免费文献传递   相关文献

红花长寿花的组织培养



全 文 :※种植科学 农业与技术 2015, Vol.35, No.17 111
1 序 言
长寿花( Kalanchoe blossfeldiana )为景天科伽蓝菜
属多年生常绿肉质植物,原产非洲马达加斯加岛,别名
圣诞伽蓝菜、寿星花、假川莲、圣诞伽。长寿花植株矮
小,株形紧凑,叶肉质,叶色碧绿,花小,为圆锥状聚
伞花序,排列紧密拥簇成团,花期从 12 月下旬开始,可
持续到第 2 年 5 月初,故名长寿花。性喜温暖湿润的环境,
喜阳光充足,也能耐半荫,不耐寒,属于比较好养的盆
栽花卉。长寿花品种繁多(单瓣、重瓣),色彩丰富(大红、
黄色、橘黄色、粉色、玫粉色、白色等),栽培管理简单,
花盛期正值圣诞、元旦、春节,可为喜庆节日增添欢乐
气氛,开花时把不同花色品种组合在一起,更具观赏价
值,还可以用在公共场所的花槽、橱窗、大厅等栽培,
因此应用广泛,在花卉中具有广阔发展前景。传统的繁
殖方法有扦插繁殖(茎插、叶插)和播种繁殖,这些方
法容易导致病毒的积累、品种退化、繁殖率低,影响长
寿花的产量和品质,从而严重制约了其商品化生产。本
次试验用花色为红色的长寿花茎段、叶片进行组织培养,
目的是找出长寿花组织培养前消毒剂的最佳配比和最佳
消毒时间,以及最适合诱导长寿花茎段、叶片产生愈伤
组织和不定芽增殖、生根培养的激素配比,对优良品系
的保存和扩增提供理论数据支持,利用组培方法可快速
大量繁殖。
2 材料与方法
2.1 实验材料
使用材料取自盆栽红色长寿花的叶片和茎段。
2.2 实验材料处理
2.2.2 取样与消毒灭菌处理
组织培养前,先从室内培养的盆栽植株上取生长旺
盛的长寿花叶片和嫩茎作外植体,取材后放入烧杯里,
用洗衣粉水洗去表面尘土和微生物后,放到自来水管下
进行冲洗 60min,然后放入到瓶中,在超净工作台上再
迅速用无菌蒸馏水冲洗 2 遍后等分为 2 份。每个消毒剂
处理各接 15 瓶,每瓶接种 4 块,处理方法见表 1。最
后用无菌蒸馏水冲洗 6 次后,将叶片横切和纵切后切成
1cm×1cm 大小,将嫩茎切成 1cm 左右的茎段作外植体用。
表 1 消毒剂及处理组合
处理 消毒剂(消毒时间)
Ⅰ 75%酒精处理(0.5 min)
Ⅱ 75%酒精处理(0.5 min)+0.1% HgCl2(8min)
2.2.3 接种
在无菌条件下,按照消毒处理Ⅱ的方法处理材料后,
按植物生长方向接种到不同激素浓度的初代培养基 1~6
上,每种培养基各接 20 瓶,每瓶接种 4 块,其中叶片和
茎段各 10 瓶,然后置于培养室内培养,接种 10d 后观察
记录愈伤组织以及不定芽的发生情况。从初代培养基培
养出的不定芽中选择形成较好的材料,接种到增殖培养
基 7~8 上,每个处理 20 瓶,每瓶接种 3 块,15d 后开始
统计不定芽生长形成情况。从增殖培养基培养出的生长
健壮的无根丛生芽中选择生长较好的材料,接种到生根
红花长寿花的组织培养
魏晓菲
(大同市园林设计研究所,山西 大同 037006)
摘 要:本试验以长寿花(Kalanchoe blossfeldiana)叶片、茎段作为外植体,进行了初代组织培养,并进行增殖、生根
培养和炼苗移栽,在建立长寿花组织培养无菌体系的基础上,对比了外植体不同灭菌方法对灭菌效果的影响,以及不
同激素浓度对长寿花叶片、茎段芽分化、不定芽增殖及其生根的影响。结果表明:75%的酒精(0.5min)+ 0.1%升汞
(8min)具有很好的消毒作用;MS +6-BA1.0mg/L +NAA0.2mg/L 是不定芽分化的最佳培养基配比;MS+6-BA1.0mg/
L +NAA0.2mg/L 是不定芽增殖的最佳培养基配比;1/2MS+NAA0.2 mg/L 是生根的最佳培养基配比。
关键词:外植体;长寿花;培养基;愈伤组织;增殖;生根
中图分类号:R282.71 文献标识码:A DOI:10.11974/nyyjs.20150932043
112 2015, Vol.35, No.17 农业与技术 ※种植科学
培养基 9~10 中,每瓶 2 苗,接种 20 瓶,20d 后注意观
