全 文 :仙茅水提物对 L02 细胞中 GLU、TG、TC 、TP影响,探讨仙茅对
糖、脂、蛋白三大物质代谢的影响。人体所需能量的直接来源是
三磷酸腺苷(ATP)的分解,乳酸是机体重要的能源物质之一,在
乳酸脱氢酶(LDH)催化下生成丙酮酸,最后丙酮酸转化成乙酰
CoA进入三羧酸循环,生成 ATP[4]。因此,检测仙茅对 L02 细胞
中 LAC、LDH的影响,可考察其对能量代谢的影响。
实验应用 MTT[5]法观察不同浓度仙茅水提物对细胞活性
的影响,选择合适的实验浓度。实验结果显示,在 800μg 生药 /
ml浓度时,仙茅水提物显示一定的细胞毒性,随着浓度降低,对
细胞损害越小,200μg生药 /ml 及更低的浓度时,对细胞基本没
有损害,与空白组接近,故选用 200μg生药 /ml浓度作为中剂量
组,同时 400、100μg生药 /ml浓度作为大、小剂量组。实验结果
显示,仙茅水提物大、中剂量时可使 L02 细胞培养液中 GLU、TP
含量增加,TG含量降低,与空白组比较,有显著差异。仙茅水提
物小剂量的影响则不明显。可见,仙茅可以提高 L02 细胞糖、
脂、蛋白类物质的代谢水平,具有促进肝细胞代谢功能的作用,
仙茅水提物大、中剂量时可使 L02 细胞培养液中 LAC 含量降
低,LDH含量增加,与空白组比较,有显著差异。可见仙茅可通
过增加 LDH含量,促进 LAC转化,增强机体能量,因此,仙茅可
促进 L02 细胞能量代谢。实验显示出辛热中药仙茅对机体物
质代谢及能量代谢有一定的促进作用。其具体的作用机制还
需进一步探讨。
参考文献
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滇越金线兰对高脂饮食联合 STZ诱导的大鼠血糖、血脂和肾功能的影响*
蔡金艳1,2,王义娜1,朱 恩1,王成蹊1,张德志1,祝晨蔯2
(1广东药学院药科学院,广州 510006;2广州中医药大学中药学院,广州 510006)
摘 要 目的:研究滇越金线兰等剂量的总膏及其各极性部位对高脂饮食联合 STZ诱导的大鼠模型血糖、血脂和肾功能的影
响。方法:对滇越金线兰的总膏用不同极性的溶剂萃取,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。测定总膏和各极
性部位对高脂饮食联合 STZ诱导的模型大鼠给药后血浆的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度
脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)。肾脏切片,进行病理学检查。结果:滇越金线兰的乙酸乙酯部位(4 g /kg)可
以显著降低模型大鼠的血糖、改善血脂代谢,减少肌酐和尿素氮。各给药部位对糖尿病并发的早期肾损害有改善作用。结论:乙酸
乙酯部位为滇越金线兰降血糖、降血脂和改善糖尿病肾病并发症的主要活性部位。
关键词 滇越金线兰;降血脂;肾功能
金线莲为兰科(Orchidaceae)开唇兰属(Anoectochilus )珍
稀濒危药用植物,主产于我国福建、台湾和云南等省[1,2],民间
素有药王、金草之美誉。近年来主要用于治疗高血压、糖
尿病、心脏病、肺炎、急慢性肝炎、肾炎等症[3]。花叶开唇兰 A.
