全 文 ：网络出版时间:2016 －8 －23 14:29:00 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． Ｒ． 20160823． 1429． 054． html
◇研究简报◇
铁筷子醇提物对佐剂性关节炎
大鼠 HIF-1α、VEGF和 MMP-3 表达的影响
李 梦，钱海兵
(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
Effects of alcohol extract from root of wintersweet
on expression of HIF-1α，VEGF and MMP-3 in ad-
juvant arthritis rats
LI Meng，QIAN Hai-bing
(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang
550002，China)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2016． 09． 027
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2016)09 － 1326 － 02
中国图书分类号:Ｒ-332;Ｒ284． 1;Ｒ322． 72;Ｒ593． 22;Ｒ684． 3
关键词:铁筷子;醇提物;佐剂性关节炎;缺氧诱导因子-1α;
血管内皮因子;基质金属蛋白酶-3
Key words:root of wintersweet;alcohol extract;adjuvant arthri-
tis;hypoxia-inducible factor-1α;vascular endothelial growth fac-
tor;matrix metalloproteinase-3
收稿日期:2016 － 03 － 03，修回稿日期:2016 － 05 － 23
基金项目:贵州省科技厅联合基金(No 黔科合中药字［2012］
LKZ7030;贵阳市科技计划项目(No 筑科合同［2011204］
22 号);贵州省研究生教育创新基地(No 黔教研合 CXJD
字［2014］004)
作者简介:李 梦(1991 －)，女，硕士生，研究方向:中药及民族药药
效物质基础及作用机制，E-mail:359473448@ qq． com;
钱海兵(1977 －)，男，博士，教授，研究方向:中药及民族
药药效物质基础及作用机制，通 讯 作 者，E-mail:
279753407@ qq． com
铁筷子(Chimonanthus praecox L． Link．)为腊梅科腊梅
属植物腊梅及山腊梅的干燥根，是苗族人民用于治疗类风湿
性关节炎(rheumatoid arthritis，ＲA)的传统用药［1］。前期研
究表明铁筷子醇提物可以减轻佐剂性关节炎(AA)大鼠足肿
胀，对 ＲA具有一定的治疗作用。本研究以佐剂性关节炎大
鼠模型为基础，观察铁筷子醇提物对 AA大鼠 HIF-1α、VEGF
以及 MMP-3 的影响。
1 材料与仪器
1． 1 实验动物 SPF级 SD大鼠，体质量(200 ± 20 g)，由中
国人民解放军第三军医大学实验动物中心提供(动物合格
证书编号:2012-0003)。
1． 2 主要药品与试剂 铁筷子，采自贵阳市乌当区三江镇
农场，经贵阳中医学院药学院生药教研室鉴定为腊梅科腊梅
属植物腊梅的根。雷公藤多苷片，福建汇天生物药业有限公
司。灭活卡介苗(BCG)，中国卫生部上海生物制品研究所。
ELISA试剂盒由海蓝基生物科技有限公司提供。免疫组化
抗体由 Santa Cruz公司提供。
1． 3 主要仪器 石蜡切片机 CUT4062，德国莱卡;电动匀浆
机 S25，德国 IKA。
2 方法
2． 1 铁筷子醇提物浸膏的制备 铁筷子用体积分数为
0. 78 的乙醇热回流提取，减压浓缩，蒸干得浸膏。
2． 2 完全弗氏佐剂(CFA)及 AA大鼠模型的制备 高压灭
菌后的石蜡油和羊毛脂加入卡介苗，制备成含卡介苗 100 g
·L －1的完全弗氏佐剂，于大鼠左足跖皮内注射，复制成 AA
大鼠模型。
2． 3 动物分组及给药 72 只健康 SD 大鼠，♀♂各半，随机
分为空白组、模型组、雷公藤组(31. 5 mg·kg －1·d －1)、铁筷
子醇提物高、中、低剂量组(生药量为 7. 0、3. 5、1. 75 g·kg －1
·d －1)。
2． 4 指标的检测
2． 4． 1 病理学检测 踝关节 HE染色，并对病理损伤评分。
2． 4． 2 血清中 HIF-1α 的测定 根据 ELISA 试剂盒说明书
检测 HIF-1α的含量。
2． 4． 3 滑膜组织中 VEGF、MMP-3 的检测 用免疫组化方
法检测 VEGF、MMP-3 的蛋白表达，并分析其平均光密度的
变化。
2． 4． 4 统计学方法 采用 SPSS19. 0 统计软件处理实验数
据，计量资料采用 珋x ± s表示。
3 结果
3． 1 铁筷子醇提物对 AA 大鼠踝关节病理损伤的影响
HE染色结果显示铁筷子醇提物能改善 AA大鼠踝关节病理
病变情况。根据病理学评分原则进行评分，如 Tab 1 所示，
铁筷子醇提物高、中剂量组可明显降低病理学评分分值(P
＜ 0. 05)。
Tab 1 Pathological damage score of ankle in AA rats(珋x ± s，n = 12)
Group
Dosage
/mg·kg －1
Pathological
damage score
Normal control － 1． 17 ± 0． 98
Model control － 11． 17 ± 0． 75＊＊
High-dosage 664 6． 83 ± 0． 98#
Middle-dosage 332 7． 67 ± 1． 51#
Low-dosage 166 9． 83 ± 1． 17
Tripterygium wilfordii
glycosides tablets
31． 5 6． 67 ± 0． 82#
＊＊P ＜ 0. 01 vs normal control;#P ＜ 0. 05 vs model control
3． 2 铁筷子醇提物对 AA 大鼠血清中 HIF-1α浓度的影响
如 Tab 2 所示，铁筷子醇提物各剂量组可降低 HIF-1α 的
浓度，其中高、中剂量组作用明显(P ＜ 0. 05)。