察根形成情况并统计各处理生根数目。以上接种过程必
须保证每一步在无菌条件下,尽可能减少污染率。
2.2.4 培养基配比
基本培养基为 MS,琼脂为 6g,蔗糖浓度为 3%,pH
值为 5.8。初代培养基为:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/
L;MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。MS+6-BA1.0mg/
L+NAA0.1mg/L;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;MS+6-
BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/
L; 增 殖 培 养 基 为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/
L;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L。 生 根 培 养 基 为:
1/2MS+NAA 0.1mg/L;1/2MS+NAA0.2mg/L。培养室内温
度为 25℃ ±2℃,光照强度 1500~2000Lux,每天光照 12 h,
补光灯在光照不够的条件下及时补光。
3 结果与分析
3.1 不同消毒剂处理的消毒效果
进行初代培养 10d 后对 120 瓶培养情况进行统计,
结果见表 2。处理Ⅰ、处理Ⅱ的消毒效果差异明显,处
理Ⅱ的消毒效果是处理Ⅰ的约 17 倍,因此单独使用酒精
对长寿花外植体进行消毒处理,污染率高,效果不太好;
而用 75%酒精(0.5min)+0.1% HgCl2(8min)对长寿花
外植体消毒效果明显。
表 2 不同消毒处理的消毒效果
处理 接种数 / 块 污染数 / 块 污染率 /%
Ⅰ 60 50 83.3
Ⅱ 60 3 5
3.2 不同外植体诱导愈伤组织的时间
经过初代培养 10d 后对每种培养基中茎段和叶片愈
伤组织形成情况进行统计,从表 3 可看出,由于培养基
配比不同,如果培养基配比合适,长寿花叶片在第 10 天
就可以形成愈伤组织,而茎段需要在第 15 天左右才能形
成,其诱导时间比用叶片作为外植体的时间要长约 5d 左
右。
表 3 不同外植体诱导愈伤组织的时间
外植体 接种数 / 块 诱导时间 /d
茎 240 15~20
叶片 240 10~15
3.3 激素对初代培养的影响
将经过消毒组合Ⅱ处理好的外植体接种到初代培养
基 1~6,培养 10d 后,大部分叶片的切块边缘首先开始
膨大,长出淡绿色的愈伤组织,并呈疏松的颗粒状;有
部分叶片在切口处直接产生不定芽;接种 20d 后愈伤组
织表面出现绿色芽点,开始分化出 0.2~0.5cm 的不定芽;
35d 后顶芽萌动并长出侧芽和分枝。
表 4 是第 36 天出芽的外植体统计数,激素的影响由
表 4 中可以看出。在培养过程中还发现,当 6-BA 2.0mg/
L 、NAA0.1mg/L 时,在后期出现部分芽苗玻璃化、失绿
现象;当 NAA0.2mg/L、6-BA 2.0mg/L 时,分化出的不
定芽形态明显弱小;当 6-BA 1.0mg/L、NAA0.2mg/L 时,
诱导率较高,而且芽苗生长健壮,芽苗利用率也好。
因此,初代培养的最适培养基配比为 MS+6-BA 1.0mg/
L+NAA0.2mg/L。
表 4 激素对初代培养的影响
培养基序号 基本培养基 6-BA(mg/L) NAA/(mg/L) 接种数 / 块)
污染数
/ 块
诱导出芽的外
植体数 / 块 诱导率 /%
1
MS
0.5 0.1 80 1 39 48.75
2 0.5 0.2 80 2 42 52.50
3 1.0 0.1 80 0 71 88.75
4 1.0 0.2 80 1 78 97.50
5 2.0 0.1 80 4 72 90.00
6 2.0 0.2 80 3 66 82.50
※种植科学 农业与技术 2015, Vol.35, No.17 113
