全 文 ：国际药学研究杂志 2014年8月 第41卷 第4期 JIntPharmRes，Vol.41，No.4，August，2014
秀丽莓多糖 RAP-B-1理化性质及免疫活性
刁玉林 1，麻 浩 2，任晋玮 3，张贵强 2，李 帅 2，单俊杰 2，刘 斌 1
［摘要］ 目的 研究植物秀丽莓（Rubus amabilis）茎中分离得到的多糖RAP-B-1的理化性质以及免疫活性。 方法
秀丽莓茎经过水煎、醇沉、透析获得粗多糖（crudepolysaccharide，RAP）。RAP再经DEAE-纤维素和SephadexG-100柱色谱分离
得到相对分子质量均一的多糖RAP-B-1。采用完全酸水解、高碘酸氧化、Smith降解及甲基化反应，以及毛细管电泳（capillary
electrophoresis，CE）、红外（infrared radiation，IR）、磁共振（nuclear magnetic resonance，NMR） 和气相色谱-质谱联用（gas
chromatography-masspectrometry，GC-MS） 等方法研究其理化性质。采用小鼠脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞吞噬实验评价
RAP-B-1的免疫活性。结果 多糖RAP-B-1的峰位相对分子质量为4.80×104，比旋光度为[α]20D +68.3（c=1，H2O），其单糖组
成为木糖:阿拉伯糖:葡萄糖:鼠李糖:半乳糖:甘露糖:葡萄糖醛酸:半乳糖醛酸=1.0:6.9:0.8:1.1:6.9:0.3:0.5:3.3，推测RAP-B-
1主要为酸性阿拉伯半乳聚糖，其中阿拉伯糖的连接方式：→1）Ara（2，3→、→1）Ara（5→和→1）Ara；半乳糖的连接方式：→
1）Gal（4→、→1）Gal（6→和→1）Gal。生物活性评价结果表明RAP-B-1在1～50μg/ml范围内对小鼠脾脏T细胞有一定促增
殖作用（P<0.05），同时增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力（P<0.01）。结论 RAP-B-1为一种阿拉伯半乳聚糖，具有一定免疫
促进作用。
［关键词］ 秀丽莓；多糖；阿拉伯半乳聚糖；免疫活性
［中图分类号］ R931.6［文献标志码］ A ［文章编号］ 1674-0440（2014）-04-0461-07
DOI：10.13220/j.cnki.jipr 2014.04.014
Physicochemical properties of a polysaccharide RAP-B-1 from Rubus amabilis
and its immunomodulating effects
DIAO Yu-lin1，MA Hao2，REN Jin-wei3，ZHANG Gui-qiang2，LI Shuai2，SHAN Jun-jie2，LIU Bin1
（1.School of Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing100102，China；2.Beijing Institute of
Pharmacology and Toxicology，Beijing100850,China；3.State Key Laboratory of Mycology，Institute of
microbiology Chinese Academy of Science，Beijing100190，China）
［Abstract］ Objective To investigate the physicochemica l properties and immunobiological activity of a polysaccharide
（RAP-B-1） from stems of Rubus amabilis. Methods The crude polysaccharide （RAP） was obtained successively by boiling，
ethanol precipitating and dialyzing. RAP was isolated with DEAE-cellulose and Sephadex G-100 to obtain a polysaccharide RAP-B-1.
