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蕊木茎皮脂溶性成分及抗氧化活性研究



全 文 :蕊木(Kopsia lancibracteolata Merr.)为夹竹桃
科(Apocynaceae)蕊木属(Kopsia Bl.)植物, 广泛分
布于亚洲的热带亚热带地区[1]。 蕊木在民间具有广
泛的药用价值, 其根茎叶果液汁均可药用, 具有清
热、 消炎止痛、 去风活络、 消肿等疗效, 用于治疗
咽喉肿痛、 四肢麻木、 风湿麻痹、 水肿等病症[2]。
目前, 国内外诸多学者已对蕊木属植物中的海南蕊
木和云南蕊木化学成分的提取分离、 结构鉴定和生
理活性进行了研究。 至 21世纪初, 云南蕊木已经
分离鉴定了 20多种生物碱, 其吲哚类生物碱保肝
蕊木茎皮脂溶性成分及抗氧化活性研究①
陈 烁 1)② 王茂媛 2) 李文基 2) 王建荣 2) 张新蕊 2) 王祝年 1)③
(1 海南大学园艺园林学院 海南儋州 571737;
2 中国热带农业科学院品种资源研究所/
农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室 海南儋州 571737)
摘 要 首次运用气相色谱 -质谱联用技术(GC-MS)对蕊木(Kopsia lancibracteolata Merr.)茎皮脂溶性成分进行分
析 , 应用色谱峰面积归一化法定量分析各成分的相对百分含量 , 共分离鉴定出 43个化合物 , 占其总量的
80.45%。 含量较高的分别是反式-2-癸烯醛(10.29%)、 β-香树脂醇(10.04%)、 2-十一烯醛(8.61%)、 异大戟二烯
醇(5.49%)、 软脂酸(5.30%)等。 同时采用清除 DPPH自由基能力的方法对蕊木茎皮脂溶性成分进行抗氧化活性测
定, 结果显示一定的抗氧化活性, 其 IC50值为 0.83 mg/mL。
关键词 蕊木 ; GC-MS; 抗氧化活性
分类号 R284.2
Liposoluble Components and Their Antioxidant Activities from the Stems
and Barks of Kopsia lancibracteolata Merr.
CHEN Shuo1) WANG Maoyuan2) LI Wenji2)
WANG Jianrong2) ZHANG Xinrui2) WANG Zhunian1)
(1 Horticulture and Landscape Architecture College, Hainan University, Danzhou, Hainan 571737;
2 Tropical Crops Genetic Resources Institute, CATAS/Key Laboratory of Tropical Crops Germplasm
Utilization, Ministry of Agriculture, Danzhou, Hainan 571737)
Abstract The liposoluble components were extracted from Kopsia lancibracteolata Merr. from the stem
bark by petroleum ether extraction. The chemical constituents of the liposoluble components were first
analyzed by (GC-MS), 43 chromatographic peaks were separated and 43 compounds were identified,
occupying 80.45% of total amount. The main chemical components of the liposoluble components were
(E)-2-Decenal (10.29% ), β-Amyrin (10.04% ), 2-Undecenal (8.61% ), Hop-22 (29)-en-3-β-ol (5.49% ),
Palmitic acid (5.30%). The bioassay indicated that the liposoluble components from the stems and barks of
Kopsia lancibracteolata Merr. possessed antioxidant activity, with the IC50 value of 0.83 mg/mL.
Keywords Kopsia lancibracteolata Merr. ; GC-MS ; antioxidant activities
① 基金项目: 农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室开放基金项目(No.YJS-2009-S006); 农业部热作农技推广与体
系建设项目 “南药产业发展研究 ”(No.10RZNJ-47); 农业部热带作物种质资源保护项目 “南药种质资源保护 ”(No.
