全 文 ：墓头回总黄酮提取工艺研究
王雅琦
（哈药集团制药六厂，黑龙江 哈尔滨１５００５６）
摘　要：目的：探讨墓头回总黄酮的最佳提取工艺。方法：采用超声提取法提取墓头回中的总黄酮，采用
比色法测定总黄酮含量，以总黄酮得率为指标，考察乙醇浓度、料液比和超声时间对墓头回总黄酮提取
率的影响，利用响应面分析法确定墓头回总黄酮的最佳提取工艺。结果：墓头回总黄酮的最佳提取工艺
为：加３０倍量的６０％乙醇超声提取２０ｍｉｎ。结论：该提取工艺得率高、操作简便，具有周期短、精度高等
优点，可用于工业化大生产。
关键词：墓头回；总黄酮；提取工艺
中图分类号：Ｒ３８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１５）２２－００３０－０２
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１５２２０１２
收稿日期：２０１５－０７－１２
作者简介：王雅琦（１９７９－），女，黑龙江省哈药集团制药六厂主管药师，研究方向为药物质量标准及工艺。
　　墓头回为败酱科败酱属植物异叶败酱或糙叶败酱的根
茎和根，性凉，味苦、微酸涩，根及全草入药用，具有燥湿止
带、收敛止血、清热解毒的功效，主治赤白带下、泄泻痢疾、
疮疡肿毒等［１］。近年来国内外学者对墓头回中黄酮类化合
物的药理作用进行了研究，在抗肿瘤、抗氧化、抗炎、镇静、
镇痛等［２］方面取得了显著进展。超声波辅助提取法是提取
天然成分的常用方法［３］。目前关于墓头回总黄酮的最佳提
取工艺研究报道较少，本文采用响应面分析法，考察影响提
取效果的主要因素，确定最佳提取工艺条件，现报道如下。
１　仪器与试药
１．１　仪器
ＵＶ－２６００紫外－可见分光光度计、ＫＱ５２００超声清洗
器、电子分析天平等。
１．２　试药
槲皮素（批号：１０００８１－２０１４８１），购于中国食品药品检定
研究院；墓头回，购于安徽亳州；其他试剂均为分析纯。
２　方法学考察
２．１　对照品溶液制备
精密称取槲皮素对照品７．３ｍｇ，置于２５ｍＬ容量瓶中，
加适量６０％乙醇，超声片刻使之溶解，加６０％乙醇定容至刻
度，得浓度为０．２９２ｍｇ／ｍＬ的对照品溶液，备用。
２．２　供试品溶液制备
称取１．０ｇ墓头回药材粗粉，加２０ｍＬ　６０％乙醇超声提
取２０ｍｉｎ，过滤，用６０％乙醇定容至２５ｍＬ容量瓶中，得浓度
为４０ｍｇ／ｍＬ的供试品溶液，备用。
２．３　最大吸收波长确定
精密吸取对照品溶液１．０ｍＬ，置于２５ｍＬ容量瓶中，按
照“２．４”项下显色方法操作，于２００～８００ｎｍ波长范围内进
行光谱扫描，确定其最大吸收波长为４８０ｎｍ。
２．４　线性关系考察
精密吸取对照品溶液１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、
４．０ｍＬ，分别置于２５ｍＬ容量瓶中，加６０％乙醇至６ｍＬ，加
５％ ＮａＮＯ２溶液１．０ｍＬ，放置６ｍｉｎ，加１０％Ａｌ（ＮＯ３）３溶液
１．０ｍＬ，放置６ｍｉｎ，加１０％ＮａＯＨ溶液１０ｍＬ，定容至刻度，
摇匀，放置１５ｍｉｎ，以相应试剂作空白对照，于４８０ｎｍ处测
定吸光度。以吸光度（ｙ）为纵坐标，以样品浓度ｘ为横坐
标，绘制标准曲线，得回归方程为：ｙ＝０．２６５　５ｘ＋０．０２５　３，ｒ
＝０．９９９　０。结果表明：槲皮素在０．０１２～０．０４７ｍｇ范围内
与吸光度值呈良好的线性关系。
２．５　精密度试验
精密吸取同一对照品溶液１．０ｍＬ，置于２５ｍＬ容量瓶
中，按照“２．４”项下方法测定吸光度，平行测定６次，计算得
吸光度ＲＳＤ为０．２５％，表明仪器精密度良好。
２．６　稳定性试验
精密吸取同一对照品溶液１．０ｍＬ，置于２５ｍＬ容量瓶
中，按照“２．４”项下方法，分别于放置３０、６０、９０、１２０、１５０、
１８０ｍｉｎ后测定吸光度，计算得ＲＳＤ为１．４９％，表明样品溶
液在１８０ｍｉｎ内稳定性良好。
２．７　重复性试验
精密吸取同一供试品溶液１．０ｍＬ，置于２５ｍＬ容量瓶
中，按照“２．４”项下方法测定吸光度，平行测定６次，计算得
ＲＳＤ为０．２１％，表明该方法重复性良好。
２．８　加样回收率试验
精密称取９份已知总黄酮含量的药材粉末，随机分为３
