全 文 ：毛叶茶的微型繁殖及激素对器官
发 生 的 影 响’
朱念德 李 静二
( 中山大学生物学系 )
摘 要 对毛叶茶 ( e a o e l l i a P t i l o p h y l l a e h a o g ) 带腋芽原基茎段和成熟种胚 最 适
培养基的筛选 , 及不同激素组合对琅生株及成熟胚增殖的不同影响的试验 , 结果 表 明 , 带 腋 芽
原基的茎培养在添加 K T 与N A A 的 S H培养基上 , 芽的萌发率 达 86 呱以 上 . 60 天 内 芽 数增 殖
4 “ 5 倍 , 而成熟种胚以添加 6 一 B A与 I A A 的改良 E R培养基最适宜 , 胚萌发率接近 8 5 . 7肠 , 60
天内丛生芽分化率达 98 呱。
毛叶茶是茶树近缘种
碱为主而不含咖啡碱 〔幻
( 1〕 · , 、 二 , 。 , , , , ` . , rt , . * . 小 ` , , 、 , , , 甘
, 闰 曲 一脱 钾叮叨 下寸月 沼幼酉叹 , 1旦 j 专摘咭呵 , 心二二 下幼从几 匕 、 玛 川 田`
物的组织培养已有不少报道
是一种很有开发为商品茶价值的野生茶树资源 . 关于山茶科植
( 3、 的 · , rt ` 。 r , , , , , * , 。 , . 一、 二~ , * , , . ,
, 1旦 1二目丁 习七乏且梦弓 J有 , 卜 l目 训凡 目她逸民 J且 。 口争 碑入习匕兮势仰了 ) 乙 4 月巳甘 r茶茎段外植体和成熟种胚培养的适宜培养基及激素对器官发生的影响。
1 材料和方法
供试材料为野生毛叶茶树的成熟种子及由种子萌发的幼苗。
剥去果皮的种子及实生苗经自来水冲洗后 ,用 70 肠乙醇浸泡 15 5 , 。 . 1呱纵化汞震荡消毒 1`
, in
, 无菌水冲洗 4 ~ 5 次 . 在无菌条件下剥去种子的内外种皮 , 切取胚及少部份子 叶。 实
生苗切取长约。 . 3 c m 带腋芽原基的茎段 . 外植体接种于附加不同激素配比的基本培养基上 .
诱导丛生芽的培养基 为 s H 、 N 6 、 M s 和改良 E R 〔5〕 4种 ,按试验要求添加不 同量的
飞 T 、 6 一 B A 、 Z T 和 N A A 、 IA A 的配合 . 灭菌前 p H 调节到 5 . 8 , 含糖量 3 肠 、 4帕 。 培养
一温度 2 5 士 2 O C , 人工辅助光照 1 h2 / d 、 光照强度 2 0 0 0 L o x 。
一 ~ _一 , _ 去~ 一 1 。 。 ,、 一 _兀恨旧 王很术用百乙找货乔圣 蔗塘浓度降为 1 . 5 肠 , 附加不同浓度的 N A A和 I B A .
. 广东省科委资助课题
二现在工作单位 : 石家庄地区粮油进 出口 公司
第 l 期 毛叶茶的微型繁殖及激素对器官发生的影响
2结果和讨论
玄 . 1培养基对茎段外植体丛生芽增殖的影响
将带腋芽原基的茎段接种于添加 6一 BA的 M S、 N6、 SH培养基上 , 约 30 d左右 , 腋芽
原基膨大 、 萌发 , 并分化丛生芽 , 培养 6 d0 后 , 丛生芽增殖情况见表 1 。
表 l 附加 6 一 B A的不同培养基对茅琦技和生长的影响
( 接种 60 天后 , 呱察 15 丛 )
培养基 芽萌发率
( 肠 )
每个原基分化芽数 最大芽条长
( e位 )
平均芽条长
(
c m )
6 6
.
6
5 3
.