11RZZY)。
收稿日期: 2011-05-16; 责任编辑/兰 莹; 编辑部E-mail: rdnk@163.com。
② 陈 烁(1983~), 男, 内蒙古呼和浩特人, 硕士研究生。 研究方向: 植物资源与利用。
③ 通讯作者: 王祝年(1962~), 男, 研究员, 本科, 学士, 植物分类专家。
Vol.31, No.7
2011年7月 热 带 农 业 科 学
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE
第31卷第7期
July. 2011
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陈 烁 等 蕊木茎皮脂溶性成分及抗氧化活性研究
作用和抗高血压活性显著[3-4]; 海南蕊木根中总碱
部分具有明显的镇痛作用 [5]。 但蕊木(Kopsia
lancibracteolata Merr.)在国内尚无关于其脂溶性成
分及其含量分析的报道, 为有效开发蕊木资源, 寻
找其中有药用价值的生物活性成分 , 本研究用
GC-MS方法, 首次对蕊木茎皮的脂溶性成分及含量
进行了定性定量分析, 以期为蕊木的开发利用提供
科学依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
材料: 蕊木茎采集自海南省儋州市中国热带农
业科学院热带植物园内, 由中国热带农业科学院热
带作物品种资源研究所王祝年研究员鉴定为夹竹桃
科蕊木属植物蕊木(Kopsia lancibracteolata Merr.),
凭证标本(No.20090731)存放于中国热带农业科学
院热带作物品种资源研究所。
仪器 : HP6890/HP5973MSD GC/MS联用仪(美国
Hewlett-Packard公司); 紫外/可见分光光度计 UV-
2012型(上海Unico公司)。
试剂: 所用石油醚为工业产品, 重蒸后使用;
无水乙醇为分析纯(广州化学试剂厂); 2,2-Dipheny
l-1-picrylhydrazy(2,2-二苯基-1-苦肼基, DPPH)(Sigma-
Aldrich公司)。
1. 2 方法
1. 2. 1 醇提物的提取
取自然风干的蕊木茎皮用95%(体积分数)乙醇冷
浸, 减压回收乙醇, 得到蕊木茎皮的乙醇粗提物,
将蕊木乙醇粗提物加水悬浮, 用石油醚萃取, 减压
回收石油醚,取该提取物(油状)10mg作为供试品。
将提取物分散于水中成悬浊液, 经石油醚萃取后减
压浓缩得到92.5g浸膏。
1. 2. 2 GC-MS分析条件
气相色谱条件 : 色谱柱为 HP-5MS5%Phenyl
MethylSiloxane(30m×0.25mm×0.25μm)弹性石英毛
细管柱, 柱温45℃, 保留2min; 以 5℃/min升温
至320℃, 保持2min; 汽化室温度250℃; 载气为
高纯度He(99.999%); 柱前压7.62psi, 载气流量
1.0mL/min; 进样量 1μL; 分流比 40∶1, 溶剂延
迟时间4min。
质谱条件 : 离子源为 EI源 ; 离子源温度
230℃; 四极杆温度 150℃; 电子能量 70eV; 发射
电流 34.6μA; 倍增器电压 1 108 V; 接口温度
280℃; 质量范围20~450amu。
1. 2. 3 抗氧化性的测定
采用清除 DPPH自由基能力的方法测定 : 将
DPPH配制成 6.5×10-4mol/L的母液备用, 使用时
稀释浓度为 6.5×10-5mol/L。 测定时, 在试管中依
次加入 2.5mL的 6.5×10-5mol/LDPPH和 0.5mL试
样的溶剂(无水乙醇), 混匀后, 用1cm比色皿在517nm
波长处 , 测吸光度值 , 记为 A0; 加入 2.5mL的
6.5×10-5mol/LDPPH溶液和0.5mL试样混匀后测定
吸光度值, 记为 Ai; 加入2.5mLDPPH溶液的溶剂(无
水乙醇)和0.5mL试样混匀测定吸光度值, 记为 Aj。 样
品浓度设置 6个梯度: 1000μg/mL, 500μg/mL,
250μg/mL, 125μg/mL, 63μg/mL, 32μg/mL。 每
一吸光度平行测定3次, 取其平均值, 按以下公式
计算清除率:
清除率=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%
以样品浓度为横坐标, 以清除率为纵坐标作
图, 并求出清除率为 50%时样品的浓度(IC50), 样
品活性结果以半数清除浓度(IC50)表示。
