全 文 ：中 药 研 究
薯莨鞣质的提取、鉴别及对自由基的清除作用
岳峰1，2 王庆蓉3 张蕾蕾2 刘玉明3 石海(通讯作者)1 雷呈祥(通讯作者)3
1 安徽医科大学第一附属医院 安徽合肥 236000
2 阜阳职业技术学院 安徽阜阳 236031
3 海军医学研究所 上海 200433
摘 要 目的:制备薯莨鞣质并研究其清除自由基能力。方法:采用超声醇提法提取薯莨鞣质，用薄层层析和紫外可见分光光度
法鉴别，用 DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)法检测自由基清除能力。结果:薯莨中制备鞣质得率为 21． 09%，其甲醇溶液在
221nm处有一强紫外吸收峰，能清除 DPPH自由基，半抑制浓度为 0． 171mg /ml。结论:分离制备得到纯度较好的薯莨鞣质，其对
DPPH自由基具有很好的清除能力。
关键词 鞣质 薯莨 自由基 DPPH
薯莨(DioscoreaCirrhosaLour)是我国中南地区的一
种常用中草药，药用部分为薯莨块茎。薯莨味苦、酸、
涩、性微寒，能活血补血，收敛固涩，民间常用于止血、
抗菌，也用于治疗溃疡等［1］。现代药学研究表明，薯莨
的主要活性成分是鞣质，另外还含有甙类、酚类、蛋白
质、糖类、黏液质、淀粉及维生素 C 等成分。薯莨鞣质
为儿茶素类缩合鞣质，主要由儿茶素和表儿茶素缩合
而成，含有较多苯羟基，属多元酚类化合物，具有很好
的清除自由基的作用［2］。本文从薯莨中分离鞣质，研
究其对自由基的清除能力，以探索薯莨鞣质在预防和
治疗自由基引起的疾病方面的可能性。
材料与方法
1 试剂与仪器
薯莨购自上海雷允上药业有限公司，茶多酚
(EGCG≥59)购自安徽红星药业有限责任公司，1，1-二
苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)购自 Sigma公司，其他化学
试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。
主要仪器为 UV-2100 型紫外-可见分光光度计(上海尤
尼柯仪器有限公司)。
2 薯莨鞣质的制备
称取薯莨粉末 100g，加 90%乙醇 500ml，常温浸提
24h，回流提取 3 次，每次 1h，离心取上清，减压浓缩，真
空干燥。用 300ml90%甲醇重悬，超声提取 30min，离心
取上清，避光保存备用。
3 含量测定
按照参考文献［3］介绍的方法进行测定。
4 薄层扫描
提取液和对照品点样量各 3μl，分别点于同一硅胶
G薄层板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸(4∶ 1∶ 0． 05)为展开
剂展开，取出晾干，喷以 1%三氯化铁甲醇溶液，检视着
色斑点并拍照。
5 吸收曲线测定
以 90%甲醇作对照，用分光光度计测定待测品不
同波长下的吸光度，以波长为横坐标，相应的吸光度为
纵坐标，绘制吸收光谱曲线。
6 自由基清除实验
参考文献［4］。DPPH用 90%甲醇配制成 120mol /
L溶液，4℃避光保存备用。实验时，取待测液 0． 1ml 与
3ml120mol /LDPPH溶液加入同一试管中，混匀，避光放
置 30min，以 90%甲醇为空白对照，测定吸光度，波长
517nm。按下式计算自由基清除率:清除率 = ［(Ac-
Ai)/Ac］× 100%。式 中 :Ac 为 0． 1 ml 90% 甲 醇 加
3． 0ml DPPH 溶液的吸光度;Ai为 0． 1ml 待测液加 3． 0
ml DPPH溶液的吸光度。
7 统计学处理
清除率以(x ± s)表示，应用 SPSS13． 0 进行数据统
计处理，相关性采用变量直线相关分析。
结 果
1 薯莨鞣质制备
取薯莨粉末 100g，用 90%乙醇浸提，回流提取 3
次，减压浓缩干燥，得膏 23． 2g，出膏率为 23． 2%。再用
300ml90%甲醇超声提取 30min，离心取上清。参考文
献［1］介绍的方法测定鞣质含量，为 7． 03g /ml。经计
算，该方法从薯莨中制备鞣质的得率为 21． 09%。再用