2
4
1
, 、 J
S
4 、 5
1 8
_
4 1勺 3 0 . 2
J
,
,
S
,互卜
6.山N5
由表 1 可 以看出 , 毛叶茶带腋芽原基的茎段培养对培养基的要求并不特别严格 , 基本培
养基 S H 、 N 6 、 M S 中只要加入适当的植物激素 , 均可诱导腋芽原基的生长和分化丛生 芽 ,
但在 S H培养基上 , 萌发率和分化丛芽率都较高 , 芽条普遍较长 、 较粗壮 .
卫。 2 培养基对离体胚增殖的影响
将离体胚接种于添加激素的 S H和改 良 E R培养基上 , 约 10 d左右胚芽均萌动 , 但随后的
一生长则显出较大的差别 .
表 2 附加激素的不 同培养基对离体胚增殖和生长的影响 ( 接种 60 天后 , 观察 1 5个胜 )
培养基 胚发萌率 丛芽分化率 最大芽条长 平均芽条长
一一 ( 肠 ) ( 呱 ) ( e m ) ( e m )
S H 5 5
.
6 0 1
. 卜 。 . 4 2
E R 5 5
.
7 9 5 3
、
1
.
8
由表 2 看出 , S H培养基上 , 胚芽的萌发率虽然接近改良E R培养基 , 但在萌发后生长缓
慢 , 不出现丛生现象 . 而在改良E R培养上 , 丛芽分化率高 , 芽条长势好 , 高生长傲约 为
S H 培养基上的4 . 3倍 , 且芽条粗壮 。
比较 S H和改良 E R培养基的N源 ,虽然两种培养基均采用硝态按和态 N
北合态 N的水平都差别较大 , 改 良E R培养基 N的水平远远高于 S H培养基 ,
的棍合物 ,但两种
其中硝态N 高出
生 态 科 学 1 9 9 2年
1
.
3倍 、 铁态 N高出 5 . 7倍。 毛叶茶胚培养与茎段培养要求不同的培养基 , 显示出高 N 水平的
改 良E R培养基较适合成熟胚的增殖 .
.2 3 不同激素配比对茎段外植体丛生芽增殖的影响
. `
在 S H培养基上 , 比较了不同激素配 比对丛生芽增殖的影 响 . 各种生长素和细胞分 裂 素 -
对毛叶茶丛生芽增殖的影响是明显的 , 表 3 表明 , 不同种类细胞分裂素对芽增殖的 效 应 不
同 . 当 N A A分 别与适当浓度的 K T 、 B A , 公 T配合时 , 都能促邃芽的萌发 , 1但以K T 效果康 1
表 3 加 A A 与各种细脸合裘素韶合种 丛生芽增孩的舒响
( 接种 60 天后 , 观察 15个外楼休 )
激素浓度 ( , 色 / 1 ) 芽 苗 发 率
( 肠 )
丛 芽 分 化 率
( 帕 )
N A A K T 6一仑A Z T
0 0 0 0 0 0
7 7
`
8
92动3
06dU68健ù2
2
.
5
0
_
5 3
好 , 耐仑A又优于 : T . K 了与 B A都能诱导分化丛芽 , K T念. 5血 g / 1的诱导率为蛇 . 5拓 , B A
为 6 6 . 6肠 . K T诱导生长的芽体大 , 每个芽可分化 4 、 。个丛穿 ,且丛穿长势注盛 . 仑A 诱导
生长的穿体小 , 每个芽虽分化 4 、 5 个丛芽 , 但丛芽长势较差 . 之T虽能诱导个别芽菌 发 ,
但种制分化丛穿一
第 1 期 毛叶茶的微型繁殖及激素对器官发生的影响 .
表 3还表明 , 在基本培养基上添加适量细胞分裂素和 N A A的配合能促进 芽 二的 增殖 .
舔加 K T Z m g / 1 + N A A o . s m g / 1 明显优于对照组 ( 不加枉何激素 ) . 萌发率由对 照 i的
O 增加到 60 呱 , 分化丛芽率由 o 增加到 7 . 8 呱 , N A A 浓度固定在。 . s m g / 1时 , 增加 K T 到
2
.
