全 文 ：2 4 4 、 癌症 》 19 2年第 1卷第 6 期
毛叶茶和龙井茶提取物的抗瘤作用
以及对 D N A 拓扑异构酶 H 的抑制作用 滚
谢冰芬 刘宗潮 王理 开△ 番启超 梁永拒 苏秀容
中山医科大学肿瘤研究所 (J ’ 一州 · 5 1)0 (60 )
张润梅 张宏达
中山大学生物 系植物研究室
【摘 要 】 作者用嚷哇 旅 (M T T ) 法 研究了毛 叶茶提取物 (毛茶 C ) 和龙井茶提取物 (龙井 A )
对 人宫颈 癌H e L a 细胞 、 鼻咽 低分化鳞癌 C N E Z细胞和胃低分化粘液腺癌M G C 一 8 0 3细胞 的细胞 毒作用
毛茶 C 对 上述 3 种 细胞株 的半数抑制浓度 I (C 5 0) 分别 为 49 5 .6 尸g / ml 、 2 43 . 4产9/ m l 、 2 68 .6权 / m } ;
而龙茶 A 分 别 为 2 4 1 . 1理 / m l 、 3 1 1 . 4和 2 7 4.6 尸 g / m l 体 内抑瘤 试 验表明 , 毛 茶 C在 2 . 5 一 l() 眼 /
/ k g 剂量范 围内 , 对 小 鼠艾 氏腹 水癌实体 型 ( E S C ) 有明显抑制作 用 , 抑瘤率 为 1了 8 % 一 48 . 3 、 ;
对小鼠网织 细胞肉瘤 不L Z ) 的抑瘤率 为 28 , 3 。 一 54 . 5 ; 龙茶A 在 2 . 5一 10 m g / k g 剂量范围内对艾氏
实体瘤 E S C 的抑 制率 为 3 1 . 5 % 一 49 . 4 。、 : 对 L : 的抑 瘤率为3 5 . 8 % 一 5() % 而 一二种茶 叶提取物对小 鼠
肉瘤 S一1 80 仅有边缘的抗瘤 活性 。 用琼脂糖 凝胶 电泳 方法 则 得毛 茶 C 和龙茶 A 在 1 一 50 尸g/ m ! 浓
度范围内 . 对 D N A 拓扑异构酶 H 的抑制率 分别为75 一 10 。 , 抑酶作用有明显的量效关系 。 在 50 尸g / m1 浓
度均可抑制全 部酶 活性 , 推测 D N A 拓扑异 构酶 H 可能是这两种茶叶提取 物的靶酶
关键词 : 毛叶茶 龙井茶 抗瘤作 用 细胞毒作 用 D入A 拓扑 异构酶 H
我国居民喜欢饮茶 , 因此不少学者对 于茶叶
的防癌作用进行了广泛的研究 , 已报道各种绿茶
有阻止黄曲霉素B l致大鼠肝癌的作用 ’ 几 。 乌龙
茶可阻止小鼠前胃癌病变的形成 L ` 压 , 绿茶 对
M N N G诱 导L a ca 小鼠的肺癌和癌前病变有预防
作用 ` 汤 ` ,但对于茶叶抑制已形成的肿瘤 的作用报
道极少 , 仅见国内iL a ng M D等报道 。 体外
试验证明茶叶对人肺腺癌 、 胃腺癌 、 k5 62 细胞、
K B 细胞及直肠腺癌细胞有杀灭作用 , 并能抑制K B
细胞的D N A合成。 体内试验也证明对小鼠胰腺泡癌
有抑制作用 。 叶钟祥等 一 报道 , 绿茶有抗小鼠肿瘤
E A C和 E S C的作用 。 毛叶茶 ( C a me l l i a P t i -
l叩hy l la C ha gn )是新发现的野生茶 , 与龙井茶
( C a此 l l i a s l l l e n s i s 。 是同科同属但不同种 。
中国茶主要含咖啡碱 , 而毛叶茶却以可 可豆碱为
主 。 本实验研究了毛叶茶和龙井茶提取物的细胞
毒和抗瘤作用 以及对D N A拓扑异构酶 H 的抑 制
作用。
材 料 和 方 法
一 、 材料
受试药物 : 取新鲜野生毛叶茶的嫩芽叶 , 经