roxburghii(wall.)Lindl.、台湾开唇兰 A. formosanus 和滇越金线
兰 A. chapaensis为其主要药用品种,民间常把它们混为金线
莲,作同一物使用[4]。金线莲药材为无花全草干品,难以从性
状鉴别。目前野生金线莲日渐匮乏,且市场较为混乱,急切需要
科学的方法对同名异物的金线莲药用品种加以研究和甄别。
目前对花叶开唇兰[5 ~ 12]和台湾开唇兰[13 ~ 15]的化学成分和药理
活性近年有较多报道。滇越金线兰植株粗壮,叶片宽大,当地俗
称大叶金线莲,对该植物的研究仅限于物种鉴定[4]、资源调
查[16]等方面,对其药理活性和化学成分研究笔者未见报道。本
研究采用高脂喂养联合低剂量 STZ 诱导的糖尿病模型,探寻滇
越金线兰对 II型糖尿病动物模型血糖、血脂和肾功能的影响。
1 材料和方法
1. 1 试验药物 18. 8kg滇越金线兰全草鲜品,购于云南文山。
经广东药学院中药学院马鸿雁老师鉴定为兰科开唇兰属滇越
金线兰 Anoectochilus chapaensis Gagnep.全草。自然晾干得 1. 8
kg干品,经剪碎后用 95%乙醇加热回流提取 4 次,每次 4 h,过
滤,回收溶剂,得 321 g 总膏。总膏粗提物加适量水悬浮,依次
用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取液浓缩成浸膏得石油醚
部位 45 g,乙酸乙酯部位 35 g,正丁醇部位 88. 2 g,水部位 154. 7
g。总膏及各极性部位均匀溶解或悬浮于蒸馏水,均配制成折合
生药材浓度约为 1g /ml的溶液备用。
1. 2 动物 4 ~ 5 周雄性 SD 大鼠 60 只,体重 80 ~ 110 g,购于
611 中药药理与临床 2012;28(2)
* 基金项目:国家自然科学基金项目(81001628)
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2012.02.046
广东省医学实验动物中心。饲养在室温(18 ~ 25℃) ,相对湿度
50% ~80%的环境条件下,每笼 6 只,共分 10 笼,自由采食、饮
水,适应饲养 10 天。高糖高脂饲料(配方:蛋黄 2. 5%、蔗糖
20%、猪油 10%、基础饲料 67. 5%)喂养四周后,腹腔注射 STZ
(35 mg /kg)造模。基础料的营养成分符合国标《GB1492413-
2001·实验动物·小鼠大鼠配合饲料》的营养标准。
1. 3 试剂 链脲佐菌素(STZ)购于美国 Sigma 公司(批号:
S0130)Sigma 公司产品 (批号:S0130) ,临用前用 0. 1 mol /L 柠
檬酸盐缓冲液 (pH 4. 4)配成 1%的溶液(10 mg /ml STZ) ;甘油
三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密
度脂蛋白胆固醇(LDL)试剂盒,购于北京北化康泰临床试剂有
限公司。肌酐、尿素氮试剂盒购于南京建成生物工程研究所。
1. 4 方法 各组大鼠高糖高脂饲料喂养 4 周后,禁食过夜后,
将 STZ 用 0. 1 mmol /L pH4. 2 的无菌柠檬酸缓冲液配制成 1%
STZ 溶液,且避光、冰浴、即用。按 35 mg /kg 腹腔注射 STZ 造
模,继续高脂饮食,观察大鼠饮食、饮水量、尿量、毛色等情况,两
周后测随机血糖,选取血糖高于 11. 1 mmol /L 者作为高血糖实
验大鼠。将高血糖模型大鼠随机分成 7 组,模型对照组、阳性对
照组、石油醚部位给药组、乙酸乙酯部位给药组、正丁醇部位给
药组、水部位给药组、总膏给药组,每组 8 只,灌胃给药。总膏及
各部位给药剂量折算为生药材均为每日 4 g /kg体重,模型对照
组给予同体积生理盐水,阳性对照组每日给予 60 mg /kg盐酸二
甲双胍。糖尿病模型大鼠具有典型的三多一少症状,连续 14
天,每日观察记录体重、饮食、饮水、垫料,隔日检测尿糖水平,每
三天检测血糖值(取尾静脉血用怡成超越 JPS-6 血糖仪检测)。
给药 2 周后,将所有 SD 大鼠禁食过夜,3%戊巴比妥(30mg /kg)
麻醉大鼠,将鼠仰卧固定于鼠固定板上,剪去胸腹部位的被毛,
用 75%酒精消毒皮肤,剪开腹腔,腹主动脉采血,血样置入肝
素-锂抗凝真空管中,3000 rpm 离心 10 min,分离血浆。测定血
浆肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、
高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)含
量。取肾脏,用 10% 福尔马林浸泡,固定、染色、镜检,HE 染色
观察病理组织学变化。
2 结果
2. 1 滇越金线兰对血糖和体重的影响 造模前,各实验组大鼠
的血糖值平均在 (6. 5 ± 3. 28)mmol /L。造模成功后糖尿病大
鼠逐渐出现毛色灰暗、多饮、多食、多尿、消瘦等症状。造模 10
天以后大鼠血糖显著升高,模型较稳定。各给药组对大鼠随机
血糖和体重的实验结果如表 1 所示,给药 14 天以后,二甲双胍
给药组大鼠的血糖平均值从 16. 45 ± 1. 74 降低到 7. 1 ± 0. 24
mmol /L。乙酸乙酯部位给药组的随机血糖也可见明显降低,从
给药前 22. 37 ± 4. 57 至 12. 57 ± 3. 45 mmol /L,而且该组大鼠的
体重值明显高于模型对照组。其它部位给药对血糖与模型组
相比,无显著性差异:总膏组给药前后分别为 20. 18 ± 3. 8 和
19. 71 ± 6. 74 mmol /L,石油醚部位组给药前后分别为 18. 20 ± 3.
