全 文 ：第 卷 第 期
年 月
中 华 中 医 药 学 刊
墓头回木脂素类化学成分及细胞毒活性研究
陈雪园 , 杨波 , , 陈津, , 张如松 , , 杨 苏蓓
浙江中医药大学 浙江 杭州 浙江省中药研究所有限公司 浙江 杭州
摘 要 目的 提取分离墓头回木质素类化学成分 ,研究墓头回木脂素类成分的细胞毒活性 。 方法 采用硅胶柱
层析 、 制备薄层层析 、 高效液相柱层析等方法分离、 纯化化合物 , 利 用 、 等现代波谱技术解析化合物化学结
构 法研究化合物体外细胞毒活性 。 结果 从墓头回 中分离得到 个木脂素类成分 , 鉴定其为
、 一 、 一 二 个化合物体外对 一 、 、 一 等肿瘤细胞具有一定的
抑制作用 。 结论 墓头回中存在木脂素类成分 , 该类成分对 一 、 、 一 等肿瘤细胞具有抑制作用 。
关键词 墓头回 木脂素 细胞毒活性
中图分类号 咫 文献标志码 文章编号 一 一 一
, , ,
句 月 厂
句 月 句 ,
。 街 一
曲 , 扩
尸 一 , , 儿 、 ,
一 工 一 、
办 ,
一 万 一
墓回头又名脚汗草 、 箭头风 为败酱科败酱属糙叶败酱
门召℃ 及异叶败酱 叩
门召℃ 的干燥根茎 肩特殊腐臭 。 性凉 妹苦 微酸涩 。 具
有燥湿止带 、 收敛止血 、 清热解毒之功效 。 主治赤 白带下
泄泻痢疾 疮疡肿毒 。 现代药理研究表明 墓头回具有镇
静 、 催眠 提高机体免疫力 ,止血 航菌 航肿瘤等作用 。 化
学成分研究表明 败酱属植物主要含有三菇皂普 、 环烯醚
菇 · 木脂素 · 黄酮 、 香豆素 、 昌醇等化学成分 「 一 」 。
前期研究表明 墓头回有效部位体外对 一 ,
一 泌 一 另 一 召 一 , 等多个人源
率的钻度明显提高 腺小叶数和腺泡数明显升高 ,乳腺
导管上皮呈单层高柱状 、 复层或假复层排列 。 采用 肌注
雌激素方式制备乳腺增生模型 ,方法可行 。 在常用 的乳
腺病理组织学 、 血清激 素水平及器 官重量等指标基础
上 ,结合血液流变学指标 ,指标选择更加客观 、 全面 。
乳腺增生作为一种慢性疾病 ,其病因病机 尚未完全
阐明 , 目前尚无疗效显著的治疗药物 ,因此本实验结果
发现 ,阳性药物对部分指标 有改善作用 ,但对某些指标
影响不大 。 而受试药物对部分指标有改善作用 ,但除了
收稿日期 一 一
基金项目 浙江省 医药卫生科技计划资助 项 目 浙
江省大学生科技创新活动计划项目
作者简介 陈雪园 一 ,女 浙江宁波人 顽士研究生 研究方
向 药物新剂型及新技术研究 。
通讯作者 杨苏蓓 女 ,博士研究生导 师 研究方向 药物新剂型及
新技术研究 。 二 · 幻· ·
乳头高度 、 子宫重量具有显著影响外 ,对其他指标的影
响均无统计学差异 ,分析原因可能为外用 制剂 ,通过皮
肤贴敷给药 ,药物疗效的发挥受到多重因素的影响 ,相
关研究尚待进一 步开展 。
参考文献
【〕 吴晓燕 陈颖 瞿发林 乳腺小叶增生的中医药治疗 【〕 现代
中西医结合杂志 江
〕 王丽 蔡惠 叶尔买 克 ,等 百麦外 用中药制剂对小鼠乳腺增
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〕 中国中医
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组织的影响 〕 中成药
〕 陈静 李渤文 孟宪波 ,等 消癖颗粒对家兔乳腺增生模型的
影响 〕 齐鲁药事
〕 段金红 戴顺龄 陆媛 等 日租 对切除卵巢兔动脉粥样硬化与血
液流变学的作用 〔月 中国病理生理杂志 刀阴 妇
中华医药
学刊
DOI :10.13193/j.issn.1673-7717.2013.10.063
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性肿瘤细胞株均具有抑制作用 对 一 细胞的抑制作用
具有时 一 效关系和量 一 效关系 。 本实验对墓头回有效部位
的化学成分进行了分离鉴定 并初步研究其细胞毒活性 。
实验材料
药材
墓头回药材购自杭州市中药饮片厂 批号 ,
产地 陕西 。 经浙江中医药大学药学院张如松教授鉴定为
败酱科 败酱属 植物异叶败
酱 的根及根茎 ,标本存放于
浙江中医药大学中药资源工程学实验室 编号为
