全 文 :孔雀柏化学成分研究
蔡 旭1,2,宋启示2,杨剑坤3,卢志远2,陈科力1,张玉梅2*
(1.湖北中医药大学,教育部中药资源与中药复方重点实验室,湖北 武汉430065;
2.中国科学院西双版纳热带植物园 热带植物资源可持续利用重点实验室,云南 昆明650223;
3.云南省环境科学研究院,云南 昆明650034)
摘 要:目的:研究孔雀柏(Chamaecyparis obtusa cv.Tetragon)的化学及活性成分。方法:综合运用工
业甲醇提取、碱溶酸沉,通过硅胶柱、Sephadex LH-20、C18反相硅胶以及制备液相等色谱方法分离纯化,
并采用 MS和NMR等波谱学方法鉴定化合物结构,测试各化合物的细胞毒活性。结果:分离并鉴定了
8个化合物,分别为catechin(1)、taxifolin-3-O-β-D-xylopyranoside(2)、icariside E4(3)、(-)arctigenin(4)、
savinin(5)、horsfieldin(6)、dihydrosesamin(7)和skimmin(8)。结论:此8个化合物均为在该植物中首次
分离得到。体外细胞毒活性筛选表明,孔雀柏的甲醇提取物及其总生物碱部位在体外对人肿瘤细胞株
A549、BGC-823、K562均具有一定的细胞毒活性。此8个化合物均无明显细胞毒活性,进一步活性测试
和化学研究尚在进行中。
关键词:孔雀柏;化学成分;细胞毒活性
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1673-2197(2015)12-0029-02
DOI:10.11954/ytctyy.201512012
收稿日期:2015-02-26
作者简介:蔡旭,湖北中医药大学硕士研究生,研究方向为中药资源与中药复方。
通讯作者:张玉梅,博士,中国科学院西双版纳热带植物园副研究员,研究方向为民族药。
孔雀柏(Chamaecyparis obtusa cv.Tetragon)是扁柏属
植物日本扁柏的一个栽培变种,主要分布于北美、日本及我
国台湾,我国有1种及其1变种[1]。该属植物有凉血、止血
之功效,用于治疗吐血、鼻衄、便血、尿血、慢性气管炎、失眠
及便秘等证,具有广阔的药用价值[2]。其含有的化合物大
多结构新颖,生物活性多样,很多具有抗肿瘤和抗病毒等活
性[3-5]。有关孔雀柏的化学及活性成分的研究献报道较少,
目前仅有本研究组前期从中分离得到一个新骨架的二萜生
物碱chamobtusin A[6]。为进一步寻找孔雀柏中的抗肿瘤
活性成分,笔者对孔雀柏的枝叶进行了较深入的化学与抗
肿瘤细胞毒活性研究。首次从其甲醇提取物中分离鉴定出
8个化合物,体外活性筛选表明其对人肿瘤细胞株 A549、
BGC-823和K562上尚无明显细胞毒活性。
1 仪器与材料
MS采用液相离子阱色谱质谱联用仪Bruker HCT/ES-
QUIRE测定;NMR采用BrukerAM-400和Bruker DRX-
500超导核磁共振仪测定;分离纯化采用安捷伦1100、岛津
LC-20A高效液相色谱仪;Sephadex LH-20(瑞士Pharmacia
公司);硅胶(青岛化工厂);RP-C18柱色谱材料(Merck公
司);TLC硅胶 H预制薄层板(青岛工厂),显色方法为254、
365nm荧光,10%硫酸乙醇溶液显色。
孔雀柏枝叶2013年5月采集于云南昆明,原植物经中
国科学院昆明植物研究所孙卫邦研究员鉴定为孔雀柏
Chamaecyparis obtusa cv.Tetragon。
2 提取与分离
取孔雀柏干燥枝叶22kg,粉碎后用工业甲醇冷浸提取
3次,减压回收甲醇得1.45kg总浸膏。总浸膏用热水分散
后,以稀 HCl酸化(pH2.0),用乙酸乙酯萃取四次,得乙酸
乙酯浸膏630g。所得水部分用NaOH碱化(pH10.0),用氯
仿萃取4次,回收氯仿得到总碱部分12.5g。剩余水部分用
稀 HCl调节pH7.0,再分别以氯仿和正丁醇萃取,得到正丁
醇部位浸膏456g。乙酸乙酯部位经硅胶色谱分离,用石油
醚-丙酮(10∶1→0∶1)系统梯度洗脱,得6个流分(Fr.7
~12)。Fr.8经反复硅胶色谱(石油醚-乙酸乙酯8∶1→2
∶1)、凝胶色谱(LH-20、氯仿-甲醇1∶1)分离纯化得到化合
物5(13mg)和化合物7(18mg)。Fr.11经反复硅胶色谱
(石油醚-乙酸乙酯8∶1→2∶1)、凝胶色谱(LH-20,氯仿
-甲醇1∶1)分离纯化得到化合物4(15mg)、化合物6
(17mg)、化合物1(30mg)。正丁醇部位经硅胶色谱用氯仿
-甲醇(9∶1→1∶1)系统梯度洗脱,得6个流分(Fr.1~
6)。Fr.1和Fr.3经反复凝胶色谱(LH-20、氯仿-甲醇1∶
1)、RP-C18(甲醇-水0∶100→30∶70)、HPLC(甲醇-水5
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∶95→20∶80)分离得到化合物 8(16mg)、化合物 2
(15mg)、化合物3(56mg)和化合物7(20mg)。
3 结构鉴定
化合物1:黄色针状结晶,分子式 C15H14O6,ESI-MS
m/z:289[M-H]-。1 H-NMR(CD3OD,500MHz):δ4.56
(1H,d,J=7.6Hz,H-2),3.99(1H,m,H-3),2.83(1H,d,J
