全 文 ：贵阳医学院学报 1 980 年第五卷第一期
漆姑草黄酮贰的抗肿瘤作用及临床前药理研究
黄厚聘 、 程才芬 、 任光友 、 林文琴
( 药理学教研室 )
漆姑草 s a g in aJ ap n o i e a( S w e et ) oh w i属石竹科植物 , 药用全草 , 别名 “ 羊 儿 草 ” 、
“ 地松” 、 “ 星秀草 ” 等 , 主要生于庭园 、 田间 、 路旁及土坎阴湿处 , 夏季采集 , 分布于江
苏 、 江西 、 湖南 、 四川及贵州等省 , 民间主要用于散结消肿 、 解毒止痒 ` 工 ’ 。
前文曾通过 5 种动物瘤菌进行体内筛选 , 证明漆姑草水提物对 S , , 。 、 s 。 7 、 u , . 及 6L ; 。
4种瘤株有显著的抗癌作用 , 说明此药的抗癌谱广 。 通过急性及亚急性毒性试验证明其抗癌
有效 毫的毒性较小 。 通过系统药理实验发现此药的水提物有显著的镇咳 、 祛痰及镇痛作用 ,
对家兔的离体及在位大小肠有兴奋作用 , 阿托品或肾上腺素可对抗之 。 ’ “ ’ 我 院内科学教 研
室通过临床试验初步证明口服此药的水提物对慢性粒细胞型 白血病有效 , 长期服用无严重毒
(上接 6 页 )
结 语
本文报导了用耳垂全血测定总补体含量的简易技术措施 , 并确定这一试验须在低温 ( 4
~ 1 0
O c ) 下进行的必要性 。 本法虽要求简单 , 可靠和可重复 , 但必须观察其动态变化才比较
有参考价值 。
在 58 名输血员全血中测定的总补体正常值为 10 7 . 7 8 士 2 9 . 3 C H 。 。单位 /毫 升 。 在 10 6名 健
康医学生全血中测定的总 补体正常值为 92 . 23 士 1 3 。 7 8 c H 。 。单位 /毫升 。
参 考 文 献
1
.
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9 9 : 5 8 4 , 1 9 5 8
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, 余贺主编 : 医学微生物学 人民出版社 北京 P 。 13 7 , 1 9 6 0
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. 南京医学院中心实验室细菌组 : _正常人 2 50 例 血清补体效价滴定一一 50 %溶血 法 滴
之补体的方法及结果 (单行木 )
性 。 ` “ ’贵州省思 南 县医院也曾用此 药治 “ 慢粒 ” 1 例 , 取得完全缓解 。 今 此外 , · 湖南 湘西
土族苗族 自治州医院曾用此药治疗急性粒细胞型 白血病 8 例 、 亚急性粒细胞型白血病 1 例 、
急性淋巴细胞型白血病 3 例 、 急性单核细胞型 白血病 1例 , 其中 9 例有效 。 ( 5 ,由 此 可 见 ,
漆姑草可能是一种低毒高效的广谱抗癌中草药 , 且 药源丰富 , 在临床及基础理论方面都值得
进一步深入研究 。
本文研究的主要 目的是通过瘤株筛选试验确定漆姑草的抗癌有效成分 , 并对漆姑草黄酮
试注射液进行临床前药理研究 .
实 验 材 料
所用漆姑草系购自贵阳中药材公司 , 均经鉴定 。 将此药于 6 0 “ c干燥箱 中烘干后按下列流
程提取黄酮贰 、 挥 发油及皂试备用 。
黄酮贰 (粗制品 ) 及挥发油的提取流程 : ` “ ’取漆姑草 50 0克 , 用水浸湿 , 进行水蒸汽蒸
馏 , 得馏出液 , 于馏出液中加入食盐约 5 一 7 % , 用乙酸乙酚萃取 , 合并乙酸乙醋萃取液 ,
回收溶剂 , 得淡黄色的具有强烈气味的油状物 (挥发油 ) 。 蒸去挥发油后的水煎液 , 滤去药
渣 , 滤液减压浓缩至原体积 的 1 / 20 左右 , 加入 3 倍量的95 %乙醇 , 回流 ( 7 0 “ c ) 30 分 钟 ,
放置过夜 , 过滤 , 滤液浓缩 ( p H S 一 6 ) , 用 乙醚萃取 3 次 , 取萃取后 的 水 溶 液 用 5 %
协O H溶液调至 p H g 一 1 0 , 用 e H 0 13 萃取 3 次 , 取碱水层用 5 % H C I溶液调至 p H Z一 3 , 放
置冰箱中过夜 , 过滤 , 滤液用 5 % N a o H溶液调至 P H 6 一 7 , 用乙酸乙酝萃取 , 取萃取后的
水溶液浓缩成流浸膏 , 用 9 5% 乙醇提取 , 回收乙醇 , 放置后析出黄绿 色 沉 淀 ( 黄 酮 试 粗
品 ) 。
皂贰 (粗品 ) 的提取流程 : 取漆姑草 5 0 克 , 加三倍量 9 5% 乙醇 , 水浴上加热回流提取三
次 , 每次 2 一 3 小时 , 合并三次提取液 , 减压回收乙醇 , 浓缩成粘稠物 , 加沸水溶解 , 趁热
滤去水中不溶物 , 滤液浓缩放冷 , 用乙醚抽提三次 , 将水溶液合并 , 用氨水调至 p H g 一 10 ,
用氯仿抽提三次 , 合并碱水层 , 用盐酸调至 p H 4 一 5 , 再用正丁醇提取三次 , 合 并止 丁醇
液 , 减压回收正了醇至原液体积 1 / 4左右 , 放置冷却 , 加入 2 一 3 倍量乙醚使之沉淀 , 放置
过夜 , 过滤 、 沉淀 用少量乙醚洗 2 一 3 次 , 干燥 , 磨粉备用 .