The physicochemical properties of RAP-B-1 were studied by hydrolysis，periodate oxidation，Smith degradation and methylation，
CE，IR，NMR and GC-MS. The immunobiological activities were estimated by the proliferative activity of spleen lymphocytes and
phagocytic activity of peritoneal macrophages in mice. Results The molecular weight of RAP-B-1 was 4.80×104 with specific optical
rotation value ［α］
20
D+68.3 （c=1，H2O）， and was composed of eight monosaccharides. The molar ratios were as Xyl: Ara: Glc: Rha:
Gal: Man: GlcA: GalA = 1.0:6.9:0.8:1.1:6.9:0.3:0.5:3.3. RAP-B-1 was an arabinogalactan. The linkages of arabinose were →1）Ara
（2，3→，→1）Ara（5→ and →1）Ara，and the linkages of galactose were →1）Gal（4→，→1）Gal（6→ and →1）Gal. RAP-B-1
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81260684）；北京中医药大学自主选题基金资助项目（2013-jybzz-xs-113）
作者简介：刁玉林，男，在读博士生，研究方向：中药药效物质基础研究，E-mail:monkey514@126.com
作者单位：1.100102北京，北京中医药大学中药学院（刁玉林，刘 斌）；2.100850北京，军事医学科学院毒物药物研究所（麻 浩，张贵强，李
帅，单俊杰）；3.100190北京，中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室（任晋玮）
通讯作者：单俊杰，女，博士，硕士生导师，研究方向：天然多糖化学及生物活性研究，Tel：010-6693644，E-mail：shanjunjie001@126.com；刘 斌，
男，教授，博士生导师，研究方向：中药（复方）有效成分（组分）发现与新药创制，Tel：010-84738629，E-mail：liubinyn67@163.com
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秀丽莓（Rubus amabilis Focke）藏医称甘扎嘎
日，为蔷薇科悬钩子属植物。《晶珠本草》记载甘扎
嘎日根苦，茎微甘苦，皮微辛，叶苦涩，果实甘甜。
根、茎、叶和果实用于治疗风热病和痰病，也用于热
性时疫的防治［1］。秀丽莓茎有镇咳祛痰作用［2］，刘慧
等［3］从秀丽莓根的精油成分中分离鉴定了39种成
分，主要成分为桉叶油二烯-5，11（13）-内酯-8，12-
γ-衣兰油烯、β-谷甾醇、榄香醇、圆柚醇、β-桉叶醇、
喇叭烯氧化物、维生素 A 醋酸酯、1，5，9-三甲基-
1，5，9-环十二碳三烯、荜澄茄油烯醇、羽扇豆醇乙酸
酯、豆甾-4-烯-3-酮和香橙烯等。目前尚未见有关该
种植物多糖成分的化学和生物活性的报道。
本文从秀丽莓茎的水煎液中分离得到一种酸
性阿拉伯半乳聚糖，并对其理化性质及免疫调节活
性进行研究。
1 材料与方法
1. 1 药材和试剂
秀丽莓茎采自青海互助北山，经青海省药品检
验所藏药室主任罗桂法副主任药师和北京中医药
大学刘春生教授鉴定为蔷薇科悬钩子属秀丽莓的
干燥茎。
葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、岩
藻糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸，以及相对分子质
量6×103、1.04×104、4.0×104、6.6×104和 2.7×104
的葡聚糖（99 %），美国 Sigma 公司；三氟乙酸（99
%，批号：A0325493），美国 Acros公司；3-甲基-1-苯
基-2-吡唑啉-5-酮（3-methyl-1-phenyl-2-pyrazoline-5-
one，99%，批号：BCBH4066V，PMP） 和四甲基脲
（99%，批号：MKBJ8866V），美国Aldrich公司；硼氢
化钠（99%，批号：4214A），ICNBiomedicals公司；其
余试剂均为国产分析纯。
1. 2 仪器
