据传统汤剂的提取方法以
及剂型的需要 ,按表 1及表 2选定加水倍量 、煎煮时
间 、煎煮次数为考察因素 ,以干膏得率 ,总腺苷含量为
考察指标 ,选用 L9(3)4正交表进行试验。
表 1　因素水平表
Tab. 1　Factors and leve ls in orthogonal test design
水平
因素
A B C
加水倍量 /倍 t(煎煮时间) /h 煎煮次数 /次
1 10 1. 5 3
2 8 1. 0 2
3 6 0. 5 1
249
第 22卷第 3期 广　东　药　学　院　学　报 Vo.l 22 No. 3
2006年 6月 JOURNALOFGUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY Jun. 2006
图 1　药材水煎液 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatogram s of the water decoction of compoundAchyran thes aspera
2. 2. 2　样品溶液的制备　称取土牛膝 、岗梅根和南板
蓝根等药材适量 ,共 9份。按表 2正交试验 1 ～ 9号条
件提取 ,过滤 ,浓缩至 1 mL含 1. 5 g原生药材的供试
液。将 9份供试液平均分成两份 ,一份直接测定总腺
苷含量 ,另一份作醇沉处理 ,先加 95%(φ)乙醇使之含
醇量约 50%,放置 24 h,离心取上清液 ,上清液再加
95%(φ)乙醇使之含醇量达 80%,放置 24 h,离心取上
清液 ,上清液浓缩至每 1 mL含 1. 5 g原药材的供试液
后测定总腺苷含量。
2. 2. 3　指标测定方法 　干膏得率测定:定量取 “2. 2.
2”项下的 1 ～ 9号供试液各 10 mL ,于已恒重的蒸发皿
中 ,水浴蒸干 ,置(80+1)℃的烘箱中干燥至恒重 ,取出
放置干燥器中 0. 5 h,精确称重 ,计算干膏得率 ,结果见
表 2。
总腺苷含量的测定:高效液相色谱测定总腺苷的
含量 [ 2] 。色谱条件:DiamonsilTM (钻石 )C18色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm);甲醇-pH6. 5磷酸盐缓冲液(体积
比 7∶93)为流动相;柱温为 35 ℃;流速 1. 0 mL /m in;检
测波长 260 nm;进样量:10 μL。结果见表 2。
表 2　正交设计实验结果
Tab. 2　Resu lts of orthogonal test
试验
号 A B C
干膏
得率 /
%
ρ/(μg mL- 1)
总腺苷 醇沉后总腺苷
1 1 1 3 10. 23 85. 72 77. 89
2 1 2 2 9. 266 73. 11 65. 58
3 1 3 1 5. 925 63. 61 62. 14
4 2 1 2 8. 957 84. 42 78. 71
5 2 2 1 7. 237 61. 94 61. 32
6 2 3 3 9. 137 87. 19 79. 98
7 3 1 1 6. 935 68. 09 66. 72
8 3 2 3 9. 582 84. 45 78. 44
9 3 3 2 8. 469 80. 73 78. 03
K1 8. 474 8. 707 9. 650
干膏 K2 8. 444 8. 695 8. 897
得率 K3 8. 329 7. 844 6. 699
R 0. 145 0. 8637 2. 951
K1 74. 147 79. 41 85. 78
总腺苷 K2 77. 85 73. 167 79. 42
含量 K3 77. 757 77. 177 64. 547
R 3. 61 2. 233 21. 24
2. 2. 4　方差分析　干膏得率及总腺苷含量的方差分
析结果见表 3及表 4。
表 3　干膏得率方差分析
Tab. 3　Var iance analysis of the yield of extracts
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 显著性
A 0. 03515 2 0. 17575 0. 096206 P >0. 05
B 1. 470841 2 0. 73542 4. 0257 P >0. 05
C 14. 10511 2 7. 052554 38. 60577 P <0. 05
误差 0. 365363 2 0. 182681
表 4　腺苷含量方差分析
Tab. 4　Variance analysis of adenosine content
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 显著性
A 26. 7554 2 13. 3774 7. 197452 P >0. 05
B 60. 0470 2 30. 02354 16. 15317 P >0. 05
C 712. 888 2 356. 444 191. 7729 P <0. 05
误差 3. 71735 2 1. 858678
　　表 2直观分析与表 3表 4方差分析的结果表明 ,
对提取有效成分影响最大的因素是煎煮次数 ,最佳工
艺为 A2B1C1 ,即加 8倍水 ,煎煮 1. 5 h,煎煮 3次。同
时 ,从表 2可知用醇沉法处理后 ,总腺苷的含量无显著
减少。
2. 2. 5　醇沉法与吸附澄清法纯化有效成分的比较 [ 3]
　按上述最佳工艺制备每 1 mL含 1. 5 g原生药材的
供试液 ,平均分成两份。一份用醇沉法进行处理 ,乙醇
的用量见 “2. 2. 2”;一份加 1%(φ)壳聚糖溶液作为澄
清剂处理 ,加入后使壳聚糖的质量分数达 0. 1%[ 4] 。
结果用醇沉法处理的样品总腺苷的含量为 89. 24 μg /
mL ,用壳聚糖作澄清剂处理的样品总腺苷的含量为
90. 94 μg /mL,均高于正交试验的任何一个工艺 ,但两
者之间并无明显差异。
2. 3　制剂工艺
2. 3. 1　处方设计　按上述最佳工艺制备每 1mL含 1.