2 结果与讨论
2. 1 脂溶性成分的GC-MS测试分析
按上述条件对蕊木茎皮的脂溶性成分进行
GC-MS分析, 通过HPMSD化学工作站, 结合NIST05
质谱图库和 WILEY275质谱图库进行鉴定, 确认了
其中的43个成分, 占总量的80.45%。 按峰面积归
一化法计算出各化学成分的相对含量, 结果见表
1。 在已鉴定的43个化学成分中, 主要化学成分为
醛类(33.57%)、 醇类(23.75%)、 脂肪酸类(12.33%)、 烷烃
类(8.59%)等。 另外, 从表1中看出, 鉴定的化合物
中存在较多的酯类化合物, 可能是提取过程中使用
的少量乙醇与脂肪酸发生酯化反应的产物。
2. 2 抗氧化活性测试分析
用清除 DPPH自由基能力的方法测定蕊木茎皮
脂溶性成分抗氧化活性, 结果显示一定的抗氧化活
性, 在测定浓度范围内呈现良好的剂量依赖性, 随
着浓度的增加, 抗氧化活性逐渐增强, 其 IC50值为
67- -
2011年7月 第31卷第7期热带农业科学
表 1 蕊木茎皮脂溶性部分的化学成分
编号No 保留时间RT 化合物 分子式 相对含量RC/%
1 6.86 (反式)-2-癸烯醛(e)-2-decenal C10H18O 10.289
2 9.22 (E,Z)-2,4-癸二烯醛(E,Z)-2,4-Decadienal C10H16O 0.785
3 10.12十一醛 Undecanal C11H22O 2.439
4 10.34 (E,E)-2,4-癸二烯醛(E,E)-2,4-Decadienal C10H16O 2.540
5 12.01十八醛Prunolide C9H16O2 0.354
6 12.20 2-十一烯醛2-Undecenal C11H20O 8.609
7 13.46月桂醛Dodecanal C12H24O 2.013
8 14.68肉桂酸乙酯Ethyl cinnamate C11H12O2 1.193
9 15.40十五烷Pentadecane C15H32 2.150
10 15.61十三碳醛Tridecanal C13H26O 1.396
11 16.80 (顺式)-7-十六烯(Z)-7-Hexadecene C16H32 0.238
12 16.99 13-十四烯醛13-Tetradecenal C14H26O 0.297
13 17.34十四烷醛Tetradecanal C14H28O 1.671
14 17.38 1,13-十四烷二烯1,13-Tetradecadiene C14H26 0.950
15 18.32 8-十七烷烯8-Heptadecene C17H34 0.736
16 18.63 2-十五烷酮2-Pentadecanone C15H30O 1.014
17 18.86十五醛Pentadecanal C15H30O 1.293
18 19.51甲氧基肉桂酸乙酯Ethyl p-methoxycinnamate C12H14O3 0.430
19 19.99 (顺式)-9-十六碳醛(Z)-9-Hexadecenal C16H30O 0.595
20 20.29十六碳醛Hexadecanal C16H32O 1.112
21 22.41软脂酸Palmitic acid C16H32O2 5.295
22 23.24 1,19-二十碳二烯1,19-Eicosadiene C20H38 0.296
23 23.82十七碳酸Margaric acid C17H34O2 0.201
24 24.76十八醛Octadecanal C18H36O 0.177
25 25.04亚油酸Linoleic acid C18H32O2 2.097
26 25.11油酸Oleic acid C18H34O2 1.225
27 25.39硬酯酸Stearic acid C18H36O2 1.891
28 32.66地蜈蚣草碱Ervinine C21H26N2O2 0.196
29 34.69二十八碳烷Octacosane C28H58 0.363
30 36.04二十九烷醇Nonacosan C29H60 0.603
31 37.36三十烷Triacontane C30H62 0.807
32 38.53正三十一烷Hentriacontane C31H64 1.490
33 38.64三十二烷Dotriacontane C32H66 0.717
34 38.79豆甾-3, 5-二烯Stigmastan-3,5-diene C29H48 0.712
35 39.98三十三烷Tritriacontane C33H68 0.372