蒸青 , 烘干 、 磨碎等处理后 , 用80 % 丙酮浸泡 72
小时 , 浸出液减压浓缩 , 用氯仿萃取 , 再用乙 酸
乙醋萃取 , 收集乙酸乙 酚层减压浓缩 , 冷冻干燥
后得浅褐色粉末供实验用 。 龙井茶提取的工 艺同
毛叶茶 。 临用前用注射用水配制。
试剂 : 164 0粉由 日本制药株式 会社产品 , 嚷
哩 监 ( M T T ) 是瑞士 lF ur a公司产品 , 喇旨糖由
日本进口分装 , 嗅乙锭由51 9 1习公司购进。
细胞株 : 人低分化鼻咽癌细胞 (C N E Z ) ,
宫颈癌细胞H el a ,胃癌细胞M G C一 8 0 3均由本科窒
传代保种 。
动物与瘤株 : 昆明小鼠 , 体重 19 一23 克 , 雌
米 本题为卫生部科学基金 资助
△ 中山 医科 大学生 化教研 室
4 2 5
雄兼有 。 小鼠移植性肿瘤艾氏腹水癌 ( EcA )
,
st O n L S 的程序 〔” ,从小鼠艾氏腹水癌细胞中提取 。
艾氏实体型 (E S C ) , 网织细胞肉瘤 L Z和小鼠肉 (四 ) P 4结状D N A的制备 : P 4 D NA 从感染瘤 S一 28 0 。 P 4噬菌体的E e o l i C 1 17 大汤杆菌中提取 〔 ,。 〕 。
二 、 方法 (五 ) 药物对 D N A拓扑异构酶 n解结活性的
(一 ) 体外细胞毒试验 : 采用 c ar m ic hr el J 抑制试验 : 按刘宗 潮等改良的 iL u L F 等 川 , 的
等提出的唾哇蓝还原法 「“ 」, 分别取对数生长的 方法进行 。
H e l a
、
C N E Z和 M〔;C we we 8 O s 细胞 2 x 10 ” / lnI 作 实 验 结 果
实验用 , 用 E L I S A检测仪 , 波长 570 n ln, 测出各 一 、 体外细胞毒试验 : 选用 3 种细胞株 , 结
组的光密度 ( O D ) , 按下公式计算细胞生长抑制 果见表 1 , 毛叶茶C 对H d a 、 C N E : 和 M G C一8 03
率 , 然后用BI 15 方法计算半数抑制浓度 (I C S。 ) 。 细胞的半数抑制浓度 (I C 50 ) 分别为 4 9 5 . 6 尸创
生长抑制率 、 % 。 一 。 , 一 竺壑些-王塑2卫燮一 ) 义 ,。。 、 叫 , 24 3 . 4 , g/ ml 和 26 8 . 6“ / 耐 ; 龙 茶 A 的
对照孔平均 O D值 I C S。分别为 4 2 1 . 1产 g / m l 、 3 1 1 . 4 尸 g / lnI 和
(二 ) 体内抗瘤试验 : 按 j 9 89 年 11月南宁第 2 74 . 6产 g/ 创 。 结果表明 , 二种茶叶提取物对上
三届全国肿瘤药理 和化疗学术会议的 《抗癌药物 述 3 种人癌细胞均有不同程度的细胞毒作用 。 而
体内药效试验规程》 进行 。 对 C N E Z和M ( ; C一 803 细胞的细胞毒作用强于对
(三 ) D N A拓扑异构酶 n 的纯化 : 按 T hur
一
H el a 细胞的细胞毒作用 ( P 动 . 01 ) 。
表 I 、 毛茶 C 和龙茶 A 对体外培养的人肿瘤细胞生长的影响 △
工 基 f 派 苏 A
细胞株 使用 浓度
(产g /m l )
毛 茶 C 龙 茶 A
半数抑制浓度
( IC 5 o户 g /m l )
半数抑制浓度
( IC 团产 g /m l )
H e h
4 9 5 6
C N E Z
2 4 3
.