=9.1Hz,Ha-4),2.59(1H,d,J =9.1Hz,Hb-4),2.59(1H,
d,J=9.1Hz,H-4),5.93(1H,d,J =2.2Hz,H-6),5.85
(1H,d,J=2.2Hz,H-8),6.83(1H,d,J=1.8Hz,H-2′),
6.76(1H,d,J=8.3Hz,H-5′),6.70(1H,d,J=8.3Hz,H-
6′);13C-NMR(CD3OD,125MHz):δ82.8(C-2),68.7(C-3),
28.5(C-4),157.5(C-5),96.4(C-6),156.8(C-7),95.6(C-
8),157.7(C-9),100.9(C-10),132.2(C-1′),115.3(C-2′),
146.2(C-3′),146.2(C-4′),115.3(C-5′),120.1(C-6′)。通过
波谱数据分析并与文献[7]比较,鉴定化合物1为catechin。
化合物2:黄色结晶,分子式C20H20O11,EI+-MS m/z:
435[M-H]-。1 H-NMR(CD3OD,400MHz):δ5.06(1H,d,J
=10.0Hz,H-2),4.73(1H,d,J=10.0Hz,H-3),5.88(1H,
d,J=2.0Hz,H-6),5.89(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.95
(1H,d,J=1.8Hz,H-2′),6.80(1H,d,J =1.8Hz,H-5′),
6.80(1H,d,J=1.8Hz,H-6′),3.82(1H,d,J=6.1Hz,H-
1)13C-NMR(CD3OD,100MHz):δ83.6(C-2),77.4(C-3),
195.7(C-4),165.4(C-5),96.4(C-6),168.9(C-7),97.4(C-
8),164.1(C-9),102.4(C-10),129.0(C-1′),115.3(C-2′),
146.2(C-3′),146.2(C-4′),116.2(C-5′),120.9(C-6′),
103.1(C-1〞),73.4 (C-2〞),75.8(C-3〞),70.8(C
-4〞),66.0(C-5〞)。通过波谱数据分析并与文献[8]比较,
鉴定化合物2为taxifolin-3-O-β-D-xylopyr-anosi-de。
化合物3:白色粉末,分子式C26H34O10,EI+-MS m/z:
506[M]+。1 H-NMR(CD3OD,400MHz):δ6.71(1H,s,H-
2),7.06(1H,s,H-6),2.60(2H,t,H-7),1.80(2H,m,H-
8),3.55(2H,m,H-9),7.01(1H,d,J=1.8Hz,H-2′),7.09
(1H,d,J=8.5Hz,H-5′),6.89(1H,dd,J=8.5,1.8Hz,H-
6′),5.53(1H,d,J=6.0Hz,H-7′),3.44(1H,m,H-8′),
3.80(2H,m,H-9′),5.33(1H,d,J=1.5Hz,H-1),3.76
(3H,s,3-OCH3),3.84(3H,s,3′-OCH3);13 C-NMR
(CD3OD,100MHz):δ137.1(C-1),114.0(C-2),145.2(C-
3),147.4(C-4),129.6(C-5),117.9(C-6),32.9(C-7),35.8
(C-8),65.2(C-9),138.8(C-1′),111.2(C-2′),152.1(C-3′),
146.5(C-4′),119.6(C-5′),119.1(C-6′),88.6(C-7′),55.6
(C-8′),65.1(C-9′),101.3(C-1〞),72.1(C-2〞),72.0(C
-3〞),73.8(C-4〞),70.8(C-5〞),18.0(C-6〞),56.4(3-
OCH3),56.7(3′-OCH3)。通过波谱数据分析并与文献[9]比
较,鉴定化合物3为icariside E4。
化合物4:无色油状,分子式C21H24O6,ESI-MS m/z:
371[M-H]-。其1 H-NMR和13 C-NMR图谱与本实验室对
照品(-)arctigenin图谱一致,TLC上的斑点位置及显色与
(-)arctigenin标准品相同。通过波谱数据分析并与文献[10]
比较,鉴定化合物4为(-)arctigenin。
化合物5:白色结晶,分子式C20H16O6,EI+-MS m/z:
352[M]+。其1 H-NMR和13 C-NMR图谱与本实验室对照
品savinin图谱一致,TLC上的斑点位置及显色与savinin
标准品相同。通过波谱数据分析并与文献[10]比较,鉴定化
合物5为savinin。
化合物6:白色针状结晶,分子式 C20H20O6,EI+-MS
m/z:356[M]+,。其1 H-NMR和13C-NMR图谱与本实验室
对照品horsfieldin图谱一致,TLC上的斑点位置及显色与
horsfieldin标准品相同。通过波谱\数据分析并与文献[10]比
较,鉴定化合物6为horsfieldin。
化合物7:无色结晶,分子式C20H20O6,ESI-MS m/z:
339[M-OH]-。其1 H-NMR和13C-NMR图谱与本实验室对
照品dihydrosesamin图谱一致,TLC上的斑点位置及显色
与dihydrosesamin标准品相同。通过波谱数据分析并与文