5 g原生药材的供试液 ,按 “2. 2. 2”项加入乙醇沉淀去
除杂质后 ,继续浓缩至稠膏状 ,进行制剂处方设计。
2. 3. 2　增加溶解度 　口腔喷雾剂(ρ药材 =4. 5 g /mL)
250
广东药学院学报 , 2006, 22(3)
比合剂浓度 (ρ药材 =1. 5 g /mL)高 3倍 ,溶液底部出现
沉淀物 ,本文采用加入表面活性剂的方法增加溶解度 ,
以满足制剂要求的最低用量为原则 [ 3] ,按表 5加入质
量浓度 0. 5% ～ 10%的吐温 -80,以溶液不出现沉淀为
考察指标。
表 5　吐温 -80含量对浓缩液中沉淀物溶解度的影响
Tab. 5 　E ffect ofTw een -80 on solub ility of the extracted
preparation
ρ(吐温 -
80) /% 0. 5 1 3 5 10
沉淀
大量沉
淀 ,且振
摇沉淀
不溶解
中量沉
淀 ,振摇
仍少量
不溶解
少量沉
淀 , 振摇
沉淀完
全溶解
基本无
沉淀 ,但
吐温味
较大
完全无
沉淀 ,吐
温味强
烈
　　结果表明 ,吐温 - 80的质量浓度达 3%即可明显
改善溶液的溶解状况。
2. 3. 3　矫味　口腔喷雾剂还应考虑口感 ,以增加患者
使用的顺应性 ,经预试验 ,按表 6选择 3种矫味剂调节
口感。
表 6　矫味剂对口感的影响
Tab. 6　E ffect of aspartame andmenthol on taste
阿斯巴甜
(0. 6 mg /mL)
甘草甜素
(0. 5mg /mL)
薄荷脑
(1 mg /mL) 　　　口感
+ - - 味微甜 ,少量吐温味
- + - 味清甜 , 少量吐温味 ,底部有沉淀
- - + 味极苦 ,有清凉感
+ + - 味甜 , 少量吐温味 ,底部有沉淀
+ - + 味微甜 ,有清凉感
+ + + 味甜有清凉感 , 底部有沉淀
　　根据表 6,选择矫味剂为阿斯巴甜 (用量为 0. 6
mg /m L)和薄荷脑溶液(用量为 1 m g /mL)口感较好 ,底
部没有沉淀。
2. 3. 4　防腐剂　口腔喷雾剂为多剂量口服液体制剂 ,
应加入适当防腐剂。选择添加 0. 3 mg /mL尼泊金乙酯
为防腐剂。
2. 3. 5　复方土牛膝口腔喷雾剂的处方与工艺　根据
上述结果可得复方土牛膝口腔喷雾剂的处方为原生药
材的 100 mL溶液中含适当比例的土牛膝 、岗梅和南
板蓝根 450 g , 阿斯巴甜 60 m g,吐温 - 80 3 g,薄荷脑
0.1 g。制备工艺为:取土牛膝 、岗梅和南板蓝根等药
材 ,加 8倍的水煎煮 3次 ,每次 1. 5 h,过滤 ,合并滤液 ,
浓缩至每 1 mL含 2 g原生药材 ,加 95%(φ)乙醇至溶
液含醇量为 50%,静置 24 h,离心取上清液再加 95%
(φ)乙醇至含醇量为 80%, 静置 24 h离心取上清液浓
缩成浸膏状 ,加吐温 - 80混匀 ,加入适量水溶解搅拌
至溶解 ,加入 60 m g的阿斯巴甜和 0. 1 g薄荷脑 ,溶解
混匀 ,用水稀释至刻度 ,灌装入棕色喷雾剂瓶中即制得
复方土牛膝口腔喷雾剂。
2. 4　制剂质量控制
2. 4. 1　性状　本产品包装容器为棕色喷雾剂容器 ,体
积 20 mL,内为棕色液体。
2. 4. 2　岗梅的薄层鉴别 [ 6] 　取复方土牛膝喷雾剂 10
mL ,加 10 mL乙酸乙酯萃取 1次 ,萃取液水浴蒸干 ,残
渣用 5 mL甲醇溶解 ,作供试品溶液。取岗梅对照药材
2 g,加水 20 mL ,水浴加热回流 2 h,滤过 ,用乙酸乙酯
萃取 2次(5 mL , 5 mL),合并乙酸乙酯萃取液 ,水浴蒸
干 ,残渣加甲醇 0. 2 mL溶解 ,制成对照药材溶液。按
供试液制备方法不加入岗梅制成阴性对照液。取上述
3种溶液各 5μL,照中国药典 2005年版附录 VI B进行
试验 ,以硅胶 G薄层板为材料 ,苯-乙酸乙酯-水 (体积
比 5∶2∶0. 1)为展开剂 ,点样 、展开 、取出 、晾干 ,在紫外
灯(254 nm下)检视 ,供试品色谱中 ,在与对照药材色
谱相应的位置上 ,显相同颜色斑点 ,阴性对照液在相应
位置上未见该斑点。
图 2　岗梅 TLC图谱
F ig. 2　TLC of holly root
2. 4. 3　含量测定