4
番
31 1
.
4
M G C
一
8 0 3
125
2 5 0
50 0
1 0以 )
12 5
2 50
50 0
1 0 0 0
12 5
2 5 0
5 0 0
1 0 0 0
平 均抑翻率 %
灸X 士 S )
6
。
2 士 5 . 2
27 9 士 1 1 . 3
5 7
.
0 士 4 . 3
7 1
。
3 土 4 . 1
18
.
1 士 1 3 7
6 2 2 土 1 0 . 9
80
.
9 土 0 . 2 1
82
.
6 士 0 . 7 8
27
.
2 士 1 0 . 8
45
.
6 士 1 1 . 2
73
.
4 土 1 . 9
7 8
.
6 士 0 . 9 2
平 均抑制率
(X 士 2 . 5 )
1 3士 2 。 6
38
.
3士 1 2 . 6
6 1
.
5 士 8 . 6
6 9
.
7 士 6 . 8
6
.
4 士 3 . 8
6 0 6 士 6 . 8
7 3 9 土 8 . 9
7 6
.
5 士 7 . 1
30
.
4 土 1 . 3
3 7
。
2 士 1 . 0
7 3 3 土 0 . 5 6
86
.
9士 0 . 84
` 与 H e aL 相 比 P < 0 . 01 △ 三批实验结果
二 、 体内抗瘤试验 :
(一 ) 对 E S C肿瘤生长的影响 , 结果见表 2 ,
( 1 ) 用毛茶 C 灌胃给药 , 每天 2 次 , 连用 9 天 ,
在 2 . 5 11砚 / k g 组的抑瘤率为48 . 3 % 和 17 . 8 % , 5 1119
/ 堆到1为 36 . 1 % , 21 % 和30 . 2 % ; 10 1119 / k g 组 为
32
.
2 %
、
32 % 和 3 3 . 6 % ( P 丈 0 . 0 5 一 0 . 0 1 ) 。
表明毛茶C 有抗瘤作用 。 但作腹腔注射给药 2 . S gnI
/ 魄和 10 n堪 / 切寸, 抑瘤率分别为 14 . 3 % 和20 %
(’$ 果未列入表中 ) 。 ( 2 ) 龙茶 A 灌胃给药 ,
每天 2 次 , 连用 9 天 , 在 2. 5 1119 / k g 组的抑瘤率分
别为 34 . 4 % 和 34 . 3 % ; s n双 z嗦组的抑瘤率为49 . 4
% 和 31 . 5 % ; 10 11艰 / k g组为4 3 . 3 % ; 20 11堪夕尹 蚊
组为 47 % ; 40 m g / 吃组为 35 % , 表明龙茶 A 在
2
.
5 一 40 11艰 / 沌范围内均有明显的抗瘤作用 。
而腹腔注射给予 2 . 5 一 10 1119 / 魄的 4 批实验 ,
抑瘤率为 19 . 5 % 一 23 % , (结果未列入表中 ) 。
( 二 ) 对小鼠 L Z生长的影响 : 结果见表 3 ,
毛茶 C 灌胃给药 , 每天 2 次 , 连用 9 天 ,在 2 . s m刀
掩组的抑瘤率分别为 37 % 和 28 . 3% ; 10 m g / k g
组的抑瘤率 分 别为 54 . 5 % 和 42 . 5 % , 龙茶 A 2 . 5
里飞 / 嗽组的抑瘤率分别为 42 . 3 % 和42 · 5 % ; 10 mg
/ kg 组为 50 % 和 3 5 . 5 % ( P < 0 . 05 一 0 . o r ) , 显
示二种茶提取物灌 胃给药对 L Z肿瘤生长有明 显
的抑制作用 , 但二种茶提取物作腹腔注射给药未
4 26
见明显的抗瘤作用 (未列入表 ) 。
(三) 毛茶C 和龙茶 A 灌胃或腹腔注射给药
对小鼠肿瘤S一 180 , 在 5 一 50 1刊岁 k g剂量 卜的抑
乡薛率波动在 2 . 4 % 上下。 ( 结果未列入表内 ) 。
表 2 、 毛茶 C 和龙茶 A 对小鼠肿瘤 E S C生长的影响 (灌胃给药 )
抑瘤率
l05
36咒
脚一19
l01
塑川10/组 别对照组
A D M △
毛茶 C
剂量与方寨
( m g /k g
.