5二 g / 1 , 萌发率和分化率均明显提高 。 但继续增加 K T浓度时 , 芽萌发和分化率 都 呈直
线下降 。 当 K T增加到 6 m g / 1时 , 完全抑制芽的萌发。 当 K T浓度 固定 在 2 . s m g / 1 时 ,
U A A 浓度从 。 . s m g / 1 递增至 4m g / 1 时 , 萌发率和分化率呈显著的负 相 关 . N A A增 至
s m g / 1时完全抑制芽的萌发 。 植物激素对组织培养中器官的形成有重要和明显调节 作二用 ,
主要取于生长素和细胞分裂素的相互调节作用 , 即形成器官的类型是受两种激素相对浓度的
控制 , 较高水平生长素利于根的形成 , 而抑制芽的发生 . 相反 ,较高浓度的细胞分裂素则促进
芽的发生而抑制根的形成 。 因此 , 在进行以腋生株为外植体的微型繁殖时 , S H 培养基是比
较合适的培养基 , 附加 K T和 N A A是必要的 , 较高浓度细胞分裂素 ( K T 2 . s m g / 1 ) 能促
芽的形成 , 阴加 K T 2 . 5肠 / 1和 N A A o . s m g / 1的组合对诱导丛生芽的增殖是适宜的 .
2
.
4 不同激素配比对离体胚增殖的影响
图 l 表明 , 在基本培养基上附加 c一 B A 2 m g / 1 比 对 照 ( 不加任何激素 ) 明显 促进
一 _ ~ 。 , ` ~ 一 , 、 一一 _ , _ 一 t 一 ~ _ _ , ~ ~ ~ , _ _ _ ~ , __ ~ 一 ~ ~ 一 1 _ 一 _ . _ . ` _ _了胚芽的增殖 , 萌发率可由对照的 25 肠增加到 8 5 . 7肠 。 如果浓度提高奇、 3 倍 , 则萌发率显,
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~ 一一 一 ` ~ ` , `… ~ 一 `一 R尸 ” ~ - 一 ’ `一 产 ” ` .、 . ” ~ ~ ’ , 2 ~ ’ 曰 ’ 乃切叫 ~ 丫 ~
着降低到 40 肠左右 。 6一 B A在 1 “ 3 m g / 1范围内的不同浓度 间芽的伸长差异不显著 , 平均
长度在 2 c m 左右 。 低于或高于此浓度 , 芽的伸长都明显受抑制 . 芽鲜重随浓度增加而增大 ,
浓度高于 Z m g / 1则抑制鲜重增加 .
二` 书》 刀 (笼 ,
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图 1 6 e B A 浓度对胚萌发 、 增殖 、 生长的影响 ( 接种后 60 天 , 观察 15 个胚 ) 纵座标W 示
芽条鲜重 ( m g /个 ) , L示芽条长度 ( c m ) ; S示胚萌发率 ( 呱 ) ; D 示丛芽分化率 ( 肠 )
。 芽条鲜重 ; x _ _ _ _ x 芽条长度
;
x
_ _
_ _ _
_
_
_
_
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
.
_ _ _
x 胚萌发率 ; 。 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。 丛芽分化率
生 态 科 学1 9 92年
表 4 6一 A B同I A A酩合时胚增殖和生长的影响( 接种后 0 6天 , 观察 15 个胚 )
激 素 浓 度 接种后萌动时间 胚萌发率 芽 条
最大芽长
长 度 芽 条 鲜 重 丛芽分化率
平均芽长 最大芽重 平均芽重
6一 B A I A A ( d ) ( 肠 ) ( e m ) ( m g )
0 0 1 2 2 5 0
.
5 0
.
4 3 4 0 2 7 0
0 0
.
5 9 4 0 1 0
.
6 4 0 3 0 0
2 0 1 0 4 0
.
7 2
.
5 劝。 8 2 9 0 4 2 1 8 . 2
2 0
.
4 7 8 5
.
7 3 1
.
8 1 5 0 8 0 5 0
2 0
.
5 8 7 0 3
。
2 2
.
0 1
一
1 9 0
一
1 0 1
`
6 9
.
2
、
2 1 8 5 5
·
6 3 1
.
8 6 1 5 0 9 3 9 2
.
8
3 1 1 0 4 0 3 2 1 0 0 8 7 9 8
4 0
_
5 1 0 4 0
。
9 2
。
2 1
_
5 2 革1 0 8 2 5万 . 6
5 0
.
