全 文 ：收稿日期:2015-01-14
基金项目:国家自然科学基金(81173653);西南民族大学 2015 年研究生创新型科研项目(CX2015SZ031)
作者简介:刘盼盼(1991-)，男，在读硕士研究生，专业方向:民族药物研究;Tel:13709021262，E-mail:swun_lpp@ 163. com。
* 通讯作者:刘圆，Tel:028-85528812，E-mail:499769896@ qq. com。
UPLC法同时测定彝药多星韭中四种核苷类成分的含量
刘盼盼1，许云章1，王静霞1，赵小燕1，刘 圆2*
(1. 西南民族大学化学与环境保护工程学院，四川 成都 610041;2. 西南民族大学民族医药研究院，四川
成都 610041)
摘要 目的:建立 UPLC同时测定彝医药食同源植物多星韭不同部位腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌
呤核苷的方法，比较不同采收期不同部位 4 种核苷类成分的含量。方法:采用 UPLC 法，色谱柱为 ACQUITY UPLC
HSS T3(100 mm ×2. 1mm，1. 8 μm)，流动相为甲醇-水，梯度洗脱，柱温 30 ℃，体积流量 0. 2 mL /min，进样量 2 μL，检
测波长为 260 nm。结果:腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌呤核苷含量分别在 6. 80 ～ 95. 20 μg /mL、6. 70 ～
93. 80 μg /mL、6. 50 ～ 91. 00 μg /mL、7. 20 ～ 100. 80 μg /mL 线性范围内与峰面积呈良好线性关系，r 为 0. 9995 ～
0. 9999，平均回收率为 98. 25% ～ 101. 38%，ＲSD≤2. 32%;4 种核苷类成分总含量在花期前 ＞花期后，花蕾 ＞叶 ＞
种子 ＞根。结论:建立的方法操作简单、稳定性好、准确可靠，可用于同时测定药食同源植物多星韭中 4 种核苷类
成分的含量，为开发利用多星韭提供依据。
关键词 多星韭;UPLC;含量测定;腺嘌呤;鸟嘌呤核苷;胸腺嘧啶核苷;腺嘌呤核苷
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)08-1618-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 08. 013
多星韭 Allium wallichii Kunth，又名山韭菜、野
韭菜等。其味辛、甘，性平，为彝药材罗窝莫的来源
之一，全草入药，具有活血散瘀、祛风止痒的功
效〔1，2〕。在民间，多星韭也是一种非常有名的药食
同源植物〔3，4〕。目前国内外研究表明，葱属植物含
有含硫化合物、甾体皂苷、黄酮等〔5-7〕，具有抗血小板
聚集、抗肿瘤及抗真菌等生物活性〔8，9〕，具有很好的
开发价值。有文献〔10，11〕报道从韭菜籽中分离得到
了腺嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌呤和胸腺嘧啶等
核苷类成分。核苷类成分是生物细胞维持生命活动
的基本组成元素，具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、抗
炎、抗心肌缺血、改善心脑血液循环等多种生物活
性〔12〕。因此，本研究以腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧
啶核苷和腺嘌呤核苷为指标，采用 UPLC 法对多星
韭不同部位 4 种核苷类成分的含量进行测定，以期
为多星韭的质量控制提供实验数据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Waters Acquity H-Class UPLC 超高效液
相色谱仪，包括四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二
极管阵列检测器以及 Empower 3 工作站(美国 Wa-
ters公司);DHG-9246 型电热恒温鼓风干燥箱(上海
精宏实验设备有限公司);KQ-250B 超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司);AE240S 梅特勒电子
分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司);IKA ＲV8
Ⅴ型旋转蒸发仪(艾卡广州仪器设备有限公司);
HX-200 型高速中药粉碎机(浙江永康溪岸五金药具
厂) ;TGL-16 型台式高速冷冻离心机(四川蜀科仪器
有限公司)。
1. 2 材料 甲醇(色谱纯，Fischer公司)，水为超纯
水。腺嘌呤(批号:X-060-140801)、鸟嘌呤核苷(批