UV-2000型分光光度计，上海龙尼柯仪器有限
公司；高效液相色谱仪（600型泵，2414示差检测
器、2998PDA检测器及Empower2.0工作站），美国
Waters公司；P/ACETMMDQ型毛细管电泳仪，美国
Beckman公司；BSZ-100型自动部份收集器，上海沪
西分析仪器厂有限公司；BrukerAvanceDRX-500型
超导核磁共振仪，美国Bruker公司；HP5890Ⅱ型气
相色谱仪，美国惠普公司；Agilent6890N气相色谱仪
与 Waters EI-MS 联用气相色谱-质谱联用仪（GC-
MS），美国Agilent与Waters公司；NICOLET6700型
傅里叶红外光谱仪，美国TermoFisher公司；Bio-Rad
Model680型酶标仪，美国Bio-Rad公司；上海申光
SGW-1自动旋光仪，上海图新电子科技公司。
1. 3 动物
BALB/c小鼠，雌性，6～8周龄，军事医学科学
院实验动物中心提供，动物饲养设施合格证号：
SYXK-（军）-2007- 04。
1. 4 多糖RAP-B-1的分离
秀丽莓干燥茎500g，以10L水煎煮1h，水煎
液4层纱布过滤，残渣再重复提取1次，合并滤液。
滤液离心（离心力1250×g），上清液减压浓缩，浓缩
液加入3倍体积95%乙醇，进行静止醇沉48h。沉
淀部分多次加水溶解，离心，合并上清液，装入透析
袋，流水透析48h。袋内液体离心，上清液减压浓缩
至少量体积，冷冻干燥，得到秀丽莓粗多糖（crude
polysaccharide，RAP）。
称取1gRAP，溶于20ml蒸馏水中，搅拌溶解，
离心20min（离心力870×g），沉淀再加入20ml蒸
馏水同样操作一次。合并上清液，上样于DEAD-纤
维素柱（柱床 7.0 cm×30 cm），依次用 H2O、0.25
mol/LNaHCO3、0.5mol/LNaHCO3和 0.1 mol/LNaOH
洗脱，流速1.0ml/min。流出液采用苯酚-硫酸法隔管
检测多糖吸收峰，收集糖峰流份，然后蒸馏水透析，
再冷冻干燥，得 RAP-A （H2O 洗脱）、RAP-B（0.25
mol/LNaHCO3洗脱）及RAP-C（0.5mol/LNaHCO3洗
脱）3个含糖组分。RAP-B经SephadexG-100柱分离
（柱床2.0cm×130cm），以0.1mol/LNaCl洗脱，流
速0.3ml/min，透析，冷冻干燥。得纯化白色絮状多
糖RAP-B-1。
1. 5 RAP-B-1的纯度鉴定及相对分子质量测定［4］
采用高效凝胶渗透色谱法（highperformancegel
permeation chromatography，HPGPC） 对 RAP-B-1 进
行纯度鉴定及相对分子质量测定。色谱条件：色谱
柱为TSKgel-G4000PWXL（7.8mm×300 ）；流
动相：0.1mol/LNa2SO4；流速：0.6ml/min；柱温：35℃
could improve the proliferative activity of spleen T cells（P< 0.05）and booste phagocytic activity of peritoneal macrophages at 50 μg/ml
concentration（P< 0.01）. Conclusion RAP-B-1 is an arabinogalactan and has immunobiological activity.
［Key words］ Rubus amabilis；polysaccharide；arabinogalactan；immunobiological activity
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进样量：20μl；检测器：示差检测器。
分别称取5mg相对分子质量为6×103、1.04×
104、4.0×104、6.6×104和 2.7×105的葡聚糖标准
品，加入500μl超纯水溶解，0.45μm膜过滤。在流
速0.6ml/min条件下分别进样20μl。采用 Waters
Empower2.0GPC软件处理实验数据，绘制多糖相
对分子质量标准曲线。
称取5mgRAP-B-1， 加入500μl超纯水溶解，
0.45μm膜过滤，进样20μl。根据其保留时间和标
准曲线方程，计算峰位相对分子质量（Mp）。
1. 6 RAP-B-1的单糖组成分析［5］
1. 6. 1 标准单糖和RAP-B-1的PMP衍生方法 称
取氨基葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、岩
藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸各
10mg，加入5ml超纯水溶解，混合。移取40μl标准
单糖混合溶液于试管中，然后加入 0.3mol/LNaOH
溶液600μl和0.5mol/LPMP溶液（甲醇配制）600