B id x g ) (
动物数
% )
P 值
0
.
5 (iP少
5
.
0
< 0
,
05
< O
< 0
对 照组 .
A D M
毛茶 C
毛茶 C
毛茶 C
对照组 .
毛茶 C
毛茶 C
毛茶 C
对照组 ’
A D M
龙茶 A
龙茶 A
龙茶 A
对照组 `
A D M
龙茶 A
龙茶人
对 照组 .
龙茶 A
黔
0
.
8 ( 一P )
2
.
5
5
.
0
10
.
0
1 1 / 1 1
体重变化
( g )
+ 6
.
8
+ 6 1
十 3 . 4
+ 6
.
9
+ 1
.
8 7
十 0 . 60
十 4 4
+ 6
.
2
十 9 . 0
十 6 . 3
+ 8
.
1
平均瘤重 (g)
( X 土 S )
1
.
8 土 0 . 54
1
,
2 士 O, 4
1
.
1 5 士 0 . 4 0
1
.
2 2 士 0 . 4
1
.
4 3士 0 . 4
0
.
7 7 士 0 . 3 1
0
.
7 4 士 0 . 36
1
.
13 土 0 . 5 3
0
.
9了士 0 . 84
2
.
35士 0 . 69
1
.
9 3 士 0 . 55
< 0
.
0 1
< 0
.
0 1
> 0
.
05
< 0
.
0 5
.2…3486ù2131079了了产了. r才109
2
.
5
5
.
0
10
.
0
13 / 1 3
1 0 / 1 0
+ 8
-
十 行.
.
64 士 0 . 4 7
.
5 6 土 0 . 35
) 0
.
05
< 0
.
05
< 0
.
01…870丹」IJQJnJ山.通勺Jsn吕
…9刀阶34758 (i P )50
0
12 / 1 2
12 / 1 1
1 2 / 12
12 / 12
10 / 10
1 1 / J l
+ 6
.
0 4
+ 2
.
7
+ 3
.
4
十 4 2
十 4 . 3
十 6 8
+ 6
.
1
+ 5
.
8
+ 4
.
4
十 1 . 9
+ 3
。
8
1
.
8 3士 0 . 69
0
.
7 7 士 0 . 3 1
1
.
2 0 士 0 . 5 1
0
.
9 7 士 0 . 37
住.2
.
1 9 士 0 . 4
,
8 土 O 弘
< 0
.
0 0 1
< 0
.
05
< 0
.
01
< 0
.
05
402
…3,JOùgdgJdō4290 . 5 (iP )5 . 010 . 0 1 . 2 士 。 .0 . 9 士 认 < 0 . 05< 0 . 0 0 1< 0 . 0 191010//川
34l6042
.
5
1
.
0 2 士 0 . 38
1
.
4 3 士 0 . 4
0
.
9 4 士 0 .
0 98 士 0 .
0
.
0 5 ( P ( 0
.
1
. 对 照 组 给予 注 射 用水 。 . 4 m l/ 只 △ A D M 为 阿 霉素
表 3 、 毛茶C 和龙茶 A 对小鼠 L : 生长的影响
剂量与方 案
( m g /k g B
一d x g ) P刀
体 玉变化组 别 动物数
f前了后 、
抑瘤率
( g )
平 均瘤 币
(X 士 S ) ( % ) P 值
OCO5237
5口JO42504
ngJ
肠
42
门101089阳/厂22/广
J
z了了10110990
对 照组
A D M △
毛茶 C
毛茶 C
龙 茶 A
龙 茶 A
对 照组
A D M
毛 茶 C
毛茶C
龙茶 A
龙茶 A
1 2 /
0
.
8 ( 一P )
2
.