号:N-021-140730)、胸腺嘧啶核苷(批号:X-074-
131208)、腺嘌呤核苷(批号:X-022-140108)对照品
购于成都瑞芬思生物科技有限公司，所有对照品经
UPLC峰面积归一化法计算，质量分数均大于 98%。
多星韭于 2012 年 9 月和 2014 年 7 月采集于贵州省
毕节市赫章县兴发苗族彝族回族乡大韭菜坪，经笔
者刘圆教授鉴定为百合科葱属植物多星韭 Allium
wallichii Kunth的全草;家种韭菜采集于贵州省毕节
市赫章县城关镇黄泥村路边，经鉴定为百合科葱属
植物韭 Allium tuberosum Ｒottl. ex Spreng. 的全草;韭
菜籽药材购于成都市同仁堂药店和成都杏林医药连
锁公司，经鉴定为百合科葱属植物韭 Allium tuberos-
um Ｒottl. ex Spreng. 的干燥种子。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱为 ACQUITY UPLC HSS T3
(100 mm ×2. 1 mm，1. 8 μm);流动相为甲醇(A)-
水(B)，梯度洗脱(0 ～ 1 min，5% A;1 ～ 3 min，5% ～
8% A;3 ～ 3. 5 min，8% ～ 9% A;3. 5 ～ 4 min，9% A;4
～ 5 min，9% ～ 10% A;5 ～ 6 min，10% ～ 14% A;6 ～
6. 5 min，14%A;6. 5 ～ 7. 5 min，14% ～ 16% A;7. 5 ～
·8161· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 8 期 2015 年 8 月
11 min，16%A);体积流量 0. 2 mL /min;柱温 30 ℃;
检测波长为 260 nm;进样量 2 μL。理论板数按腺嘌
呤计算不低于 3 000。
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品腺
嘌呤 3. 40 mg、鸟嘌呤核苷 3. 35 mg、胸腺嘧啶核苷
3. 25 mg、腺嘌呤核苷 3. 60 mg 于 10 mL 棕色量瓶
中，加水溶解定容，制成含腺嘌呤 0. 340 mg /mL、鸟
嘌呤核苷 0. 335 mg /mL、胸腺嘧啶核苷 0. 325 mg /
mL、腺嘌呤核苷 0. 360 mg /mL 的对照品储备液，分
别精密吸取各对照品储备液适量于同一 10 mL棕色
量瓶内，加水定容到刻度，即为混合对照品溶液，4
℃冰箱保存，备用。
2. 3 供试品溶液的制备 准确称取多星韭样品粉
末(过五号筛)0. 5 g 于 50 mL 具塞离心管内，加水
30 mL，密塞，称定重量，超声(250 W，40 kHz)处理 1
h，放冷至室温，再称定重量，用超纯水补足减失的重
量，摇匀，10 000 r /min 离心 10 min，取上清液过
0. 22 μm微孔滤膜，即得。
2. 4 专属性试验 按“2. 1”项下色谱条件，腺嘌
呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌呤核苷的混合
对照品溶液和多星韭花蕾供试品溶液的 UPLC 图见
图 1，混合对照品溶液及供试品溶液中 4 种核苷类
成分分离度良好，达到了基线分离。
2. 5 线性关系考察 分别精密量取 4 种对照品溶
液 0. 2、0. 4、0. 8、1. 6、2. 0、2. 8 mL 于 10 mL 棕色量
瓶内，加水定容，以“2. 1”项下色谱条件测定
图 1 混合对照品(A)和多星韭样品(B)UPLC图
1. 腺嘌呤 2. 鸟嘌呤核苷 3. 胸腺嘧啶核苷 4. 腺嘌呤
核苷
积。以峰面积为纵坐标(Y)，对照品质量浓度为横
坐标(X)进行线性回归，得回归方程，以信噪比 S /N
= 3 作为检出限(LOD)，S /N = 10 作为定量限
(LOQ)，结果见表 1。
2. 6 精密度试验 精密吸取“2. 2”项下配制的混
合对照品溶液，按“2. 1”项下色谱条件连续进样 6
次，记录峰面积。结果腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧
啶核苷、腺嘌呤核苷峰面积的 ＲSD 分别为 1. 55%、
0. 78%、1. 43%、0. 70%。表明仪器精密度良好。
表 1 多星韭中 4 种核苷类成分的线性关系考察结果
化合物 线性方程 r 线性范围 /(μg /mL) LOQ/(μg /mL) LOD/(μg /mL)
腺嘌呤 Y = 28464X － 33709 0. 9995 6. 80 ～ 95. 20 0. 952 0. 324
鸟嘌呤核苷 Y = 9980X + 28. 518 0. 9997 6. 70 ～ 93. 80 0. 728 0. 243
胸腺嘧啶核苷 Y = 10638X + 140. 25 0. 9999 6. 50 ～ 91. 00 0. 568 0. 182