8 和 17. 67 ± 5. 79 mmol /L,正丁醇部位组给药前后分别为 19. 36
± 2. 86 和 16. 55 ± 3. 89 mmol /L,水部位给药前后分别为 23. 77
± 3. 58 和 20. 90 ± 4. 89 mmol /L。
表 1 各给药组对血糖和体重的影响(珋x ± s,n = 8)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g /kg)
给药前
血糖(mmol /L) 体重(g)
给药 14天后
血糖(mmol /L) 体重(g)
模型对照 8 20. 73 ± 4. 87 248. 00 ± 29. 00 17. 17 ± 3. 68 222. 00 ± 36. 00
二甲双胍 8 0. 06 16. 45 ± 1. 74 240 ± 18. 4 7. 1 ± 0. 24* 240. 5 ± 18. 6
滇越金线兰总膏 8 4 20. 18 ± 3. 8 241. 63 ± 20. 25 19. 71 ± 6. 74 223. 71 ± 33. 21
滇越金线兰石油醚部位 8 4 18. 20 ± 3. 8 253 ± 18. 57 17. 67 ± 5. 79 247. 00 ± 20. 57
滇越金线兰乙酸乙酯部位 8 4 22. 37 ± 4. 57 251. 67 ± 5. 71 12. 57 ± 3. 45* 259. 83 ± 13. 62
滇越金线兰正丁醇部位 8 4 19. 36 ± 2. 86 251. 38 ± 13. 17 16. 55 ± 3. 89 244. 25 ± 23. 72
滇越金线兰水部位 8 4 23. 77 ± 3. 58 285. 00 ± 10. 29 20. 90 ± 4. 89 250. 17 ± 13. 84
* P < 0. 05 vs. STZ + vehicle group(下同)
2. 2 滇越金线兰对血脂四项检测结果 如表 2 所示,与模型组
相比,石油醚部位给药组大鼠的血甘油三酯含量显著降低。水
部位给药组大鼠的血甘油三酯含量显著升高。乙酸乙酯部位给
药组和正丁醇部位给药组大鼠的总胆固醇和低密度脂蛋白胆
固醇的含量显著降低。除了水部位给药组,其它部位给药组之
间低密度脂蛋白胆固醇的含量测定结果之间无显著性差异,即
总膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能显著降低低
密度脂蛋白胆固醇的含量。总膏给药组、乙酸乙酯部位给药组
和水部位给药组大鼠的血浆高密度脂蛋白含量明显升高。
表 2 滇越金线兰各部位对血脂四项的影响(珋x ± s,n = 8)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g /kg)
甘油三酯
(mmol /L)
总胆固醇
(mmol /L)
高密度脂蛋白
胆固醇(mmol /L)
低密度脂蛋白
胆固醇(mmol /L)
模型对照 8 16. 15 ± 3. 46 39. 10 ± 1. 73 0. 57 ± 0. 09 1. 35 ± 0. 09
二甲双胍 8 0. 06 22. 15 ± 4. 84 46. 19 ± 1. 64 0. 50 ± 0. 07 0. 53 ± 0. 07
