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壮药薯莨中表儿茶素的化学分析



全 文 :• 604 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年3月第26卷第3期 CJTCMP , March 2011, Vol . 26, No.3
·研究报告·
壮药薯莨中表儿茶素的化学分析
苏青,刘婧,黄瑞松
(广西壮族自治区民族医药研究院,南宁 530001)
摘要:目的:建立薯莨药材中表儿茶素的分析方法。方法: 以表儿茶素作为对照品,通过薄层色谱法(TLC)、
高效液相色谱法(HPLC)对薯莨药材中的表儿茶素进行定性定量分析。结果:5个不同产地的薯莨药材均含表儿
茶素,其含量在0.06%-0.50%之间;表儿茶素在0.046-0.552µg范围内与峰面积具有良好线性关系(r=0.9999),
平均回收率为99.28%,RSD为1.34%。结论: 文章建立的方法准确可靠、重现性好、专属性强;不同产地的薯莨药
材均含有表儿茶素成分,但含量有差异。
关键词:薯莨;表儿茶素;薄层色谱法;高效液相色谱法
基金资助:广西科技厅课题(No.桂科能05112001-3A7)
Chemical analysis of epicatechin of zhuang medicine Dioscorea cirrhosa Lour.
SU Qing, LIU Jing, HUANG Rui-song
( National Medical Research Institute of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530001, China )
Abstract: Objective: To establish a analyse method of Epicatechin in Dioscorea cirrhosa Lour. from different habitats
in Guangxi. Methods: Epicatechin in Dioscorea cirrhosa Lour. was identifi ed quantitatively by thin-layer chromatography (TLC),
and determined by HPLC. Results: The spots of TLC were clear and concentrative. According to the selected chromatographic
conditions,the calibration curve for Epicatechin was linear (r=0.9999) in the range of 0.046-0.552µg,and the average recovery
was 99.28%with RSD being 1.34%. The content of Epicatechin in 5 samples of Dioscorea cirrhosa Lour was 0.06%-0.50%.
Conclusion: The methods are sensitive, accurate, reproducible and exclusive. Epicatechin were found in 5 samples but has some
difference among the different habitats.
Key words: Dioscorea cirrhosa Lour.; Epicatechin; TLC; HPLC
Fund assistance: Project of Guangxi Science and Technology Agency (No.05112001-3A7)
通讯作者:苏青,广西南宁市明秀东路234号广西壮族自治区民族医药研究院,邮编:530001,电话:0771-3130064
E-mail: nnsq2009@163.com
薯莨也名红孩儿,系薯蓣科植物薯莨(Dioscorea cirrhosa
Lour.)的块茎,为常用壮药,产于我国广西、广东等地,具有止
血、活血、养血等功效,用于产后腹痛、崩漏、咯血、上消化道出
血、痢疾等症[1]。薯莨含有表儿茶素、鞣质等化学成分[1]。《中国
药典》(1977版)一部曾收载薯莨(红孩儿)药材品种和“薯莨
片(红孩儿片)”薯莨提取物,但无其TLC鉴别和含量测定[2]。
本试验拟对广西不同产地薯莨药材中的表儿茶素进行定性定
量分析研究,旨在为更好地挖掘薯莨药材资源提供科学依据。
材料
1. 药品 薯莨药材:自采,1-5号(产地:靖西、德保、南宁市
郊、凌云、天等),经品种鉴定均为薯蓣科植物薯莨(Dioscorea
cirrhosa Lour.)的块茎;表儿茶素(110878-200102)购于中国
药品生物制品检验所。
2. 试剂 HPLC流动相所用甲醇为色谱纯(美国Fisher公
司);水为超纯水;硅胶G(青岛海洋化工厂生产);其余试剂均
为分析纯。
3. 仪器 岛津LC-20A HPLC系统,LC solution色谱工作站
(日本岛津公司),YOKO-ZS紫外分析摄影仪(武汉药新技术
开发有限公司),1/105电子分析天平XS205BDU(瑞士梅特勒
公司),As7240BT超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限
公司)。
方法与结果
1. 薯莨的TLC鉴别
1.1 供试品溶液的制备 分别称取1-5号本品粉末(60目)