5
10
.
0
2
.
5
10
.
0
1 1 / 1 1
1 1 / 1 1
1 1 / 1 1
1 2 / 1 1
1 2 / 1 2
0
.
8 ( I P )
2
.
5
10
.
0
2
.
5
】0 . 0
+ 4
,
6
十 3 . 1
十 2 4
+ 4
。
5
+ 3
.
6
+ 3
.
1
+ 6
. 门
+ 7
.
4
十 6 . 0
+ 3
.
2
+ 4
。
8
+ 6
.
2
2
.
8 6 土 0 . 6 8
1
.
3 5 士 0 . 5 8
1
.
8 0 土 0 9
1
.
3 0 士 0 . 38
工. 6 5 土 0 . 86
1
.
4 3 土 0 . 团
2
.
4 0 土 J . 0 7
1
.
0 8 士 0 . 6 4
1
.
72 士 0 . 81
1
.
3 8 土 . 0 3 6
1
.
38 士 0 . 63
1
.
50 士 0 . 4 9
_
0
.
0 0 !
一 `)力 1
氏 0 0 }
又 0 . ( )0 1
< 0
.
0 0 1
;;
.
f )
.
0 1
、
0
.
0 5
、
0
.
0 5
3 5
< 0
.
( 0
.
对 照组 给予注 射 用 水 u 4 m l 只 △ A D M 阿 霉 素
三 、 毛茶 C 和龙茶A 对D N A 拓扑异构酶 H解
结活性的抑刷作用 , 结果如图 1 和图 2 所示。 a
一廿一道分别加入 1 : 5 , 1 : 10 , l : 2 0和 l :
40 稀释的酶液 2 川 。 e 道为无酶 。 以 测定酶的解
结活性 , 随酶浓度的降低而酶的解结活力逐渐降
底。 若把a 道的酶活性作为 10 0 % , 则 1苏首为 50 % 、
e道为25 % , d道为 12 . 5 % , e道无酶活性 。 f道 与
a道同加入 l : 5 酶液 , g一一 J道均加入 l : 5 稀
释酶 液 2 川 , 并依次加入 1 尸岁 ml . 5 1双 / d 、
2导佗 / 司 和 50 )匆 z m l浓度的药物 (州 7 . 0 ) 。 毛
茶 C (如图 1 ) 和龙茶 A (如图 2 ) 表明 ,毛
茶 C 对D N A拓扑 异构酶 n 的抑制率按药物 浓
度依次为 7 5 % 、 8 7 . 5 % 、 9 0 % 和 10 0 % (与图 1
和一 e道对比 ) ; 龙茶A 的抑酶率依次为 75 % 、 85
4 2 7
— — — 一 一 ~— 一一一一一一一 - -一一一一一 - -一% 、 90 % 和 10 0 % (与 图 2 中 a悦道对比 ) 。表明二种茶叶的提取物对 D N A拓扑异构酶 n 均有强
的抑制作用 , 且有明显的量效关系 。 在 50 傀 / 创
浓度下酶活性受到完全的抑制 。
说明D N A拓扑异构酶可能是两种茶叶提取物的靶
酶 。 但在体 内外试验抑制作用所要求的浓度远
较抑酶所需的为高 , 这可能药物进入细胞内受到
某种限制 , 使胞内药物浓度减低所致 。 目前临床
一兰 __ _兮 少 _ _ _ .d e f g h _ ` 】
圈 1 . 毛茶 C 对 D N A T O P O I醉活性的影晌 圈 2 . 龙茶 A 对 D N A T O P O I醉活性的形吮
讨 论
体外试验 表明二种茶叶提取物对人 宫 颈癌
eH L
a细胸、 人低分化鼻咽癌 C N E: 细胞和胃粘
液腺癌细胞M GC一8 0 3具有一定的 细胞 毒作用 ,
其中对C N E Z和 M G C一召03 细胞较为敏感 。 体内试
验在 2 , 5一4 0m g 恤酬量下灌胃给药 , 二种茶叶提取种
物对艾氏实体瘤 ( E S C ) 和网织细胞肉瘤 ( L Z )
有明显的抑制作用 , 但量效关系不明显 . 而腹腔
注射给药未见明显的抑瘤作用 。 出 现上 述 现
象 , 有可能是药物通过 胃肠吸收和代谢酶激活
变为活性更强的物质而发挥抗瘤作用 。 这种给药
途经与我国居民饮茶的途径相同。
二手搽叶提取物在 2 . s n 落一4 0 11马尹地各剂量
组的小鼠体重增加与对照组的小鼠相似 , 动物
状态良好 , 未见消瘦松毛等毒性表现 。 文献报告 〔 ,幻
毛茶 C 给小鼠单次灌胃给药的半数致死量 (L D
50 ) 为 .4 67 士 . 0 . 0 39 留峪 本实验所用的最高剂
量为 4 0 11葱 / 掩 , 安全度较大 。 表明两种茶叶提
取物的毒性小 。
二种茶叶提取物在 1产创 d 一 50拜留 d 浓
度 对 D N A 拓 扑异构酶 n 有一显著的抑制作用 ,