献比较[10],鉴定化合物7为dihydrosesamin。
化合物8:白色粉末,分子式C20H16O6,其1 H-NMR和13
C-NMR图谱与本实验室对照品skimmin图谱一致,TLC上
的斑点位置及显色与skimmin标准品相同。通过波谱数据
分析并与文献[11]比较,鉴定化合物8为skimmin。
4 结论
本研究从采自云南昆明的孔雀柏中首次分离鉴定了
catechin(1)、taxifolin-3-O-β-D-xylopyranoside(2)、icariside
E4(3)、(-)arctigenin(4)、savinin(5)、horsfieldin(6)、di-
hydrosesamin(7)和skimmin(8)等8个化合物。体外活性
测试结果显示,孔雀柏甲醇总提物在A549、BGC-823、K562
肿瘤细胞株上均具有一定细胞毒活性(IC50=2.47,3.88,
32.48μg/mL),孔雀柏总生物碱部分在 K562肿瘤细胞株
上具有一定细胞毒活性(IC50=5.29μg/mL)。本文中所分
离得到的8个单体化合物对 A549、BGC-823和 K562肿瘤
细胞株均无明显细胞毒活性,提示该植物中可能还有其他
细胞毒活性小分子化合物,为其活性成分的进一步开发研
究及临床应用奠定了试验基础。
参考文献:
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消食导滞散的制备及临床应用
李海波,谢 立
(云梦县中医院,湖北 孝感432500)
摘 要:目的:制备消食导滞散并观察其临床疗效。方法:采用粉粹混合法制备内服散剂消食导滞散,采
用薄层色谱法对其有效成分山楂进行定性分析,并观察其消食导滞的效果。结果:该制备工艺简便易操
作、稳定可行,所制得的消食导滞散对小儿厌食症的总有效率为84.76%,对小儿积滞的总有效率为
88.62%。结论:采用传统工艺制备消食导滞散质量可控,疗效确切,适合于大规模生产,满足医院临床
用药的需求。
关键词:消食导滞散;制备;薄层色谱鉴别法;临床应用
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1673-2197(2015)12-0031-02
DOI:10.11954/ytctyy.201512013
收稿日期:2015-02-26
作者简介:李海波(1969-),男,湖北省云梦县中医院主管中药师,研究方向为儿科临床药学。
Preparation and Clinical Application of Xiaoshi Daozhi Powder
Li Haibo,Xie Li
(Yunmeng Hospital of Traditional Chinese Medicine,Xiaogan 432500,China)
Abstract:Objective:To prepare Xiaoshi Daozhi powder and observe its clinical therapeutic effect.Methods:Using pure powder
prepared by mixing oral powder;qualitative analysis of hawthorn with thin layer chromatography;and make clinical observation.Re-
sults:The preparation technology is simple and practical,stable quality,efficiency of 84.76%on infant ileanorexia;children reten-
tion efficiency of 88.62%.Conclusion:Using traditional techniques for preparing oral powder,controlable quality,curative effect,is
suitable for mechanization production scale,meet the clinical drug use in hospital.
Keywords:Xiaoshi Daozhi Powder;Preparation;TLC;Clinical Application
消食导滞散(制剂批准文号为鄂药制字Z20112551)系
我院享受国务院政府津贴的名老中医妇儿科专家谢伯豪老
先生通过长期临床实践总结的经验方,其疗效显著,安全稳
定,为我院疳儿科参评“湖北省中医疳病医疗中心”发挥了
积极作用,成为我院制剂室品牌产品。目前,该制剂已被
《湖北省医疗机构制剂规范》2011年版上篇收载[1]。30多年
的临床实践证明其对小儿厌食、积滞疗效可靠,受到广大患
儿家属的欢迎,现将其制备工艺及临床应用介绍如下。
1 设备与材料
XD-12型热风循环烘箱(湖南衡阳雁翔制药设备厂);
SF250组合式高速粉碎机(上海中药机械厂);消食导滞散处
方药材(购自安徽亳州市千草药业有限公司);熊果酸对照
品(中国食品药品检定研究院);其他试剂均为分析纯
。
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(责任编辑:尹晨茹)
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