2. 4. 3. 1　色谱条件 　DiamonsilTM (钻石 )C18色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm);流动相为甲醇-pH6. 5磷酸盐缓
冲液(体积比 6. 5∶93. 5);柱温 35 ℃;流速 1. 0 mL /
m in;检测波长:260 nm;进样量:10 μL ,色谱图见图 3。
2. 4. 3. 2　标准曲线 　精密量取腺苷对照品贮备液
(123. 4 μg /mL)10. 00、20. 00、30. 00、40. 00、50. 00 mL,
分别置于 100 mL的量瓶中 ,用双蒸水溶解并稀释至刻
度得到 12. 3、24. 6、36. 9、49. 2、61. 5 μg /mL的标准溶
液。各精密量取 10 μL进样 ,以腺苷浓度 (ρ)为横坐
标 ,相应的峰面积 (A)为纵坐标作图 ,绘制标准曲线 ,
其回归方程为:A=2. 9257ρ- 1. 4274, r=0. 9995(n =
5)。可见腺苷在 12. 3 ～ 61. 5 μg /mL浓度范围内线性
关系良好。
251
第 3期　叶沛光 ,等.复方土牛膝口腔喷雾剂的研制
图 3　复方土牛膝口腔喷雾剂的 HPLC图谱
Fig. 3　HPLC chromatogram s of oral spray of compound Achyran thes aspera
2. 4. 3. 3　精密度试验 　精密量取腺苷对照品溶液
(30. 85μg /mL)10μL,连续进样 6次 ,结果腺苷峰的平
均响应值为 872 878, RSD =0. 69%(n =6)。
2. 4. 3. 4　加样回收试验　精密量取腺苷对照品 0. 276
mg , 0. 399 mg及 0. 523. 1 mg ,加入 1 mL已知含量的样
品中 ,双蒸水溶解并稀释至 10 mL ,精密量取稀释液 10
μL进样 ,计算加样回收率。结果 ,高 、中 、低 3个浓度
的回收率分别为 99. 9%, 100. 2%和 99. 54%, RSD分
别为 0. 88%, 1. 27%及 1. 56%。
2. 4. 3. 5　样品含量测定 　分别精密量取 3批次的制
剂各 20 mL,置于 100mL的量瓶中 ,加双蒸水稀释至刻
度 , 0. 45 μm微孔滤膜过滤 , 10 μL测定含量 ,记录色谱
图 ,并根据标准曲线计算含量结果 , 3个批号样品
(060518, 060522, 060525)的腺苷含量分别为 157. 9
μg /mL , 151. 9μg /mL, 149. 9μg /m L,平均 153. 2μg /mL。
3　讨论
本实验以干膏得率和总腺苷的含量为优选有效成
分提取工艺考察指标 ,正交试验的方差分析和极差分
析表明:因素 C对干膏得率和总腺苷含量的影响非常
显著(P <0. 05),因素 A和因素 B对干膏得率和总腺
苷含量的影响均无显著意义 (P >0. 05)。从节省能源
及缩短时间考虑 ,选择最佳提取工艺条件为 A2B1C1 ,
即加 8倍水 ,煎煮 3次 ,每次 1. 5 h, ,按最佳工艺获得
的总腺苷含量高于正交设计的 9个实验 ,说明最佳工
艺合理。
从表 2看出 ,加入乙醇沉淀杂质会造成总腺苷含
量降低 ,但降低不显著。加入壳聚糖溶液作为澄清剂
对腺苷含量影响也不大 ,最后选择醇沉法是因为采用
醇沉法获得沉淀物质明显多于吸附澄清剂法 ,溶液澄
清度较高 ,即醇沉法沉淀较完全 ,能除去更多杂质 ,对
保证产品质量比较有利。
口腔喷雾剂因给药剂量不能太大 ,需要提高浓度
来减小给药剂量。本制剂通过加入一定量的吐温 - 80
作为增溶剂 ,以增加制剂的溶解度。吐温 - 80是最常
用增溶剂 ,口服安全 ,实验表明吐温 - 80的用量在 3%
以上均能达到较好的增溶效果 ,但根据辅料用量以满
足制剂要求的最低使用量原则及口感 ,最后决定采用
3%的质量浓度。
中药制剂一般味道较苦需要加入矫味剂改善口
感 ,以利于服用 [ 7] 。实验表明 ,添加阿斯巴甜和薄荷脑
不但能有效地掩盖制剂的苦味 ,也改善制剂的气味。
添加甘草甜素也能掩盖制剂的苦味 ,但发现底部出现
沉淀 ,这也许与干草甜素溶解度较小有关。
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(收稿日期:2006 - 06 - 08)
252
广东药学院学报 , 2006, 22(3)