量效关系明显。 在5妙岁 d 浓度下能完全抑制酬舌
性 , 此结果与我们以前的实验结果相同 仁, , 〕 。 D N A
拓扑异构酶 n是一种存在细胞核内的酶 , 当毛茶
C和龙茶 A 与酶直接接触时 , 能强力抑市琪活性 ,
使用的许多抗癌植物药亦有类似情况。
总之 , 毛茶 C 和龙茶 A 对宿主毒性小 , 体外
有细胞毒作用 , 体内有抗瘤活性 , 对D N A材卜异构
酶 n有很强的抑制作用 。 据报道 L , 一 “ 」 , 茶叶 在
预防肝癌 、 胃癌 、 肺痛方面显 示一定的作用 。 我
国茶叶资源丰富 , 又是人们日常喜爱的饮品 。 故
研究茶叶在人类癌瘤中的防治作用具有重要的现
实意义 , 值得进一步深入研究 。
(感谢本校药理教研室萧建初老师协助计算
本实验的1 C 50 ; 本室主管技师潘伟光负责本实验
照片的冲晒和放大工作 ) 。
参 考 文 献
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{ 8 〕 aC r m 沙 r el J e t a l E v a l u a t i o n of a t e tr az o l iu m b a s
se d s e m ia u t o m at e d c o b r im e tr i e 姗即 : A s se es s m e n t
可 e h e m o s e n s i t i v i t y t es t in g . C a n eC r R e s 19 87 ;
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[ 9 ] T h u r s 幻n L S , e t 吐 A 戊 i t u m洲 r 鲍 即 st . 78 . I n h 一b l -
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f r o m b ac et r印 h 昭e P 4 Q p s 记 , S t u d七 s w 血h D N A
协 p o iso m e r as 6 . N u d e i e A e i d s R e s 19 8 1 ; 9 : 39 79
乞 1 1〕 刘宗潮 , 等 . D N A 嵌入剂和 D N A拓扑异 构 醉 I抑制
剂与抗瘤作用 的关系一 介绍 两种抗庙 药物的筛选方法 .
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二 12 」许实波 , 等 . 毛叶茶提取物急性毒性 、 降血 脂 、 降胆固
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T H E A N T I C A N C E R E F F E C T A N D A N T L D N A T O P O I S O M E R A S E
1 E F F E〔 T O F E X T R A C T S O F C A M E L L I A P T I L O P H Y L L A C H A N G A N D
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e 川 c a cr in o m a e e ll l价 e (C N 旦 ) a l l d g a s tr 记 ca n e e r ce l l l地 e (M G C一 8 0 3 ) i n v it r o w a s
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棺 a i哪 t L 2 . T h e s e r ow xe t r ac ts h a v e o n ly am r g i n a l i n h ib i to ry e f fe e t 昭 a i n s t s ar 仍m 含 15 0
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K e v w or ds : C a m e lli a p t i ot p h y laj ch a n g C a此 l li a s i n e n s is A n it tu m o r e f fe e r C y t o 幻 x i c
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