5 1 2 5 0 0
由表 4 可以看出 , 6一 B A是诱导分化丛芽的重要因素 , 较高浓度 6一 B A 3m g / 1可导致
较高的分化率 , 而 I A A 与6 一 B A配合 , 与单独使用 6一 B A比较 , 在胚芽萌发率 、 芽条长度
和芽条鲜重及丛芽分化率等都有所促进 . 在 6 一 B A Zm g / 1和 工A A o . 4m g / 1 组合 中、 接
种后 7 d胚芽即萌动 , 萌发率达弓5 . 7呱而 6 一 B A 3 m 孟/ 1和 I A A l o g / 1的组合 , 萌发率虽
然较低 , 但丛芽分 化率可达 98 肠 . 从上述综合指标来着 , 在进行芽的增殖培养时 ,加入 6 一 B A
和 IA A 都是必要的 . 在最初培养时 , 6 一 B A : I A A = 2 : 。 . 4 ( xn g / 1 ) 可缩短胚萌动时
间 , 并增勿有发率 , 其后的培养转移到 3 : 1 ( m g / 1 ) 激素配比的培养基中有利于增加芽
的繁殖倍数 。
种还诱导丛生 苗与液主皮诱导丛主苗听要录的激素条件不同 , 可能是由于各种外植体所
含内源激素不同和生理状态的差异所致 .
2
.
5 根的诱导
为了使无根苗形 、 完整植株 、 把上二无根苗培养在合E “ 培养基上 , 在滤纸桥上 用液 。
诱导生根 , 结果都能诱导 出健壮的恨系 . 长出的根及根毛均为白色 。 比较了 N A A 6 m g / 1 、
N A A 8 m g / i和 N A A 4 m g / i + 1 B A 4 m g / i的生根效果 , 以 N A A 4 m g / i + I A B 4 nt g / i
的效果较好 , 生根率达 75 呱 , ’平均每株可长 4 条根。
第 l 期 毛叶茶的微型繁殖及激素对器官发生的影响. 1 15
参 考 文 献
2
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4
罗士苇. 植物组织培养和细胞培养研究工作的进展及其应用. 植物生理学报 , . 1。”
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x o 3 4
,
( 2 )
: s x、 5 2
土井芳宪 . 茶树茎切片愈伤组织诱导的适宜条件及其在花药培养上的应用 ( 国外农学 ) 茶
叶 1 9 5 1 ( 1 ) : 2。、 3 0
庄承纪 . 梁汉兴 . 茶花组织培养中体细胞胚伏体的形成 . 实验生物学报 , 1 9 8 5 , 1 8 ( 3 )
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`
, 曰 2 8 0
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颜慕勤 . 茶树子叶离体培养形成呸状体的研究 , 林业科学 1 983 , 1 9 ( 1 ) ; 25 、 31
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K e n n e t h C
.
T o r r e s
,
J a e k i e C a r l 1 5 1
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A b s t r a e t T h e e x P e r i m e n t a l r e s u l t s s h o w e d : i n t h e 也 e d i u m o f S e h e n k
a n d H i d b r a n d t ( S H ) a d d e d , i t h k i n e t i n ( K T ) a n d n a p五 t h a l e n e
a c e t i c a c反d ( N A A ) , t h e s p r o u t s n g r a t e o f a x i l l a r y b住 d s 二 e r e o , e r 8 6听 .
b u d s m w t i P l i e d 4 一 5 t i m e I n s i x t y d a y s . I n t 五e m e d i u m o f i m p r o v e d
e r i k s s o n ( E R ) a d d
e d 二 i t t h 6一 b e n Z y l a nt i n o p u r i n e ( 6 一 B A ) a n d i n d o l e一 3 一 a e e t e
( I A A )
.
T 五e m a t u r e e m b r 了 0 5 f r o m s e e d s , e r e g r o w i n g f i n e . T h e s p r o u t i n g
r a t e o f e m b r y o s w a s e l o s e t o 8 5 . 7肠 , t h e d i f f e r e n t i a l r a t e o f e l u s t e r
b u d w e r e o v e r 9 3 肠 .
. B i o l o g 了 D e p a r t m e n t , Z h o n g s h a n U n i v e r s i t y