90%甲醇将 0． 1ml7． 03g /ml 的薯莨鞣质调整为 10mg /
ml，作为测试母液。
2 薯莨鞣质鉴别
·875· CJTCM Jul． 2013 Vol． 25 No． 7
DOI:10.16448/j.cjtcm.2013.07.029
对照品为茶多酚，浓度也是 10mg /ml 的 90%甲醇
溶液。以氯仿-甲醇-冰醋酸(4:1:0． 05)为展开剂展开
层析，展开后，取出晾干，喷以 1%三氯化铁甲醇溶液，
显现着色斑点(见图 1)。
1 茶多酚 2 薯莨鞣质
图 1 薯莨鞣质和茶多酚的薄层层析图 图 2 薯莨鞣质紫外可见光吸收曲线
3 薯莨鞣质的吸收曲线
用 90%甲醇等比稀释薯莨鞣质后，用紫外可见分
光光度计测定其吸收曲线。图 2 为 0． 1mg / l 薯莨鞣质
在 200 ～ 800nm波长下的连续吸收光谱曲线。可以看
出，薯莨鞣质在 221nm处有一强紫外吸收峰，279nm处
有另一吸收峰。
4 对 DPPH自由基的清除作用
DPPH自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在
517nm处有强吸收。当有自由基清除剂存在时，由于
与其单电子配对可使其吸收峰值下降，其程度与其接
受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行
快速的定量分析。结果提示，薯莨鞣质具有较好的 DP-
PH自由基的清除能力(图 3A) ，0． 4mg /ml 时，可达 92．
44%。且在给定条件下，0． 3mg /ml 以下薯莨甲醇溶液
与其自由基清除能力呈正相关(图 3B) ，相关系数 r =
0． 992，其中半抑制浓度 IC50 = 0． 171mg /ml。
图 3 薯莨鞣质对 DPPH自由基的清除率
讨 论
自由基是指能独立存在的，含有一个或一个以上
不配对电子的任何原子或原子团，具有很强的氧化性。
在生物体内主要是氧自由基，通称活性氧。活性氧具
有一定的生理功能，参与了许多重要的生命过程，如细
胞的增殖、分化、凋亡、免疫和信号传导等过程。但是，
当人体中的自由基超过一定的量，并失去控制时，可导
致人体正常细胞和组织的损坏，进而引起慢性疾病及
衰老效应［5］。近年来，关于清除自由基以及对抗过氧
化反应的药物和方法成为自由基医学研究的热点。超
氧化物歧化酶、维生素 E、维生素 C、硒、β-胡萝卜素、辅
酶 Q10 等多种物质都对自由基有清除作用［6］。从中草
药中分离的生物类黄酮、番茄红素、鞣质、多糖和生物
碱等也大多有自由基清除作用，且中药抗氧化剂具有
经济和毒、副作用小等明显的优点［7］。
薯莨是我国中南地区的一种常用中草药，鞣质含
量很高［2］。薯莨鞣质为儿茶素类缩合鞣质，含有较多
酚性羟基，具有很好的清除自由基的作用，有多种药理
活性［8］。本文采用乙醇和甲醇分步提取薯莨鞣质，得
率达到 21． 09%。薄层层析检测表明其纯度较好，经紫
外可见分光光度计扫描分析，发现其在 221nm 处和
279nm有紫外吸收峰。1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1，1-
Diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)是一种很稳定的氮中
心自由基，在 517nm 处有一强吸收，其醇溶液呈紫色。
当有自由基清除剂存在时，与 DPPH 单电子配对而使
其吸收值下移，下移程度与其接受的电子数量成定量
关系，因而被广泛用于定量测定生物试样和食品的抗
氧化能力［4，9］。本文也检测了薯莨鞣质的清除 DPPH
自由基能力。结果表明薯莨鞣质具有较好的 DPPH 自
由基的清除能力，且在 0． 3mg /ml 浓度以下与自由基清
·975·中医药临床杂志 2013 年第 25 卷第 7 期
除能力呈正相关(r = 0． 992) ，IC50 = 0． 171mg /ml。提
示薯莨鞣质对 DPPH 自由基的清除作用能力较强，这
为薯莨的进一步开发和应用提供了很好的实验依据。