μl，充分混合，置于70℃水浴中反应30min。取出
自然冷却至室温，慢慢加入600μl的0.3mol/L盐
酸溶液至中性。加入1ml氯仿进行萃取，水层再加
入氯仿重复萃取2次。水层溶液经0.22μm微孔滤
膜过滤，待进样。
称取5mgRAP-B-1置于水解管中，加入2mol/L
三氟乙酸3ml溶解，密封，置于120℃烘箱中加热
水解2h。取出放置冷至室温后，转移至25ml圆底
烧瓶中。45℃减压条件下反复加入少量甲醇，去除
残余的三氟乙酸。然后加入0.3mol/LNaOH溶液和
0.5 mol/L PMP 溶液（甲醇配制）各 600μl，充分混
合，置于70℃水浴中反应30min。取出自然冷却至
室温，慢慢加入0.3mol/L盐酸溶液600μl至中性。
加入1ml氯仿进行萃取，水层再加入氯仿重复萃取
2次。水层溶液经0.22μm微孔滤膜过滤，待进样。
1. 6. 2 毛细管电泳条件 缓冲盐溶液：50mmol/L
硼砂溶液（pH=10.57）；毛细管柱：50μm×6 cm；
分离电压：15kV；检测波长：245nm；进样压力：0.5psi；
进样时间：10s；柱温：25℃。依据每种单糖质量和相
应峰面积，计算每种单糖校正因子 fi,再与待测样品
所含单糖的峰面积相乘，然后计算不同单糖之间的
摩尔比。
1. 7 红外光谱测定
称取2 mgRAP-B-1，与KBr混合压片，测定其
在4000～500cm-1范围内的吸收光谱。
1. 8 磁共振图谱测定
称取40mgRAP-B-1， 加入0.6mlD2O溶解，冷
冻干燥。重复3次后，再溶于0.6mlD2O，测定 1H
NMR和 13C NMR图谱（500MHz）。将HOD信号设
为 δH4.75ppm，DMSO-d6信号设为 δC39.39ppm。
1. 9 高碘酸氧化-Smith降解［6］
准确称取30mgRAP-B-1置于25ml棕色容量
瓶中，加 4 ml 水溶解，再加入 12.5 ml 30 mmol/L
NaIO4，最后加水定容。包裹黑色纸，置4℃冰箱中。
放置后0、6、12、24、36、48、60、72、84和96h各取样
0.1ml置于试管中，加水25ml，混匀，于223nm波
长下测吸光度（A）值，直至 A值恒定。取出试管，加
4ml乙二醇终止反应。通过酸碱滴定反应［7］，计算高
碘酸消耗量和甲酸生成量。
将乙二醇处理后的高碘酸反应液用去离子水
透析48h，透析液浓缩、冷冻干燥。然后加入2mol/L
三氟乙酸5ml溶解，密封，置于120℃烘箱中加热
水解2h。取出放置冷至室温后，转移至25ml圆底
烧瓶中。45℃减压条件下反复加入少量甲醇，去除
残余的三氟乙酸。反应瓶中各加入2ml水溶解，再
加入80mg硼氢化钠，室温搅拌反应4h。反应结束
后滴加25%醋酸除去过量的硼氢化钠。然后45℃
减压条件下多次加入甲醇，去除残留的硼酸。置于
70℃真空干燥2h，再加入2ml无水吡啶和2ml无
水醋酸酐，密封，90℃加热1h进行乙酰化反应。反
应结束后，60℃减压条件下多次加入少量甲苯，去
除残余的吡啶及醋酸酐。然后加入少量氯仿溶解、
过滤，滤液进行气相色谱分析。
气相色谱条件为色谱柱：HP-5（30m×0.32mm，
0.25μm）；进样口：270℃；检测器：280℃；柱温升温
程序：120℃，以2℃/min升至200℃，以5℃/min升
至270℃；载气：氦气，流冻：1.0ml/min；分流比：10:1。
1. 10 甲基化反应
采用改良的Hakomori方法对RAP-B-1进行甲
基化反应［8］。精确称取20mgRAP-B-1置于25ml茄
型瓶中，加入4mlDMSO，搅拌溶解。在N2保护下，
加入 200 mgNaOH粉末（真空干燥），搅拌 30 min，
然后缓慢滴加1ml四甲基脲，继续搅拌30min。在
N2保护下，将反应瓶置于冰水浴中，30min内逐滴
加入2ml碘甲烷，同时搅拌。室温反应3h，加4ml
水淬灭反应。反应液用氯仿萃取3次，合并氯仿层，
减压蒸除溶剂，然后80℃真空干燥4h即得甲基化
产物。液膜法检测甲基化产物，在3400cm-1处有无
吸收峰，判断甲基化是否完全。
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甲基化产物加入7ml88%甲酸溶解后转移至
水解管中，密封，100℃水解3h，反应结束后减压去
除甲酸，再加入2mol/L三氟乙酸5ml，密封，120℃
水解2h。反应结束后反复加入少量甲醇，减压蒸除
残留的三氟乙酸。反应物加入2ml去离子水溶解，
再加入4%NaBH41.5ml，搅拌，室温反应4h。反应
后滴加入20%醋酸，直至无气泡产生为止。反复加
入少量甲醇，减压蒸除硼酸，80℃真空干燥3h。向
干燥后的产物中加入2ml无水吡啶和2ml无水醋
酸酐，密封，90℃加热2h进行乙酰化衍生，反应结
束后反复加入少量甲苯，减压蒸除残余的吡啶及醋酸
酐，然后60℃真空干燥4h。加入适量的氯仿溶解乙