一 一 。
仪器
液 一 质联用仪 一 一 一
, 高分辨质谱 一 一 仪
一 , 核磁共振 仪
, 叮 高效液相
色谱仪 印 , 二元分析泵 自
动进样器 光电二级管阵列检测器 四元泵
双波长紫外检 测器 色谱柱 分析柱
万林 半制 备柱 , 林
, 升旋转蒸发仪 一
旋转蒸发仪 万 。
试剂
柱层析用硅胶 一 目 一 目 ,及薄层层
析用硅胶 硅胶 均为青岛海洋所产品 柱层析用石
油醚 ,乙酸乙醋 二氯甲烷 氯仿均为化学纯 薄层层析用正
己烷 ,乙酸乙醋 氯仿均为分析纯 高效液相用 甲醇 ,乙睛为
色谱纯 水为双蒸水 其余试剂均为分析纯 。
实验方法与结果
提取 、 分离
墓头回饮片 打粉 ,用 乙醇 巧 倍量浸泡 ,
渗滚提取 。 收集渗滚液 减压 回收至无醇味 得到浸膏 。 浸
膏加适量水分散 ,用 等体积乙酸乙醋萃取 次 , 收集萃取
液 何收溶剂 得到乙酸乙醋提取物 。 取 乙酸
乙醋提取物 进行硅胶 一 柱层析分离 。 用 二氯甲
烷 二氯甲烷 一 乙酸乙醋 万 ,二氯甲烷 一 甲醇
用醇洗脱 得到四个粗流分 、 、 、 。 其中二氯甲
烷 一 乙酸乙醋 洗脱后得到黄色油状物质 为
。 对 再进行硅胶 一 目 柱层析分离 用石油醚
一 乙酸乙醋 江 另 户 井 进行
洗脱 共得到 个流分 。 利用硅胶柱层析 、 制备薄层层析 、
半制备高效液相柱层析等技术对其中的 进行
分离 共得到 个化合物 。 分别是化合物 、 化合
物 、 化合物 。
结构鉴定
化合物 无色油状物质 ,分子式为 。 ,不饱和
度为 一。。 谱结合 盯 谱和 谱分析可知 ,该
化合物存在 个甲基信号 乃个亚甲基信号 汉个次甲基 另
个季碳 。 谱中从 一 之间共有
个碳信号 , , , , ,
江 , , , , , 〕,
推测该化合物存在两个苯环 , 一 之间
个信号的存在 进一 步印证了苯环的存在 。 谱中 ,
多 和 多 处的信号显示结构中存
在两个酚性甲氧基 这一点从 谱中 和 队
两个信号也得到印证 。 谱中 除去 个芳香
碳信号 个甲氧基信号 ,还有 个信号 ,可能为两个 单
元 · 推测该化合物可能为木脂素 。 谱中
信号为醋碳基信号 放该化合物为木质内醋 。 谱中
六个芳香氢信号 , , 、 。 , ,
、 月 另 分别被归属为 一 、
和 一 月 、 月万 、
月 另 个信号 ,分别被归属为 一 、
一 和 一 。 这些芳香氢信号结合 谱 、 分
析 表明 两个苯环分别为 乃井和 乃 井 三取代 。
谱 中 , , 与 一 相 关 ,
多 与 一 相关 表明两个甲氧基分
别接在 一 位 、 一 位 。 一 位 、 一 位各连了一个轻
基 。 谱显示 一 为叔碳 ,
为季碳 ,故 一 位接了 一 个轻基 。 一 防
月 石 月万 石 月 另 ,
, , , , , , ,
石 月万 户 , 另
月夕 , 夕 , 另 乃
一 多 。 一 一 一 江一 一 江
一 江 一 , 一 , 一 井
一 一 , 一 , 一 ,
一 , 一 , 一 ,
江 一 乃 一 , 一 万
一 万 一 一 , 一 一 。 经与文
献 一 对照 确定该化合物为 。
化合物 无色油状物质 汾子式为 。 不饱和
度为 一。 。 谱结合 盯
和
分析可知 ,该化合物存在 个 甲基信号 ,
个亚甲基信号 万个次甲基 乃个季碳 。 谱中从
一 之间共有 个信号 , ,
江 , , 〕 ,推测有苯环存在 。 除去
苯环 还有 个碳信号 ,化合物可能为苯丙素类物质 。
一 给出 〕十 。 这与苯丙素的分子量
相差甚远 化合物可能高度对称 。 一 防 月 ,
石 , , 另 户 , 另 户
月 , , 丹 , , , ,
月 , 夕 产 , 产 , ,
井 月 石 乃 多 另 月 ,
, , 一 , 。 一 一 一 ,
一 江 一 万 一 , 一
江 一 另 一 一 江
一 江 一 , 一 , 一 ,
一 江 一 万 一 另
一 万 一 , 一 万 一 一 ,
一 一 。 经与文献 对照 确定其为木脂素类
成分 一 。
化合物 无色油状物质 汾子式为 。 不饱和
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度为 。 谱结合 盯
和
分析可知 ,该化合物存在 个甲基信号 乃个亚