各0.4g,加甲醇10mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加
甲醇2mL使溶解,摇匀,即为供试品溶液。
1.2 对照品溶液的制备 取表儿茶素对照品,加甲醇制成
每1mL含1mg的溶液,摇匀,即为对照品溶液。
1.3 薄层层析 照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附
录VIB)试验,吸取上述5种供试品溶液各1-3μL、对照品溶液
• 605 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年3月第26 卷第3期 CJTCMP , March 2011, Vol . 26, No. 3
置50mL容量瓶中,加甲醇-水(1:1)混合溶液至刻度,摇匀,再精
密吸取1mL置10mL容量瓶中,加甲醇-水(1:1)混合溶液至刻度,
摇匀,制成每1mL含表儿茶素23μg的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密称定本品1号粉末(60目)约
0.1g,置25mL量瓶中,加甲醇-水(1:1)混合溶液15mL,超声处理
20min,并加甲醇-水(1:1)混合溶液至刻度,摇匀,滤过,取续滤
液再用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取滤液即为供试品溶液。
2.4 线性关系考察 精密称取表儿茶素对照品23mg,置
50mL容量瓶中,加甲醇-水(1:1)混合溶液至刻度,摇匀,再分
别精密吸取0.10、0.40、0.80、1.00、1.20mL置10mL量瓶中,各
加甲醇-水(1:1)混合溶液稀释至刻度,摇匀。各取10μL进样,
以峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,
得回归方程为Y=8.06×105X-4326.3,r=0.9999。表儿茶素在
0.046-0.552μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取上述1号供试品溶液20μL,依
法进样5次,其RSD为0.48%。表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸同一供试品溶液(1号)20μL,分
别于室温下放置0、2、4、6、8、10h后依法进样,测得表儿茶
素含量分别为0.51%、0.51%、0.51%、0.50%、0.50%,RSD为
1.08%。表明本品供试液在10h内基本稳定。
2.7 重复性试验 精密称定1号样品约0.1g各6份,按“2.3”
项下步骤制得待测溶液。各进样20μL,依法测定。样品的表儿
茶素平均含量为0.51%,RSD为0.81%,说明该法重复性好。
2.8 加样回收率试验 精密称定同一批号的样品6份,每份
0.1g,分别精密加入表儿茶素对照品溶液适量,按上述“2.3”项
下步骤操作制得待测溶液。各进样20μL,依法测定,计算回收
率。结果平均回收率为99.28%,RSD为1.34%(n=6),表明本法
测定结果准确。详见表1。
表2 样品中表儿茶素含量测定结果(n=3)
药材批号
1
2
3
4
5
产地
靖西
德保
南宁市郊
凌云
天等
平均含量(%)
0.50
0.06
0.06
0.16
0.39
1μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板
上,以甲苯-醋酸丁酯-甲醇-甲酸(70:10:20:0.5)为展开剂,展
开,取出,晾干,喷以重氮化试液,热风吹至斑点显色清晰,日光
下检视。1-5号供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,
显一个相同的橙黄色斑点。详见图1。
图1 薯莨药材TLC色谱图
注:1-5号薯莨供试品(1.靖西县;2.德保县;3.南宁市郊;4.凌
云县;5.天等县),6.表儿茶素对照,a.表儿茶素。
2. 薯莨的HPLC含量测定
2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS2 C18柱(250mm×4.6 mm,
5μm);流动相:甲醇-水(35:65);流速:0.8mL/min;检测波
长:280nm;柱温:室温;进样量:20μL。色谱柱理论塔板数按
表儿茶素峰计算应不小于3 000,表儿茶素与相邻峰的分离度
R>1.5。见图2。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取表儿茶素对照品11.5mg,
表1 表儿茶素回收率测定结果
序号
1
2
3
4
5
6
取样中
0.0592
0.0594
0.0598
0.0595
0.0595
0.0599
加入
0.0598
0.0598
0.0598
0.0598
0.0598
0.0598
测得
0.1178
0.1182
0.1202
0.1183
0.1188
0.1202
回收率(%)
97.99
98.33
101.00
98.33
99.16
100.84
平均(%)
99.28
RSD(%)
1.34
表儿茶素量(mg)






B



A
图2 空白样品(A)、对照品表儿茶素(B)和薯莨药材(C)的
HPLC图
注:a:表儿茶素。







C
• 606 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年3月第26卷第3期 CJTCMP , March 2011, Vol . 26, No.3