参考文献
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9 Gaikwad P，Barik A，Priyadarsini KI，Ｒao BSM． Antioxidant activities
of phenols in different solvents using DPPH assay． Ｒes Chem In-
termed，2010，36:1065
收稿日期:2012 － 09 － 15 责任编校:汪新安
反相高效液相色谱法测定双黄连有效部位中连翘苷的含量*
孟璐1 李淑芳2 申凌娜2 王淑美3
1 河南省洛阳正骨医院 471000
2 河南省郑州市第三人民医院 450000
3 广东药学院 广东广州 510006
* 基金项目:国家自然科学基金项目(81073024) ，广东省自然基金
项目(945102240) ，河南省教育厅自然基金项目(0411044800)
摘 要 目的:建立双黄连有效部位中的连翘苷的含量测定方法。方法:采用 Venusil XBP C18(250mm × 4． 6mm，5μm)色谱柱，
流动相为甲醇-0． 05%磷酸水(35∶ 65) ，流速:1． 0ml /min，检测波长:278nm。结果:连翘苷平均回收率为 99． 91%，ＲSD = 2． 95%。
结论:所建立的方法简便、准确，可作为有效部位的质量控制方法。
关键词 双黄连 连翘苷 高效液相 色谱法
中药双黄连由金银花、黄芩、连翘配伍组成，具有
疏风解表、清热解毒之功效。适用于外感风热引起的
头痛身痛，恶寒发热，喉痛咳嗽等诸症。［1］我们为了纯
化该复方的有效部位，提供工艺优化的依据，故采用
AB-8 大孔树脂对双黄连中金银花、连翘提取物的有效
成分吸附性能、影响吸附性能的因素进行了研究，并用
该法合并药效学试验来筛选双黄连有效部位。通过对
复方有效部位及其主要化学成分的研究分析，以有效
部位中的主要有效成分连翘苷的含量，来达到控制双
黄连有效部位质量的目的。本文建立了双黄连有效部
位中的连翘苷 ＲP-HPLC 含量测定方法，并对 3 批样品
进行含量测定。
仪器和试药
LC-2010A 高效液相色谱仪(日本岛津) ，SPD-
M10Avp二极管阵列检测器(日本岛津) ;KQ-100 型超
声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;BSZZ4S型电
子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。连翘
苷对照品(批号:752-200108)购自中国药品生物制品
检定所;金银花和连翘药材分别采自河南封丘金银花
基地和河南洛阳龙峪湾，黄芩药材购自河南郑州药材
批发市场，经河南中医学院药学院陈随清教授鉴定分
别为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb． 的干燥
花蕾，木犀科植物连翘 Forsythia suspensa(Thunb．)Vahl
的干燥果实，唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis
Georgi)的干燥根。甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，
其他试剂均为分析纯。
方法和结果
1 色谱条件
Venusil XBP C18(250mm × 4． 6mm，5μm)色谱柱
(博纳艾杰尔科技有限公司) ;流动相:甲醇-0． 05%磷
酸水(35∶ 65) ;流速:1． 0ml /min;检测波长:278nm;柱
温:25℃。［2］
2 有效部位样品的制备
双黄连中金银花、连翘药材粗粉按处方比例混合，
10 倍量 80%乙醇温浸 30min，回流提取 2 次，每次 1h，
合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，用蒸馏水分
·085· CJTCM Jul． 2013 Vol． 25 No． 7