36 40.44麦角甾-5-烯醇Ergost-5-enol C28H48O 0.795
37 40.84豆甾醇Stigmasterol C29H48O 0.801
38 41.58γ-谷甾醇Clionasterol C29H50O 2.932
39 42.07β-香树脂醇β-Amyrin C30H50O 10.037
40 42.57α-香树脂醇α-Amyrin C30H50O 3.096
41 42.69豆甾烯醇-3,5-二烯-7-酮Tremulone C29H46O 0.461
42 43.21豆甾-4-烯-3-酮Stigmast-4-en-3-one C29H48O 0.290
43 43.73异大戟二烯醇Hop-22(29)-en-3-β-ol C30H50O 5.489
0.83mg/mL(图 2)。 蕊木茎皮脂溶性成分中各化合
物中的不饱和键对清除 DPPH自由基有加和作用,
从而使其具有一定的抗氧化活性[6]。
3 讨论
GC-MS分析结果表明, 本研究首次从蕊木茎皮
中鉴定出在其脂溶性含量较高的几种香料成分, 包
括(反式)-2-癸烯醛、 2-十一烯醛、 月桂醛、 α-香
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陈 烁 等 蕊木茎皮脂溶性成分及抗氧化活性研究
树脂醇、 β-香树脂醇、 肉桂酸乙酯等。 其中(反
式)-2-癸烯醛、 2-十一烯醛在食品中含量非常低,
但对食品的香气非常重要, 有些甚至是食品特征香
气, 具非常强的扩散性, 这充分说明这类化合物阈
值是非常低 。 通过测定 , 它们的阈值均在0.5
μg/kg~10μg/kg[7]。 月桂酸是合成果香型香料月
桂酸乙酯的主要原料[8]。 亚油酸具有较强的清除羟
自由基的活性[9,10]。 异大戟二烯醇其成分接近石油
成分, 不含硫, 可以直接或与其它物质混合成原
油, 作为燃料油替代石油, 对降低污染和能源的可
持续利用具重大的意义[11]。 在蕊木茎的醇提物脂溶
性成分中甾体类的化合物含量相对较高, 据文献报
道发现植物甾醇结构与胆固醇
相似, 在生物体内以胆固醇相
同的方式吸收。 Becker[12]等研
究发现谷甾醇可明显降低人体
内血脂水平, 对心脑血管病的
防治有积极的意义。 蕊木在海
南分布广泛, 植物资源丰富。
应进一步推进其化学成分及生
理活性的研究, 深入开发其在
医药、 化工、 畜牧等方面的应
用潜力, 为丰富海南省药物资
源, 有效合理地开发与保护天
然资源提供科学依据。
参考文献
[1]中国科学院中国植物志编辑委
员会.中国植物志. Vol63.北
京; 科学出版社, 1977: 41.
[2]李宝强, 宋启示.云南蕊木枝叶化学成分研究.[J]中草
药, 2008, 39(9): .
[3]黄婉云, 刘耕陶.蕊木宁对小鼠实验性肝损伤的保护作
用.中国药理学报, 1989, 10(1): 65 .
[4]Mok S-L J Nat Prod.1998, 61(3): 328-332.
[5]周韵丽, 黄知恒, 等.云南蕊木生物碱的研究[J], 化
学学报, 1984,42(): 1315-1317.
[6]陆占国 , 郭红转 , 封 丹.芫荽茎叶精油成分及清除
DPPH自由基能力研究[J].食品与发酵工业, 2006(08):
24-27.
[7]张 华.反式 -2-烯醛类化合物和反 -2, 4-二烯醛类
化合物在香精中的应用[D].中国科学院上海冶金研究
所, 2000.
[8]袁金亮.微波辐射下合成月桂酸乙酯[J].香料香精化
妆品, 2006(6): 9-11.
[9]范学辉, 李建科, 张清安.核桃油对小鼠体内抗氧化酶
活性及总抗氧化能力的影响[J].西北农林科技大学学
报(自然科学版), 2004(11): 45- 48.
[10]崔月花, 章克昌.灵芝液体发酵清除自由基活性产物
发酵条件的优化[J].氨基酸和生物资源 , 2006, 28
(2): 27- 31.
[11]何 璐, 袁理春.云南干热河谷能源植物的开发利用.
[J].中国热带农业, 2008(1): .
[12]黄 琴.植物甾醇酯的合成及活性研究[D].湖北工业
大学, 2006.
图 1 蕊木茎皮石油醚部分脂溶性成分总离子流图
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图 2 蕊木茎皮脂溶性成分对 DPPH自由基的清除能力
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