滇越金线兰总膏 8 4 20. 63 ± 10. 90 33. 84 ± 3. 81 0. 66 ± 0. 13* 1. 04 ± 0. 16*
滇越金线兰石油醚部位 8 4 9. 86 ± 3. 37* 39. 88 ± 5. 62 0. 49 ± 0. 20 1. 01 ± 0. 10*
滇越金线兰乙酸乙酯部位 8 4 22. 32 ± 7. 44 31. 70 ± 4. 50* 0. 62 ± 0. 05* 1. 00 ± 0. 31*
滇越金线兰正丁醇部位 8 4 16. 03 ± 9. 00 23. 03 ± 2. 94* 0. 48 ± 0. 27 1. 01 ± 0. 16*
滇越金线兰水部位 8 4 35. 85 ± 10. 21* 68. 90 ± 50. 17 0. 72 ± 0. 14* 1. 22 ± 0. 28
2. 2 滇越金线兰对血浆肌酐和尿素氮含量结果 乙酸乙酯部
位给药组的肌酐和尿素氮值显著低于模型组和其他给药组,提
示乙酸乙酯部位对糖尿病肾损害可能有较好的防御作用。其他
组大鼠的血肌酐值无显著性差异,此结果可能与实验周期相对
较短、未进展到终末期损害有关。
表 3 滇越金线兰各部位对肌酐和尿素氮的影响(珋x ± s,n = 8)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g /kg)
肌酐 (μmol /L) 尿素氮 (mmol /L)
模型对照 8 100. 833 ± 9. 886 10. 181 ± 2. 421*
二甲双胍 8 0. 06 96. 250 ± 2. 917 11. 017 ± 0. 855
滇越金线兰总膏 8 4 164. 389 ± 31. 195 12. 112 ± 3. 804*
滇越金线兰石油醚部位 8 4 165. 000 ± 61. 875 9. 026 ± 1. 211*
滇越金线兰乙酸乙酯部位 8 4 84. 028 ± 7. 387* 6. 137 ± 0. 024*
滇越金线兰正丁醇部位 8 4 241. 898 ± 70. 329 12. 242 ± 3. 222
滇越金线兰水部位 8 4 141. 167 ± 4. 947 9. 379 ± 1. 289*
2. 3 滇越金线兰对肾脏 HE 染色结果 总膏、石油醚部位、乙
酸乙酯部位、正丁醇部位和阳性给药组肾小管、肾小球形态普遍
好于模型组。绝大多数肾小管管腔较规则,核大,圆,染色深,胞
浆丰富,个别区域肾小管上皮细胞肿胀或水肿,出现部分核溶
解。尤其乙酸乙酯部位给药组大鼠肾脏切片染色结果较好,细
胞核圆,染色深,形状规则,界限清晰。但水部位给药组的大鼠
肾脏可见广泛水肿和空泡变性。模型组可见肾小管上皮细胞广
泛的空泡变性,血管严重充血,广泛的小血管及静脉严重充血,
部分小血管破裂,集合管上皮广泛地坏死,脱落,管腔内可见血
细胞,管型尿。
711中药药理与临床 2012;28(2)
图 1 各组肾脏切片 H-E染色图(10* 40 倍)
3 讨论
虽然滇越金线兰各部位均没有将血糖降至正常水平,但是
与给药前相比,可见随机血糖有不同程度的降低,尤其乙酸乙
酯部位具有显著的降血糖作用,从给药前 22. 37 ± 4. 57 至 12.