酰化产物，过滤，滤液减压蒸干，进行GC-MS分析。
1. 11 测定小鼠脾脏T细胞、B细胞增殖率及腹腔
巨噬细胞的吞噬功能
摘取BALB/c小鼠眼球放血、处死，无菌取出脾
脏，放入RPMI1640液中制备脾细胞悬液5×106/ml备
用。脾细胞悬液加入96孔细胞培养板中，100μl/孔。
每孔再分别加入 4.0μg /ml ConA 溶液、15μg /ml
LPS，或10、 0和500μg/mlRAP-B-1各100μl，平
行3复孔。置37℃、5%CO2培养箱中孵育48h。每
孔取出100μl上清液，弃去，再加入 2.5mg/mlMTT
溶液20μl，继续37℃孵育4h。之后每孔加入10%
的SDS100μl，再放37℃培养箱中过夜。在酶标仪
570nm处测定A值，分别计算T细胞和B细胞的
增殖率。
摘取BALB/c小鼠眼球放血、处死，无菌取出腹
腔细胞，调整细胞悬液浓度为1×106/ml备用。巨噬
细胞加入24孔培养板中，加入1ml30μg/mlLPS
或1、10和50μg/mlRAP-B-1，37℃培养箱培养24h，
吸去上清后，加入含0.1%中性红溶液1.0ml/孔，继
续孵育20min。吸去培养上清，再用0.9%NaCl溶
液洗涤3次，然后加入细胞溶解液1.0ml/孔，室温
放置2h，待细胞完全溶解后，取溶解液0.2ml置于
96孔酶标板中，于540nm波长处测定A值。
2 结果
2. 1 多糖RAP-B-1的分离
秀丽莓干燥茎经过水煎煮、醇沉、透析获得秀
丽莓粗多糖RAP，得率2.58%。RAP经DEAE-纤维
素柱层析，得到RAP-A、RAP-B和RAP-C3个含糖
组分（图1）。RAP-B再经过SephadexG-100柱层析
进一步分离，得到相对分子质量均一的多糖RAP-
B-1（图2）。
2. 2 RAP-B-1的纯度及相对分子质量测定结果
采用HPGPC法检测RAP-B-1的纯度及相对分
子质量，同时测定该多糖的比旋光度，结果见图3。
从图中可以看出RAP-B-1呈单一对称峰，表明其分
子量具有均一性。依据相对分子质量标准曲线，计算
RAP-B-1的相对分子质量为4.80×14。将RAP-B-1
以水溶解，配制成0.6mg/ml的溶液后检测，条件为：
测定波长λ为589nm；测定管长度为100mm，测得
RAP-B-1的比旋光度为[α]20D+68.3，（c=1，H2O）。
2. 3 RAP-B-1的单糖组成
10种标准单糖混合物、RAP-B-1酸水解产物分
别进行PMP衍生，得到单糖PMP衍生物。采用毛细
图 1 RAP的 DEAE-纤维素柱色谱洗脱流出图
Fig. 1 Elution pattern of RAP on DEAE-cellulose column
RAP-A RAP-B RAP-C RAP-D
图 2 RAP-B的 Sephadex G-100柱色谱洗脱流出图
Fig. 2 Elution pattern of RAP-B on Sephadex G-100
column
RAP-B-1RAP-B-2 RAP-B-3
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管电泳仪对其进行分离鉴定，结果见图4（A：10种
单糖；B：RAP-B-1）。实验表明，RAP-B-1 是由由木
糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、葡
萄糖醛酸及半乳糖醛酸组成，摩尔比为1.0:6.9:0.8:
1.1:6.9:0.3:0.5:3.3。
2. 4 RAP-B-1的结构分析
RAP-B-1的IR图谱中3384.9cm-1的吸收峰为
OH伸缩振动，2932.9 cm-1的吸收峰为 CH3伸缩振
动；1738.8cm-1、1611.7cm-1和 1419.4 cm-1均证明有
COOH存在，894.5cm-1处有吸收峰，表明存在β构
型；813.2 cm-1处有吸收峰，表明存在 α 构型。
1018.1cm-1和950.9cm-1吸收峰均提示存在吡喃糖，
767.2cm-1吸收峰表明存在呋喃糖（图5）。
RAP-B-1 的1H NMR 图谱（图 6）显示在δH
5.19、5.13、5.09、5.03 和 5.01 ppm 处有化学位移信
号，表明RAP-B-1存在α-构型端基氢。在 δH5.00～
4.50ppm之间也可能存在β-构型端基氢（因HOD
信号强有可能重叠）。RAP-B-1的13C NMR图谱（图
7）中δC 176.4 ppm 峰为羧基 C-1 信号；δC 110.8、
109.3、108.6 ppm 归属于阿拉伯糖 C-1 信号；δC
105.9、104.7、104.1ppm归属于半乳糖的C-1信号；
δC103.1和102.3可以归属于葡萄糖或甘露糖的C-
1信号；δC100.6ppm可能为鼠李糖的C-1信号；δ
99.0和97.6ppm可能为多糖链末端糖基的C-1信号。
RAP-B-1与高碘酸反应产生甲酸，高碘酸消耗
