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长寿花组织培养技术研究



全 文 :云 南 农 业 科 技
Yunnan Nongye Keji2009年第 5期
国家申报设立“滇台生物产业试验示范合作区”,促
进特色产业集群和特色经济大发展;四是要创新培育
手段,着力培植云南特色品牌群;五是要以优势产业
和优势产品为龙头,拉动与之相配套的中、小企业集
群式发展。推行“以大带小,优势互补”,实现大企
业和中、小企业同舟共济,和谐发展。
3.7 强化科技创新, 建立产业跨越式发展的科技支撑
体系
科学技术水平在很大程度上决定了1个国家或1
个地区的生产力发展水平和综合实力,其中技术创新
起到关键的核心作用。云南省在先进制造业方面远远
落后于国内发达省(区),关键就是工程技术进步缓
慢。为此,应当紧紧抓住当前世界制造业大转移的发
展机遇,构建云南生物产业跨越式发展的技术支撑体
系。一是要建设生物产业工程技术平台;二是要提高
科技自主创新能力;三是要推动企业成为技术创新的
主体;四是要建立云南生物产业工程研究中心。建议
省委、省政府研究室牵头,以在玉溪市建设“云南生
物产业工程研究中心”为课题,研究云南省从“烟草
经济”向“生物经济”转化的可行性及发展思路,为
云南生物产业实现跨越式发展,寻求实现技术跨越的
途径;五是要树立人才资源是第一资源的观念,构筑
生物产业人才高地。
3.8 加快发展中介组织, 提升生物产业组织化水平
当前云南生物产业发展的主要矛盾是:分散、匮
乏的土地资源与规模化、标准化生产;自然资源多样
性与农业生产复杂性;弱势的生产主体与全球一体化
的大市场;快速发展的市场经济与落后的行政管理模
式等。解决这些矛盾,一是要大力发展和组织新型的
产业自律性中介组织,大幅度提高生物产业生产、加
工、流通环节的组织化程度;二是按照市场经济的原
则,建立起新型的科技推广体系,走出一条生物资源
开发体制创新、机制创新之路。
参考文献:
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[6]2008年河南省国民经济和社会发展统计公报.河南省统计局.
[7]2008年山东省国民经济和社会发展统计公报.山东省统计局.
高建莉, 王定开
(文山州农业科学研究所, 云南 文山 663000)
长 寿 花 组 织 培 养 技 术 研 究
收稿日期:2009-05-20
摘 要:对长寿花叶片、叶柄和幼茎进行了愈伤组织培养,并进行增殖、生根培养和炼苗移栽,同时对长寿花不同
外植体的诱导时间进行了比较。结果表明:诱导长寿花块根产生愈伤组织的最佳培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA
0.2 mg/L、MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L;而增殖的最佳培养基为MS + 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L;生根
培养基为MS + NAA 0.2 mg/L。在此次试验中还比较了不同消毒剂及其组合对长寿花外植体的消毒效果,结果表明:
75%的酒精(0.5 min) + 0.1%HgCl(10 min) 具有很好的消毒作用。
关键词:外植体;长寿花;培养基;愈伤组织;增殖
长寿花 (Kalanchoe bolssfeldiana) 又名红景天,
是景天科和枷蓝菜属多年生肉质草本,喜温暖、阳光
充足、通风条件好的环境。长寿花耐干旱,要求土壤
疏松、肥沃、排水良好。长寿花的叶片密集翠绿,临
近圣诞节开花,拥簇成团,花色丰富,是受人喜爱的
室内盆栽花卉。美国和法国从20世纪70年代末用长
寿花的茎尖、叶、茎、花等作为外植体进行组培快
繁,但是都未见成功报道。
组织培养是细胞分化的一种复杂的生理过程,大
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2009年第 5期
云 南 农 业 科 技
Yunnan Nongye Keji
量试验表明,植物激素和植物生长调节剂的种类、浓
度以及它们之间的组合直接影响着愈伤组织的诱导。
中国栽培长寿花的时间不长,近年来才从国外引进
优良品种,用在公共场所的花槽、橱窗、大厅等栽
培。本文根据植物组织培养技术具有繁殖系数高、
周期短、成本低等优点,用长寿花的茎、叶柄、叶
进行组织培养,旨在找出长寿花最佳消毒剂及诱导
长寿花茎、叶柄、叶产生愈伤组织和增殖、生根培
养的最佳激素配比,对优良品系的保存和扩增有一
定的意义。迄今为止,国内较少有对长寿花组织培
养方面的报道,希望通过本试验为发展长寿花生产
奠定科学基础。
1 材料与方法
1.1 材料
使用材料取自国外引进的盆栽红色长寿花的叶
片、叶柄和茎尖。
1.2 取样方法与消毒灭菌处理
晴天上午在室外盆内取无病虫害、生长健壮的长
寿花叶片、茎尖或茎(带腋芽) 作外植体,取材后放
入烧杯里,轻轻洗去表面浮尘后,切成1~2 cm的小
段用自来水冲洗1~2 h,然后在超净工作台上用无菌
水冲洗 2 遍,并分别将其等分为 3 份。将第 1 份用
75%酒精处理 0.5 min;第 2 份用 75%酒精处理 0.5
min 后,再用 10%H2O2处理 10 min;第 3 份用 75%
酒精处理 0.5 min 后,再用 0.1%HgCl 处理 10 min
(见表1)。无菌水冲洗4~ 5次,用无菌吸水纸吸干
水分,将叶片切成0.5 cm×0.5 cm大小,茎段及叶柄
切成0.5 cm长,便于接种。
1.3 接种
在无菌条件下,分别将消毒好的3分材料接种于
愈伤组织诱导培养基 1~4 上,每个处理各接 15 瓶,
每瓶接种4块。将产生的愈伤组织转接到继代培养基
5~7上,每个处理15瓶,每瓶接种1.5~2.0 mm的愈
伤组织10块,7 d后开始统计不定芽形成情况。将培
养出的不定芽分别转接于生根培养基8~10上,每个
处理15瓶,每瓶接种10~12个不定芽,20 d后统计
各处理生根数目。
1.4 培养条件
基本培养基为MS,蔗糖浓度为3%,琼脂成分为
0.7%,pH值为5.8~6.0。诱导愈伤组织的附加成分为
(1) 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L;(2) 6-BA
1.0mg/L + NAA 0.2 mg/L;(3) 6-BA 0.5 mg/L+ NAA
0.1 mg/L;(4) 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L。增殖
培养基为 (5) 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L;(6)
6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L;(7) 6-BA 4.0 mg/L
+ NAA 0.1 mg/L;生根培养基为(8) 基本培养基MS
不加任何激素附加物;(9) NAA 0.1 mg/L;(10) NAA
0.2 mg/L。在1 500~2 000 Lux的光照条件下,培养温
度为25℃±2℃,光照12 h/d。
2 结果与分析
2.1 不同消毒剂的消毒效果
长寿花叶片、叶柄和幼茎在接种7 d后进行统计,
结果见表2。从表2可知,处理Ⅰ、处理Ⅱ的消毒效
果有一定的差别,处理Ⅱ的消毒效果是处理Ⅰ的2倍
左右,而处理Ⅲ和处理I的消毒效果相差很大,处理
Ⅲ的消毒效果是处理Ⅰ的32倍;因此得出结论:单
独使用酒精或使用酒精与一定浓度的H2O2溶液对长
寿花外植体进行消毒效果都不太好,而用75% 酒精
(0.5 min) + 0.1%HgCl(10 min) 对长寿花外植体有
很好的消毒效果。
2.2 激素对愈伤组织和丛生芽诱导的影响
将上述处理好的材料接种到培养基 1~4,培养
10 d 左右,在培养基 2 上 33.3%的茎段切口处开始
形成白色的愈伤组织,偶有分化成丛生芽;15 d
后,茎段的基部处有丛生芽出现,诱导率可达
83.3%。在培养基4上也有少量愈伤组织和芽诱导成
功,而培养基1和培养基3上则未发现愈伤组织产生
(见表3)。
2.3 不同外植体诱导愈伤组织的时间
从表4可看出,把长寿花叶片作为外植体诱导愈
伤组织,其诱导时间比用叶柄和茎作为外植体的时间
要短约7 d左右。
表 1 消毒剂及处理组合
  