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组，各组分别精密加入已知含量８０％、１００％、１２０％的槲皮
素对照品，按照供试品制备方法制备样品溶液，于“２．４”项
下显色条件测定总黄酮含量，计算得加样回收率为９９．０％，
ＲＳＤ为１．６７％。
３　单因素考察
３．１　乙醇浓度考察
称取１ｇ墓头回药材粗粉５份，固定超声时间为２０ｍｉｎ、
料液比为１∶２０，分别采用浓度为４０％、５０％、６０％、７０％、
８０％的乙醇提取，测定其吸光度，结果见图１。乙醇浓度选
取４０％、５０％和６０％作为提取工艺优化的３个水平。
图１　吸光度响应面分析
３．２　料液比考察
称取药材（过６０目筛）适量，固定超声时间为２０ｍｉｎ、乙
醇浓度为６０％，分别用料液比为１∶１０、１∶２０、１∶３０、１∶
４０、１∶５０进行提取，测定其总黄酮含量，选择三个最佳的料
液比进行考察，分别为１∶１０、１∶２０、１∶３０。
３．３　超声时间考察
称取药材（过６０目筛）适量，固定乙醇浓度为６０％、料
液比为１∶２０，分别超声提取１０、２０、３０、４０、５０ｍｉｎ，测定其总
黄酮含量，选择３个最佳的超声时间进行考察，分别为１０、
２０、３０ｍｉｎ。
３．４　提取工艺优化
根据Ｂｏｘ－Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的中心组合实验设计原理，综合单
因素实验结果，在选定温度为２５℃的前提下，选择乙醇浓
度、料液比和超声时间３个因素作为自变量设计响应面分
析实验，分别以 Ａ、Ｂ、Ｃ表示，每个自变量的低、中、高水平
分别以－１、０、１进行编码，以墓头回总黄酮提取得率作为响
应值Ｙ，结果见表１。采用Ｄｅｓｉｇｎ－Ｅｘｐｅｒｔ软件对表１结果
进行响应面回归分析，得拟合方程：含量＝－３７０．０１１７５＋
１０．８３７６２×Ａ＋８．２９９３０×Ｂ＋２．８９５０８×Ｃ－０．０２５８７５×Ａ
×Ｂ－０．１０２２３×Ａ２－０．１２７８１×Ｂ２－０．０７６２８０×Ｃ２。由方
差分析可知，拟合方程有较高的拟合度，理论最佳提取工艺
为：加３０倍的６０％乙醇超声提取２０ｍｉｎ，药材有效成分能最
大程度地溶出。
表１　响应面分析实验结果
实验号 Ａ　 Ｂ　 Ｃ 含量（％）
１　 ０　 ０　 ０　 ３７．５５
２ －１ －１　 ０　 １９．４７
３　 ０ －１ －１　 ２３．６２
４　 ０　 ０　 ０　 ３６．４２
５ －１　 ０ －１　 ２２．４９
６　 １　 １　 ０　 ３．２８
７ －１　 １　 ０　 ９．６８
８　 ０　 １ －１　 １１．５６
９　 ０　 １　 １　 ８．９３
１０　 ０　 ０　 ０　 ３９．０６
１１ －１　 ０ －１　 ２３．６２
１２　 ０　 ０　 ０　 ３７．５５
１３　 １　 ０　 １　 １１．５６
１４　 １ －１　 ０　 ２４．３４
１５　 ０　 ０　 ０　 ３６．０５
１６　 ０ －１ －１　 ２２．８６
１７　 １　 ０ －１　 ２０．２３
注：共有１７个实验，其中１２个为析因实验，５个为中心实验，以估计误
差。
４　讨论
传统的数理统计方法往往采用正交设计或均匀设计，
可同时考虑多种因素，寻求最佳因素水平组合，但其不能在
给出的整个区域中找出因素和响应值之间明确的函数表达
式，即回归方程，因而无法找到整个区域中因素的最佳组合
和响应值的最优值。响应面分析方法是通过中心组合实验
研究几种实验因素间交互作用的一种回归分析方法，具有
试验次数少、周期短、回归方程精度高等优点，并可从图形
方面分析寻求最优考察因素值。
本实验采用响应面分析法对墓头回总黄酮提取工艺进
行研究，实验所确定的提取工艺具有提取得率高、操作简
便、成本较低等优点，为墓头回总黄酮提取工艺的优化及墓
头回植物资源的开发利用提供了科学依据。
参考文献：
［１］　蔡光先．湖南药物志［Ｍ］．长沙：湖南科学技术出版社，２００４：
４８５７－４８５９．
［２］　 江苏医学院．中药大辞典［Ｍ］．上海：上海人民出版社，１９８６．
（责任编辑：尹晨茹）
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