量>2倍甲酸生成量，推测该多糖结构中不仅存在
l→或l→6连接方式还有其他位点连接方式。RAP-
B-1的Smith降解产物通过GC分析，发现有甘油和
赤藓醇，提示RAP-B-1糖链中可能存在l→2、1→
2,6，l→4或1→4,6等连接方式。
RAP-B-1通过甲基化反应、酸水解及乙酰化反
应，产物进行GC-MS分析。分析结果见表1。GC-MS
分析推测 RAP-B-1 中阿拉伯糖的连接方式：→1）
Ara（2,3→、→1）Ara（5→和→1）Ara；半乳糖的连
接方式：→1）Gal（4→、→1）Gal（6→和→1）Gal；还
图 3 RAP-B-1 的高效凝胶渗透色谱图（TSK-Gel-4000
PWXL柱）
Fig.3 High performance gel permeation chromatography
of RAP-B-1 on a TSK-Gel-4000 PWXL column
图 4 10种单糖混合物（A）和 RAP-B-1单糖（B）的 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮衍生物的毛细管电泳图谱
注：A：1.氨基葡萄糖，2.PMP，3.木糖，4.阿拉伯糖，5.葡萄糖，6.鼠李糖，7.岩藻糖，8.半乳糖，9.甘露糖，10.葡萄糖醛酸，11.半乳糖醛酸；B：1.木
糖，2.阿拉伯糖，3.葡萄糖，4.鼠李糖，5.半乳糖，6.甘露糖，7.葡萄糖醛酸，8.半乳糖醛酸
Fig.4 An capillary electropherogram of 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazoline-5-one-labeled mixture of ten monosaccharides（A）
and RAP-B-1（B） A:1.glucosamine, 2.PMP, 3.xylose, 4.arabinose, 5.glucose, 6.rhamnose, 7.fucose , 8.galactose, 9.mannose, 10.glucuronic acid, 11.
galacturonicacid;B:1.xylose,2.arabinose,3.glucose,4.rhamnose,5.galactose,6.mannose,7.glucuronicacid,8.galacturonicacid
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含有→1）Man （2,6→、→1）Man （3→、→1）Rha
（3,4→和→1）Xyl等连接方式。该分析结果与高碘
酸氧化-Smith降解产物的分析结果相一致。葡萄糖
醛酸和半乳糖醛酸的连接方式有待进一步研究。
2. 5 RAP-B-1对小鼠脾脏T细胞、B细胞及腹腔巨
噬细胞的影响
BALB/c小鼠无菌取脾制备脾细胞，1、10和50
μg/ml的RAP-B-1分别与4μg/mlConA或15μg/ml
图 6 RAP-B-1的 1H NMR图谱（D2O，500 MHz）
Fig. 6 1H NMR spectrum of RAP-B-1（D2O, 500 MHz）
表 1 RAP-B-1甲基化产物的 GC-MS分析结果
Tab.1 GC-MS analysis of methylated products of RAP-B-1
2,3 5-Me3-Xyl 43,45,87,101,117,129,161→1）Xyl
5-Me-Ara 43,73,101,117,128,145,161,217→1）Ara（2,3→
2,3,5-Me3-Ara 43,55,74,87,102,117,129,163,233→1）Ara
2,3-Me2-Ara 43,71,87,99,101,117,129,161,189→1）Ara（5→
2,3,4,6-Me4-Gal 43,61,71,75,87,101,117,129,145,161,205→1）Gal
2,3,4,6-Me4-Glc 43,59,71,75,87,101,117,129,145,161,205→1）Glc
2,4,6-Me3-Man 43,57,71,85,99,117,127,141,157,201,209→ ）Man（3→
2-Me-Rha 43,45,87,101,117,129,159,161,189,233→1）Rha（3,4→
2,3,6-Me3-Gal 43,87,99,101,113,117,129,149,173,233→ ）Gal（4→
2,3,4-Me3-Gal 43,87,99,101,117,129,161,189,233→ ）Gal（6→
3,4-Me2-Man 43,58,87,101,117,139,159,173,189,233→ ）Man（2,6→
部分甲基化糖基 主要离子碎片峰 连接方式