腺嘌呤核苷 Y = 14565X + 840. 3 0. 9999 7. 20 ～ 100. 80 0. 312 0. 102
2. 7 重复性试验 精密称取同一批多星韭样品粉
末(过五号筛)6 份，按照“2. 3”项下方法制备供试
品溶液，“2. 1”项下色谱条件测定，记录峰面积。结
果腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌呤核苷
含量 的 ＲSD 分 别 为 1. 92%、1. 26%、1. 05%、
1. 71%。表明方法重复性良好。
2. 8 稳定性试验 取多星韭样品粉末(过五号筛)
适量，按“2. 3”下方法制备供试品溶液，“2. 1”项下
色谱条件分别在 0、1、2、4、8、10、12 h 测定，记录峰
面积。结果腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺
嘌呤核苷峰面积的 ＲSD 分别为 0. 94%、1. 43%、
0. 85%、0. 72%。表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 9 加样回收率试验 取已知含量的多星韭花蕾
药材粉末(过五号筛)6 份，精密称定，分别精密加入
一定量的对照品，按“2. 3”项下方法制备供试品溶
液，按“2. 1”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算
加样回收率，结果平均加样回收率为 98. 25% ～
101. 38%，ＲSD≤2. 32%。见表 2。
2. 10 样品测定 分别称取不同采收期不同植物
部位样品粉末 0. 5 g(计算结果超出线性范围时，适
当调整样品取样量)，按照“2. 3”项下方法制备供试
品溶液，以“2. 1”项下色谱条件分别测定，记录峰面
积。根据回归方程计算 4 种核苷类成分的含量，结
果见表 3。
3 讨论
核苷类成分具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎等重要的
·9161·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 8 期 2015 年 8 月
表 2 多星韭中 4 种核苷类成分的加样回收率试验结果
化合物 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 加样回收率 /% 平均加样回收率 /% ＲSD /%
腺嘌呤 0. 0308 0. 0314 0. 0625 100. 96 101. 38 1. 08
0. 0306 0. 0621 100. 32
0. 0308 0. 0627 101. 59
0. 0306 0. 0621 100. 32
0. 0306 0. 063 103. 18
0. 0307 0. 0627 101. 91
鸟嘌呤核苷 0. 4790 0. 4816 0. 9624 100. 37 100. 11 1. 12
0. 4820 0. 957 98. 63
0. 4820 0. 9645 100. 19
0. 4860 0. 9738 101. 29
0. 4860 0. 9625 98. 94
0. 4810 0. 9685 101. 22
胸腺嘧啶核苷 0. 6180 0. 6250 1. 2243 97. 01 98. 25 1. 24
0. 6180 1. 2232 96. 83
0. 6200 1. 2427 99. 63
0. 6200 1. 2311 97. 78
0. 6180 1. 2358 98. 85
0. 6150 1. 2364 99. 42
腺嘌呤核苷 0. 4153 0. 4160 0. 8421 102. 60 101. 27 2. 32
0. 4152 0. 8449 103. 29
0. 4146 0. 8254 98. 75
0. 4150 0. 8221 97. 86
0. 4150 0. 8397 102. 09
0. 4152 0. 8437 103. 00
表 3 不同采收期不同部位多星韭和韭中 4 种核苷类成分的含量(mg/g)
部位 样品(采集日期或来源) 腺嘌呤 鸟嘌呤核苷 胸腺嘧啶核苷 腺嘌呤核苷 总含量
根 多星韭(20120922) 0. 11 0. 59 0. 22 0. 05 0. 97
多星韭(20140711) 0. 13 0. 52 0. 38 0. 47 1. 50
韭菜(20140710) 0. 14 0. 35 0. 12 0. 41 1. 02
叶 多星韭(20120922) 0. 31 0. 56 0. 48 0. 42 1. 77
多星韭(20140711) 0. 22 1. 59 0. 84 1. 41 4. 06
韭菜(20140710) 0. 46 1. 70 0. 98 1. 42 4. 56