3． 3 铁筷子醇提物对 AA大鼠滑膜组织 VEGF、MMP-3 蛋
白表达的影响 如Tab2所示，铁筷子醇提物高、中剂量组
·6231· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2016 Sep;32(9):1326 ～ 7
Tab 2 Effect on concentrations of HIF-1α in serum and optical density value of VEGF，MMP-3 in synovial tissue in AA rats(珋x ± s，n = 12)
Group
Dosage
/mg·kg －1
Concentrations of
HIF-1α /μg·L －1
Optical density
value of VEGF
Optical density
value of MMP-3
Normal control － 1． 17 ± 0． 13 110． 74 ± 1． 74 111． 97 ± 1． 19
Model control － 1． 78 ± 0． 22* 188． 09 ± 1． 01* 189． 88 ± 1． 06*
High-dosage 664 1． 31 ± 0． 12# 140． 87 ± 0． 87# 142． 83 ± 0． 72#
Middle-dosage 332 1． 39 ± 0． 11# 150． 86 ± 1． 82# 152． 86 ± 2． 55#
Low-dosage 166 1． 47 ± 0． 16 170． 21 ± 1． 19 173． 07 ± 3． 07
Tripterygium wilfordii glycosides tablets 31． 5 1． 35 ± 0． 14# 142． 98 ± 0． 46# 143． 93 ± 0． 82#
* P ＜ 0. 05 vs normal control;#P ＜ 0. 05 vs model control
可明显降低 VEGF、MMP-3 光密度值(P ＜ 0. 05)。
4 讨论
近年在对 ＲA发病机制的研究过程中，滑膜血管新生被
认为发挥了重要作用。HIF-1α 是低氧状态下血管生成的核
心调控因子，主要通过提高 VEGF 的表达促进血管生成，从
而促进滑膜细胞增殖、活化［2］，VEGF 在缺氧条件下能被
HIF-1α诱导激活，导致 ＲA血管生成和滑膜炎症［3］。MMP-3
作为金属蛋白酶家族成员之一，是 ＲA 的一种重要致病因
素。有学者认为在 ＲA过程中，某些细胞因子会使 MMP-3 得
到释放，导致软骨基质的降解，从而破坏 ＲA 软骨和骨骼［4］。
本实验结果显示，铁筷子醇提物可以降低 HIF-1α 水平以及
VEGF、MMP-3 的表达，因此推测铁筷子醇提物通过降低细胞
因子水平，减轻了细胞因子对滑膜细胞和软骨细胞的刺激，
从而减少滑膜组织中 MMP-3 的分泌，最终阻止骨质的破坏。
综上所述，铁筷子醇提物能改善 AA 大鼠关节的病理改
变，说明其可以抑制关节炎症，对 ＲA 具有一定的疗效。且
铁筷子醇提物下调 HIF-1α 及 VEGF、MMP-3 的表达可能是
其治疗 ＲA的相关机制。
参考文献:
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网络出版时间:2016 －8 －23 14:29:00 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． Ｒ． 20160823． 1429． 056． html
全细胞膜片钳技术在神经元钙通道药理研究中的应用
林智颖，张 静，黄天文，陈晓春
(福建医科大学附属协和医院，福建省老年医学研究所，福建省神经生物学研究中心，福建 福州 350001)
Application of whole cell patch clamp technique in
pharmacological study of calcium channels in neu-
rons
LIN Zhi-ying， ZHANG Jing， HUANG Tian-wen，
CHEN Xiao-chun
(Fujian Institute of Geriatrics，the Affiliated Union Hospital of
Fujian Medical University;Ｒesearch Center of Neurobiology，
收稿日期:2016 － 04 － 24，修回日期:2016 － 05 － 29
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 30772555);福建省自然
科学基金资助项目(No 2013J01311);福建省医学创新课
题(No 2012-CX-15) ;福建省中医药科研项目 (No
wzkf201309)
作者简介:林智颖(1972 －)，男，博士，副教授，研究方向:老年性痴
呆基础和临床，E-mail:lzy8426@ 126． com
Fujian Medical University，Fuzhou 350001，China)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2016． 09． 028
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2016)09 － 1327 － 02
中国图书分类号:
关键词:全细胞膜片钳技术;海马神经元;电压门控的钙通
道;人参皂苷 Ｒb1;原代培养;Y管
Key words:whole cell patch clamp;hippocampal neuron;volt-
age-gated calcium channels;ginsenoside Ｒb1;primary culture;
Y-tube
全细胞膜片钳技术是研究离子通道和药物对离子通道
影响的最重要的技术之一，但是由于其对实验技术要求高，
对实验标本制备和实验环境、实验用溶液等条件均有严格要
求等原因致使其在实际运用中较为困难。本文报告了运用
全细胞膜片钳技术进行神经元钙通道药理研究的一些经验。
·7231·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2016 Sep;32(9):1327 ～ 8