表 5 激素对不定芽增值培养的影响
培养基序号 基本培养基 6-BA(mg/L) NAA(mg/L) 接种数 / 株 污染数 / 株 增殖数 / 株 增殖系数
7
MS
1.0 0.1 60 1 72 1.2
8 1.0 0.2 60 2 105 1.8
3.4 激素对增殖培养的影响
将初代培养得到的芽丛和分枝切割成带 1~2 个节的
小段,转接到培养基 7~8 上,约 15d 后,就可以不断长
出大量的芽和分枝,培养基 7 和 8 中的芽都有增殖,但
是培养基配比 8 的效果好,分化丛生芽芽体健壮,数量
多,长势良好,适合叶、茎段的继代培养。当 NAA 为 0.1
mg/L 时,有部分芽生长良好,但部分芽体长势较略差,
长不高,影响丛生芽的大量继代增殖(见表 5)。
3.5 激素对生根培养的影响
切取分化增殖所得到的高约 2~3cm 生长健壮的丛生
芽苗,将分枝切成带有 2 个节的茎段,转接种到添加不
同浓度 NAA 的生根培养基 9~10 中。在生根培养进行到
第 30 天的时候,对丛生芽的生根情况进行了统计,结果
见表 6。
当在 1/2MS 基本培养基中添加 NAA 浓度为 0.1mg/L
(培养基 9)时,生根率为 85%,平均生根数达到 12.6 条,
根长为 1. 0cm 左右。当添加 NAA 浓度为 0.2mg/L(培养
基 10)后,诱导的丛生芽生根率升高,达到 97.5%,平
均生根数有 13.8 条左右,并且根粗壮,苗长势良好,根
长为 1.4cm 左右。
表 6 激素对生根培养的影响
培养基序号 基本培养基 6-BA/(mg/L) NAA/(mg/L) 接种数 / 块 生根数 / 块 生根率 /%
9
1/2MS
0 0.1 40 34 85.0
10 0 0.2 40 39 97.5
4 炼苗和移栽
打开瓶口炼苗 2~3d,除高温高湿的夏季移栽容易泛
滥死亡外,其他季节只要温度在 15-25℃范围均可进行。
用镊子小心挖出试管苗,放入温水中浸泡 20min 左右,
再于温水中清洗掉根部残留的培养基,除不掉的培养基
可在水管下冲洗干净。移栽到经过消毒河沙或蛭石盆内,
每隔 2~3d 浇 1 次水,使基质保持半干状态,经过 2 周的
过度,即可上盆定植。盆土选用腐叶土、原土、河沙为 4:4:
2 的混合配制较好,每隔 3~5d 用浇水 1 次,保证半干状
态,移栽成功率高,如果此期间缺水,则会出现移栽后
干枯的现象,降低移栽成活率。待 2~3 月后植株长势良好、
根系发育正常后,可进入粗放式常规管理。
5 结论与讨论
由于长寿花叶片肉质光滑,易于表面灭菌消毒,无
菌操作简单,切割过程也容易操作,瓶苗移栽后管理较
粗放,组培繁殖极易见效率,经济效益亦是可观的。
因为植物体表明常附有各种各样的微生物,无菌操
作过程中,对于植物材料的表面的消毒的尤为重要,因
为一旦带进培养基,微生物就会迅速滋生造成植物材料
死亡。75%酒精(0.5min)+0.1% HgCl2(8min)的消毒
处理有更强的杀菌能力和穿透力,而且有湿润作用,对
长寿花叶片和茎段的消毒处理效果明显。
植物激素的种类和配比,是使植物组织分化出苗和
快速增殖的重要因素,通过此次不同梯度培养基配比,
发现虽然都能使植物分化出苗和增殖,但是低浓度和高
浓度的激素配比使植物分化出苗较慢,同时细胞分裂素
和生长素比例过高,导致玻璃化苗的产生,其中 MS+6-
BA1.0mg/L+NAA0.2 mg/L 激素配比最佳,利于长寿花愈
伤组织的生长和分化,进行初代培养;MS+6-BA1.0mg/
L+NAA0.2mg/L 是最有利于增殖的培养基;最适生根培
养基为 1/2MS+NAA0.2mg/L。
同株植物不同器官及不同着生部位,往往繁殖能力
也有所不同,长寿花叶片较其茎段容易形成愈伤组织,
叶片内部的植物激素水平能够在接种后得以维持,在进
行组织培养快繁时,考虑到市场和生产成本,适合作为
外植体,缩短整体培养时间。长寿花的组织培养相对于
扦插繁殖,获得的幼苗差异不大,繁殖速度快,易于批
量生产和管理方便,可以段时间内获得更多的生根苗,