甲基信号 , 个次 甲基 , 个季碳 。 谱中从
一 之 间 共 有 个 信 号 ,
江 , , , , , ,
江 , , 〕 ,推测结构中存在两个苯
环 乃 一 之间 个信号的存在 ,进一步印
证了苯环 的存在 · 谱 中 , , 和
习处的信号显示结构中存在两个酚性甲氧基 ,
这一点从 谱中 和 两个信号也得
到佐证 。 谱中 除去 个芳香碳信号 个甲氧基
信号 还有 个信号 ,可能为两个 单元 。 推测该化合物
可能为木脂素 · 谱 中六个芳香氢信号 ,
多 、 月另 、 , , 分别
被归属为 一 、 一 和 一 多 、
多 、 月 , 另 个信号 ,分别被归属
为 一 、 一 和 一 。 这些芳香氢信号结合
谱 、 分析 表明 两个苯环均为 乃井三取代 。
谱中 乃 多 与 相关 乃 多 与
相关 表明两个甲氧基分别接在 一 位 、 一
位 。 一 位 、 一 位各连了一 个轻基 。 一 防
多 石 月另 石 月江 井 ,
石 , , , , , ,
, , , , , , , ,
月 井 江 那 , 那 ,
沐 另 沐汉 乃 , 乃
多 。 一 一 一 一 江一 一 江
一 江 一 , 一 , 一 ,
一 另 一 万 一 , 一
江 一 江 一 江 一 江
一 , 一 , 一 ,
一 一 一 万 一 一 。
经与文献 对照 确定化合物为 一 。
单体化合物的生物活性 「」
取对数生长期 一 、 、 一 细胞 胰蛋白
酶消化 转移至离心管离心 ,弃上清液 加入新的适量
或 培养基吹成单细胞悬液 根据不同细胞生
长速度 以适宜的细胞数接种于 孔板上 ,置于 培养
箱中培养 实验设对照组 加肿瘤细胞 、 不加药 、 空白
组 不加肿瘤细胞和药 和给药组 加肿瘤细胞和药 其中
给药组中每个药物设 巧 、 、 哪 个浓度 洪 个单
体药物 。 使每孔总体积为 ,各设 个复孔 ,继续在
士音养箱中培养 后 ,倒置显微镜下观察不同浓度的
药物对肿瘤细胞的影响 ,加入 继续培养 后 ,弃去
上清液 加入 溶解 震荡混匀后 在酶标仪上
波长处测定 值 作为存活细胞个数的相对值 ,实验重复
次 。 采用 软件处理 各组数据以见士 、 表示 样
本比较采用 检验 。 按下列公式计算抑瘤率
正常对 照孔 一 给药孔 正常对照 孔 一 空白对照 孔
结果
从墓头回醇提物中分离精制得到的化合物 、 化合
物 、化合物 对 一 、 、 一 肿瘤细胞均有
一定的抑制作用 ,其中 ,化合物 、 对 一 、 、
一 细胞有较强的抑制作用 并呈现一定的剂量关系 化
合物 对 细胞有较强的抑制作用 见表 。
表 个化合物作用 对肿瘤细胞的
抑制作用 办 弄士 、
组别 剂量林
一 一
对照组 一 士 士 士
化合物 士 。 士 。 “ ` 士 。
化合物 士 。 士 士 。
化合物 士 。 士 “ ` 。士 。
化合物 士 。 士 士
化合物 阶 士 。盯 抖 。士 。 “ ` 士 。刀
化合物 士 。 士 。 。士 。
化合物 。士 士 。 士 。
化合物 士 。 士 。 士 刀
化合物 士 士 “ ` 士 。
注 与对照组比较 , 尸 。 , 尸 。
结 论
肿瘤是严重威胁人类健康的一类常见疾病 ,其死亡率
仅次于心脑血管疾病 因此 寻找有效的抗肿瘤新药仍然迫
在眉睫 。 木脂素是一类由苯丙素氧化聚合而成的天然化合
物 结构类型多样 庄物活性广泛而且显著 是被认为最有
希望找到抗肿瘤活性成分的一大类化合物 。 本次研究从墓
头回中分离得到 种木脂素成分 ,并且该三类成分
、 一 、 一
对 一 、 、 一 肿瘤细胞均有一定的抑制作
用 是墓头回中具有较大开发潜力的抗肿瘤活性成分 为研
究异叶败酱抗肿瘤有效成分打下基础 。
参考文献
【〕 李廷芳 楼凤昌 唐于平 ,等 败酱属植物的研究概况 【〕 天
然产物研究与开发 一江 一
〕 万新 ,石 晋丽 ,刘勇 ,等 败酱属植物化学成分与药理作用
〕 国外医药 · 植物药分册 一 一
〕 召 , 声 翔
一
〕
一
〕 一
翔 〕 。 一
〕 玩 办 邵 办 〕
一
〕 月 召
〕
江 一
〕 凡 万 肠皿 工 。 比
〕 江塑〕 一 男
〕 工 即
〕
, 石 一
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