57 ± 3. 45 mmol /L,而且该组大鼠的体重值明显高于模型对照
组,对糖尿病模型大鼠的消瘦状态有所改善。
血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平是
动脉粥样硬化病的重要危险因子 [17]。本研究结果表明,滇越
金线兰各部位对血脂四项的影响各有不同,但总体上可看出乙
酸乙酯部位与其降血脂药效密切相关,能降低血清中总胆固醇
和低密度脂蛋白胆固醇,升高高密度脂蛋白胆固醇的量,提示
乙酸乙酯部位具有明显的降血脂功效,可能对高血脂有一定的
预防和治疗作用,对动脉粥样硬化病和冠心病也有一定的预防
作用。今后应对该部位的化学成分进行深入的研究。
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的并
发症,也是糖尿病患者的主要死亡原因之一。预防和延缓 DN
的发生和发展,对提高糖尿病患者的存活率,改善其生活质量
具有十分重要的意义。而中医药对防治 DN有它独特而重要的
作用,目前已成为学者们的研究热点[18]。
高糖、高脂膳食可成功制备胰岛素抵抗大鼠模型,在类似
胰岛素抵抗大鼠的基础上加腹腔注射 STZ 诱导 II 型糖尿病肾
病(DN)模型,肾脏随之而来的损害与时间成正比,且病理生理
比较符合人类 II型糖尿病肾病的特点,所以更适合用于 DN 早
期防治措施的研究[19]。本实验采用此方法制备的动物模型生
化指标与正常组有明显差异,但肾脏病理未见到肾小球弥漫性
硬化及结节性硬化的典型改变,而仅见轻度的病理损害,也符合
DN 的早期研究。本研究中,滇越金线兰乙酸乙酯部位给药组
的肌酐和尿素氮值显著低于模型组和其他给药组,且除了水部
位,其它各给药组老鼠的肾脏病理切片结果显示肾脏形态和结
构优于模型组,尤其是乙酸乙酯部位给药组表现出优于其它各
组的效果。表明滇越金线兰植物对糖尿病肾病并发症有可能较
好的改善作用,其物质基础值得进一步研究。
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Active fractions in A. chapaensis on blood glucose,blood lipid and renal function
in high lipid diet plus STZ induced diabetic rats
Cai Jinyan1,2,Wang Yina1,Zhu En1,Wang Chengxi1,Zhang Dezhi1,Zhu Chenchen2
(1 School of Pharmacy,Guangdong Pharmaceutical College,Guangzhou 510006;
2 School of Chinese Materia Medica,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006)
Objective:To investigate the effect of different fractions at the same dose from A. chapaensis on blood lipid and renal function in high
lipid diet plus STZ induced diabetic rats. Methods:The total EtOH extract was suspended in distilled water and partitioned in sequence with
petrol ether(PE) ,ethyl acetate(EtOAc) ,n-BuOH and H2O,thus yielding four fractions. Blood glucose,total cholesterol (TC) ,triglycer-
ide (TG) ,low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) ,and high density lipoprotein cholesterol(HDL-C) ,creatinine(CRE)and blood usea
nitrogen(BUN)in rats' plasma were assayed. Morphological examination of the kidneys were performed. Results:On the whole,the EtOAc
fraction of A. chapaensis(4 g /kg)showed the best profile in reducing blood glucose,improving hyperlipidemic indexes and renal functions.
Conclusion:The EtOAc fraction from A. chapaensis may be the active part of reducing blood lipid and improving renal function.
Key words A. chapaensis(滇越金线兰) ;reducing blood lipid;renal function
荜澄茄的解热作用研究
*
胡竟一,李兴平,白筱璐,邓文龙**
(四川省中医药科学院,成都 610041)
摘 要 目的:研究荜澄茄提取物对不同发热模型大鼠体温的影响。方法:通过内毒素,酵母和 2,4-二硝基苯酚对大鼠进行
发热造模,观察荜澄茄水提取物的解热效果。结果:荜澄茄水提物 15g /kg 和 30g /kg 对内毒素所致发热大鼠有良好的解热作用,
20g /kg和 40g /kg对干酵母所致发热大鼠有良好解热作用,40g /kg 对 2,4-二硝基苯酚所致发热大鼠有良好解热作用。结论:荜澄茄
水提物对三个发热大鼠模型均具有良好的解热作用。
关键词 荜澄茄;解热
荜澄茄(Litsea cubeba(Lour.)Pers.)为樟科木姜子属植
物,辛、温,具有温中散寒,行气止痛的功效,主治胃寒呕厥,
胸腹冷痛,寒疝腹痛,寒湿郁滞,小便浑浊[1]。现代研究表明,
荜澄茄具有多方面的药理活性,其挥发油等主要具有平喘[2,3]、
911中药药理与临床 2012;28(2)
* 重大创新药物 2009ZX09103-439;国家重点基础研究发展计划项目(2007CB512604) ;国家中医药管理局重点研究室项目 **通讯作者