花蕾 多星韭(20140711) 0. 12 1. 94 2. 48 1. 66 6. 20
种子 多星韭(20120922) 0. 41 0. 48 1. 09 0. 72 2. 70
韭菜籽 1(同仁堂)* 0. 09 0. 05 0. 03 0. 13 0. 30
韭菜籽 2(同仁堂)* 0. 13 0. 59 0. 13 0. 35 1. 20
韭菜籽(杏林药店)* 0. 12 0. 60 0. 19 0. 33 1. 24
注:“* ”表示该药材为饮片
生理活性，本研究结果表明，多星韭中腺嘌呤、鸟嘌
呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌呤核苷含量丰富，且随
采集时间、植物部位的不同而有较大差异。第 1 次
采集(2012 年 9 月)的多星韭种子中 4 种核苷类成
分总含量最高，为 2. 70 mg /g，其次为叶 1. 77 mg /g，
根中含量最低，为 0. 97 mg /g;第 2 次采集(2014 年 7
月)的多星韭花蕾中 4 种核苷类成分总含量最高，
达到了 6. 20 mg /g，其次为叶 4. 06 mg /g，根中最低，
为 1. 50 mg /g;家种韭菜叶中含量最高，为 4. 56 mg /
g，根次之，为 1. 02 mg /g。第 2 次采集的多星韭各部
位 4 种核苷类成分总含量均高于第 1 次采集，这可
能由于第 1 次采集时间已过了多星韭的花期(花期
为 8 月)，各成分有一定的消耗，而第 2 次采集时间
为花前期(苗期)，所以含量较高;从同一批植物材
料来看(包括家种韭菜)，均符合花蕾或种子含量最
高、其次为叶、根最低这一趋势，且花蕾期含量最高;
·0261· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 8 期 2015 年 8 月
家种韭菜叶中 4 种核苷类成分总含量与第 2 次采集
的多星韭叶相当;与所采植物材料相比，购于药店的
韭菜籽药材含量较低，这可能是由于在样品炮制过
程(盐炙)中各成分有所损失而造成的。
笔者慕名“红花韭菜”赴贵州省毕节市赫章县
大韭菜坪考察时发现，当地多星韭资源非常丰富，植
被面积超过6 000公顷。而在赫章地区，多星韭主要
作为一项旅游资源而被开发，对于其药用和食用方
面的价值，却未能得到足够的重视，一定程度上造成
了资源的浪费，如果能将其加以科学、合理利用，开
发成相应保健食品或药品等，将带来巨大的市场前
景。鉴于此，有必要在多星韭化学成分及药理活性
方面进行更为深入的研究，为其开发利用提供参考。
参 考 文 献
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草
［M］．第八册 . 上海:上海科学技术出版社，1999:50.
［2］李耕冬，贺廷超 . 彝医植物药(续集)［M］． 成都:四川
民族出版社，1990:180.
［3］《贵州植物志》编辑委员会 . 贵州植物志［M］．第 3 卷 .
贵阳:贵州人民出版社，1990:362-363.
［4］兰茂 . 滇南本草［M］． 昆明:云南科技出版社，2004:
573.
［5］ Hu GH，Sheng C，Mao ＲG，et al. Essential oil composition
of Allium tuberosum seed from China［J］． Chemistry of Nat-
ural Compounds，2013，48(6):1091-1093.
［6］ Hu GH，Lu YH，Yu WJ，et al. A steroidal saponin from the
seeds of Allium tuberosum［J］． Food Chemistry，2014，49
(6) :1082-1086.
［7］刘丽娟，刘银燕，杨晓虹 . 葱属植物甾体化合物及黄酮
化合物的研究进展［J］． 中国药学杂志，2000，35(6):
367-371.
［8］邹忠梅，于德泉，丛浦珠 . 葱属植物化学及药理研究进
展［J］．药学学报，1999，34(5):395-400.
［9］张新茹，杨晓虹，王天晓 . 葱属植物中甾体皂苷及其药
理作用最新研究进展［J］． 解放军药学学报，2009，25
(2):165-169.
［10］桑圣民，夏增华，毛士龙，等 . 中药韭子化学成分的研
究［J］．中国中药杂志，2000，25(5):286-288.
［11］胡国华，卢艳花，魏东芝 . 韭子中核苷类化学成分的研
究［J］．中草药，2006，37(7):992-993.
［12］吕爱娟，吴皓 . 中药中核苷类成分的研究进展［J］．中
国中医药信息杂志，2006，13(7):94-97.
·1261·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 8 期 2015 年 8 月