图 7 RAP-B-1的 13C NMR图（D2O，125 MHz）
Fig. 7 13C NMR spectrum of RAP-B-1（D2O, 125 MHz）
图 5 RAP-B-1的红外光谱图
Fig.5 IR spectrum of RAP-B-1
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国际药学研究杂志 2014年8月 第41卷 第4期 JIntPharmRes，Vol.41，No.4，August，2014
表 2 RAP-B-1对小鼠脾脏 T细胞和 B细胞增殖的影响
Tab.2 Effect of RAP-B-1 on the proliferation of spleen T
cells and B cells in mice
ConA 脂多糖
生理盐水 - 0.261±0.019 0.305±0.058
ConA/脂多糖 4/15 0.534±0.126* 0.747±0.083**
RAPB-B-1 1 0.618±0.026** 0.694±0.054**
10 0.661±0.073** 0.799±0.081**
50 0.749±0.060**# 0.852±0.102***
组别
浓度
（μg/ml）
A570nm值
注：*P<0.5，**P<0.1，与生理盐水组相比较；#P<0.5，与ConA或
脂多糖组相比较；x±s，n=3
*P < 0.5，**P < 0.1，compared with saline group；#P < 0.5，conpared
withConA/lipopolysaccharidesgroup；x±s，n=3
表 3 RAP-B-1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
Tab.3 Effect of RAP-B-1 on the phagocytic activity of
peritoneal macrophages in mice
注：**P<0.1，与生理盐水组相比较；x±s，n=3
**P<0.1，comparedwithsalinegroup；x±s，n=3
生理盐水 - 0.587±0.020
脂多糖 30 1.811±0.076**
RAP-B-1 1 0.623±0.038
10 0.641±0.018
50 0.809± .012**
组别 样品浓度（μg/ml） A值
LPS共培养48h，研究对脾脏T细胞和B细胞增殖
作用的影响，结果见表2。无菌抽取腹腔巨噬细胞，
分别与 30μg/ml LPS 以及 1、10 和 50μg/ml 的
RAP-B-1共培养24h，研究其对中性红染料的吞噬
能力，结果见表3。数据表明，50μg/mlRAP-B-1对
小鼠T细胞具有明显促增殖活性（P <0.01），对B
细胞也有轻度促增殖作用，能显著提高小鼠腹腔巨
噬细胞吞噬能力（P<0.01）。
3 讨论
植物秀丽莓为蔷薇科悬钩子属（RubusL.），本
属植物中大多数种类植物的果实柔嫩多汁, 营养丰
富。有些种类的果实、种子、根及叶可入药，药用价
值较高，具活血化瘀，祛风祛湿，清热解毒，止血止
痛，固肾涩精等功效[9]。有关本属植物中多糖成分化
学和生物活性的研究报道很少。陈坤华等[10]报道掌
叶覆盆子（Rubu chingii Hu.）果中粗多糖有明显的
促进淋巴细胞增殖作用。刘艳等[1]采用四氯化碳造
成大鼠肝损伤，观察粗叶悬钩子（Rubus alceaefolius
Poir.）根粗多糖对大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天冬
氨酸氨基转移酶 和大鼠肝组织细胞色素 P450 酶
（CYP）、CYP2E1和CYP3A1等酶含量的影响。结果
表明粗叶悬钩子粗多糖各组均不同程度地降低了
CCl4所致大鼠转氨酶的升高，不同程度地增高了肝
药物代谢CYP的含量及活性，降低了CYP2E1的含
量及活性。
本文首次对悬钩子属秀丽莓种植物茎水煎液
中多糖成分及免疫活性进行了研究。从该植物中分
离得到一个峰位相对分子质量为4.80×104的杂多
糖RAP-B-1。该多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖和半
乳糖糖醛酸组成，同时还有少量葡萄糖、甘露糖、鼠
李糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸。初步药理活性研究表
明，该多糖能显著促进小鼠脾中T细胞和B细胞的
增殖，提高腹腔巨噬细胞的吞噬能力。其他生物活
性有待于进一步研究。
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（收稿日期：2014-03- 1 修回日期：2014- 6-03）
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