2.9 样品测定 精密称取1-5号本品粉末约0.1g(60目,
n=3),按“2.3”项下步骤制得供试品溶液。分别精密吸取对照
品溶液及供试品溶液各20μL,依法测定。结果见表2。
讨论
笔者对5个不同产地的薯莨进行表儿茶素成分TLC鉴别,
结果所有被检测的样品均可检测到表儿茶素。提示表儿茶素为
薯莨药材的共有的化学组分。
依据TLC定性分析结果,笔者采用HPLC法对薯莨药材所
含表儿茶素化学成分进行了定量测定。结果在本HPLC色谱条
件下,1-5号薯莨药材的表儿茶素含量在0.06%-0.50%之间。提
示不同产地的薯莨药材虽均含共有成分表儿茶素,但其含量有
差异。
另外,试验中笔者曾采用文献[3]的流动相0.04mol/L枸橼酸
溶液-N,N-二甲基酰-四氢呋喃(45:8:2)进行表儿茶素含量测定,
结果发现该流动相中含有盐,对色谱柱有一定的损害。经反复试
验探讨后,改以甲醇-水(35:65)流动相时,所测定得到的表儿茶素
色谱峰保留时间适宜,且在供试品色谱中表儿茶素峰与相邻杂
质峰分离度大于1.5,达到了良好的基线分离。详见图2。
薯莨药用历史悠久,但目前关于薯莨的化学成分的研究却
很少,其有效部位和有效成分均尚不明确[4]。这使薯莨的临床
应用受到了较大的局限。本试验建立了薯莨中表儿茶素的TLC
法和HPLC法的分析方法,填补了评价薯莨药材质量的空白,为
深入研究薯莨的化学成分和药理活性、开发疗效确切、质量稳
定的新剂型薯莨制剂提供了可靠的科学依据。
参 考 文 献
[1] 梁启成,钟鸣.中国壮药学.南宁:广西民族出版社,2005:482
LIANG Qi-cheng,ZHONG Ming.Zhuang of China Pharmacy.
Nanning:Guangxi Nationalities Publishing House,2005:482
[2] 国家药典委员会编.中国药典1977年版.北京:人民卫生出版
社,1978:648
Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of People,s
Republic of China 1977.Beijing:People,s Medical Publishing
House,1978:648
[3] 国家药典委员会编.中国药典2005年版.北京:化学工业出版
社,2005:8
Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of People,s
Republic of China 2005.Beijing:Chemical Industry House,2005:8
[4] 钟超,严奉祥.薯莨的研究进展.现代医药卫生,2007,23(5):675-676
ZHONG Chao,YAN Feng-xiang.Study of progress on the Chinese
drug Dioscorea cirrhosa Lour.Modern Medicine Hygiene,2007,23
(5):675-676
(收稿日期:2010年7月8日)
不同种质黄芩蛋白质电泳的鉴别研究
林慧彬1,路俊仙1,崔璐2,韩丽丽2,李真2,林建群3,林建强3
(1山东省中医药研究院中药资源研究室,济南 250014;2山东中医药大学,济南 250014;3山东大学生命
科学院微生物技术国家重点实验室,济南 250100)
摘要:目的:研究比较不同种质黄芩蛋白质的差异。方法:采用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。结果:
沙滩黄芩的蛋白质主要分布在相对分子量10.0-70.0kDa之间,且分布较均匀,一级条带主要集中在20.0-30.0kDa;
不同产地黄芩的蛋白质条带在相对分子量66.0、70.0、112.0kDa处染色较深,蛋白质含量较高,与沙滩黄芩有显著
差异。花粉红色及玫红色的黄芩,电泳条带数目较少,染色较浅,但其一级条带和紫花黄芩的条带基本相同。结
论:黄芩与沙滩黄芩的蛋白质电泳差别大于不同种质黄芩之间的差异。证实蛋白质电泳结果较相近的黄芩具有较
近的亲缘关系。
关键词:黄芩;种质;蛋白质电泳
基金资助:2009年山东省农业良种工程重大课题(No.2009LZ201-03),2007年山东省中医药发展计划课题
(No.2007-120)
Identifi cation study on protein gel electrophoresis of different germplasm of Baicalin
LIN Hui-bin1, LU Jun-xian1, CUI Lu2, HAN Li-li2, LI Zhen2, LIN Jian-qun3, LIN Jian-qiang3
( 1Research Laboratory of Chinese Medicinal Resources, Shandong Institute of TCM, Jinan 250014, China; 2Shandong University
of TCM, Jinan 250014, China; 3School of Life Sciences, State Key Lab of Microbial Technology,
Shandong University, Jinan 250100, China )
·研究报告·
通讯作者:林建群,济南市山大南路27号山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室,邮编:250100,电话: 0531-88364426
E-mail: Jianqunlin@sdu.edu.cn