使优良品种在短短数年内,保留品种,实现长寿花工厂
化批量生产。
(下转第148页)
148 2015, Vol.35, No.17 农业与技术 ※气象科学
实践过程中发现,开展为农服务工作不能仅仅停留
在单方面为服务对象提供各种产品的层面,需要形成良
好互动,需要服务产品在最终的保障上发挥作用,需要
围绕保障提供服务产品,做到服务与保障的有机融合,
才能实现为农服务“趋利避害”的目的。实际工作中需
要重视气象灾害的调查研究,分析其发生的原因,提出
切实可行的管理建议与防御对策。
4.2 复合型人才支撑需求
气象部门现有人员知识结构单一,既懂气象又懂农
业的复合型人才严重短缺,满足不了开展为农服务的需
求,这就需要打造一支高素质气象服务专业技术队伍。
一方面要强化复合型人才的引进,另一方面要立足现有
人员有针对性的培训,同时也要重视土洋专家的结合问
题,在服务过程中要注重吸收农民专业合作社、大型农
产品基地技术人员的实践经验。
4.3 精准服务落地的需求
目前农业气象观测能力明显滞后,农业气象试验基
础落后,缺乏必要的农气试验数据,严重制约了精准服
务的开展。试验站发展缓慢,需要有计划的布设农业气
象试验站(如每个地市 1 个),布站要合理,要紧贴当
地农业需求,能真正积累好农业试验资料,通过试验观
测建立真正落地的服务指标库,提高农业气象服务科技
含量。为农服务工作同样需要气象业务现代化作有力的
支撑。
4.4 为农服务空间的拓展需求
现代农业生产不仅存在着农作物的“种、管、收”,
还存在农产品的“储、运、销”。这就需要我们改变过
去针对传统农业开展气象服务的方式,紧贴现代农业的
需求搞好为农服务,在强化直通式气象服务的同时,在
服务的深度与广度上下功夫。
4.5 服务对象培训需求
现代农民迫切需要农业气象知识的普及与培训,以
解决“看的懂、用的上”的问题,需要为农户提供农业
气象科普培训和技术咨询服务。同时农村气象信息员队
伍素质的提高也需要强化。
4.6 评估评价体系需求
气象为农服务工作的开展是否有成效,能产生多大
的社会效益或经济效益,均需要建立一个科学有效的评
估评价系统来加以检验或论证。
5 结语
5.1 搞好气象为农服务工作
需要我们立足于现状客观分析,查找存在的问题,
通过实践不断积累经验,要以农业服务需求为牵引不断
的发展与完善。同时也要重视气象服务与社会管理的有
机融合,将气象为农服务工作培育成气象部门进行社会
管理的一部分。
5.2 气象业务现代化是搞好气象为农服务的基础,硬件
现代化、软件现代化、人的现代化缺一不可
5.3 实践告诉我们
气象为农服务的“最后一公里”,不仅仅存在路径
打通的问题,还需要不断拓宽,更需要不断提速。也就
是说不仅要在这短短“一公里”的征途上修公路,还要
设高架桥,建地铁,辟航线。
5.4 气象为农服务工作需要基层气象台站在实践过程
中不断的摸索探究
要创新服务方式,丰富服务内容,正如总书记提出
的作风建设那样气象为农服务工作永远在路上。
作者简介:赵玉新(1976-),硕士,工程师,主要从事
气象服务、业务管理及行政执法等工作。

参考文献
[1] 孙男,李青 .长寿花组织培养技术 [J].中国观赏园艺研究进展,
2010(7):287
[2] 黄海帆,李保印,李平 . 影响长寿花离体培养及植株再生的
几个因素 [J]. 中国农学通报,2004,20(2):12-14
[3] 周南翎,洪军孟 . 长寿花快速繁殖技术 [J]. 农业科技通讯,
2001(11):15.
[4] 吴丽芳,屈云慧,杨春梅 . 长寿花的组培快繁 [J]. 云南农业
科技,2001(4):21.
[5] 孙新政,李庆伟,梁明勤 . 白花长寿花组培快繁技术研究 [J].
中国农学通报,2006,22(2): 39-42.
[6] 高建莉,王定开 . 云南农业科技 [J].2009(5):13
[7] 陈梅,莫饶 . 长寿花离体快繁研究 [J]. 安徽农业科学,
2007,35(32):10336-10337.
[8] 华金渭,刘南详,吴华芬等 . 长寿花栽培技术 [J]. 中国花卉
园艺,2005(6):29.
(上接第113页)