   
   

   
    

表 2 不同消毒剂及处理组合的消毒效果
      
   
   
   

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云 南 农 业 科 技
Yunnan Nongye Keji2009年第 5期
表 3 激素对愈伤组织及生根培养的影响
2.4 激素对不定芽增殖、 生根培养的影响
(1) 将愈伤组织转接到培养基5~7上,约7 d后,
愈伤组织不断形成不定芽。其中培养基5的增殖效果
最佳,分化丛生芽稀且苗健壮,比较适合叶的分化和
继代培养。随着6-BA的浓度增加,芽和愈伤组织的
生长都会受影响,分化受抑制(见表3)。
(2) 将丛生的无菌苗切成单芽 (0.5~1.0 cm) 的
茎段,接入培养基8~10中,培养7 d后,培养基10
上开始有白色的根系出现,20 d即可形成健壮的根,
每株生根 3 条左右,根长 0.5~2.5 cm,生根率达
97%。培养基8和9中生根较晚,且数目较少,其生
根率分别为12%和58%。
3 炼苗移栽
打开试管苗瓶口炼苗2~3 d,用镊子小心挖出试
管苗,再清洗掉根部残留的培养基,移栽到蛭石∶珍
珠岩为1∶1的基质中,最初几个月每 3~5 d 用 1/10
MS营养液浇灌幼苗1次,4~6 月后进行盆栽,保持
空气湿度 65%左右,移栽成功率达 93%,植株长势
良好。
4 结论与讨论
试验结果表明,培养基中激素浓度、类型、组
合对长寿花组培的影响很大,高浓度的激素配比不
利于长寿花愈伤组织的生长和分化,其中 MS+
6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.2 mg/L激素配比最佳,最适
合于长寿花分化;而增殖的最佳培养基是 MS+
6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;生根培养基为 MS+
NAA 0.2 mg/L。对长寿花外植体消毒效果最好的消
毒剂配比为 75% 酒精 (0.5 min) + 0.1%HgCl(10
min)。不同材料部位与愈伤组织的产生有密切的关
系,长寿花叶片较其茎尖和叶柄容易形成愈伤组织,
在进行组织培养快繁时,考虑到市场和生产成本,
应选较合适的材料作外植体,而长寿花接近根部的
茎段诱导时间长,污染率高,不适合作外植体进行
组织培养。
长寿花组培技术使优良品种在短短数年内,可获
得更多的生根苗,这一技术的应用,可实现长寿花工
厂化生产。
参考文献:
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表 4 不同外植体诱导愈伤组织的时间
  
 444
44 44
44 444

              
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