实 验 方 法 与 结 果
一 、 体内抗癌作用
按 《全国抗癌药筛选规程 》 对漆姑草水提物有效的瘤株一 u ; ` (J/ 、 鼠宫颈癌 “ ) 及 S : 。 。
(小鼠肉瘤 : 。 。 ) 进行体内筛选 。 接种时 , 在无菌情况下取无坏死或液化的肿瘤组织 , 按 1 :
3 加入无菌生理盐水 , 用组织匀浆器制成癌细胞悬液 , 于右前肢腋下皮下接种 0 . 2毫升 /鼠 ,
接种后次日随机分组 (每组小鼠的平均体重相差不超过 1 克 ) , 并开始给药 , 药液容量 : 0 . 2
毫升 /20 克体重 , 腹腔注射 , 每天一次 。 对照组则给予等量生理盐水 。 疗效指标 : 在停 药 后
次日处死动物 , 剥离肿瘤称重 , 并按下列公式计算 “ 肿瘤抑制率 ” :
肿瘤抑制率 = 对照组瘤重一给药组瘤讯对照组瘤重
x 1 0 0%
如肿瘤抑制率 > 30 % , 连续 2 一 3 次试验疗效稳定 , 并经统计学处理有显著差异者 , 则评定
此药有效 。
结果 : 对漆姑草的主要化学成分 : `“ ’黄酮贰 、 皂贰及挥发油进行了体内筛选试 验 , 证
明只有漆姑草黄酮试对 u 、 4有显著 的体内抗癌作用 (见表 ) 。
表 漆姑草黄酮试 、 皂贰及挥发油的抗癌作用
给 药
方 案
( m g / k g 又 次数 )
动 物 数
开
给药
/
结
给药
/
株 对照组对照
开 始 结 束 给 对给药组给药组 药 照
/ / 组 组对照组 对照组
2 4
。
3 2 6
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3 0
。
4 8 1
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二 、 临床前毒性试验
(一 ) 急性毒性试验
1
、 小鼠灌胃给药法 : 取 18 一 2 克的雄性小白鼠 50 只 , 用漆姑草黄酮贰注射液灌胃 , 药
液容量 : 0 . 4毫升 / l d克 , 记录 72 小时内的死亡率 , 按 B ur n一 K ar b er 氏法计算其 L D 。 。 ( 半 数
致死量 ) 为 30 5 士 2 1、 l m s/ K g (室温 : 1 0 O c ) 。 死前小鼠都出现中枢抑制症状 (活动性减低 、
闭眼及全身骨骼肌松弛等 ) , 最后因呼吸抑制致死 。
2
、 小鼠腹腔给药法 : 取 18 一 2 克小白鼠 90 只 (雌雄兼有 ) , 用漆姑草黄酮贰注射液腹
腔注射 , 药液容量 : 0 . 1毫升八。克 , 记录72 小时内的死亡率 , 按 B ur n 一 K a r b er 氏 法 计 算 其
L n 。 。为 2 9 . 9 士 5 . 4m g / K g (室温 : 1了“ c ) 。 死前症状同灌胃法 。
3
、 麻醉狗试验 : 取 13 一 17 公斤狗 4 只 (雌雄各半 ) , 腹腔注射戊巴比妥钠 ( 30 毫克 /
公斤 ) 麻醉后 , 由颈动脉记录血压 , 股静脉给药 , 并观察呼吸次数 , 静注 2 %漆姑草黄酮试
注射液 0 . 04 毫升 /公斤 (0 . 83 毫克 /公斤 ) , 对血压与呼吸无明显影响 。 再静注 2 % 漆姑草黄
酮试注射液 0 . 4毫升 /公 斤 (8 . 3毫克 /公斤 ) , 4 只狗 的血压立即降至原来的70 % , 30 分钟后
继续降至原来的60 % , 以后 90 分钟内血压保持在此水平 。 呼吸次数在给药 30 分钟 后 加 快 l
倍 , 60 分钟后加快 5 倍 , 以后即稳定在此水平 .
(二 ) 狗 的亚急性毒 性试验 : 给药组 3 只狗 (雄 2 雌 1 ) , 每天肌肉注射 0 . 3 %漆姑草
黄酮试注射液 0 . 25 毫升 /公斤 (0 . 83 毫克 /公斤 ) , 连续 1 天 , 对照组 2 只狗 (雄 1 雌 1 ) 肌
肉注射等量生理盐水 , 体重范围 : 13 一 18 公斤 。 给药前及停药后检查下列指标 : 注射局部组
织刺激性 、 食量 、 体重 、 大小便 、 红细胞总数 、 白细胞总数及分类 、 尿常规 、 肝肾功能及外
表反应 , 于开始给药一周后称体重 、 调整药量 , 并于停 药一周后再称体重 , 观察体重及食量
的恢复情况 。
结果 :给药组动物于开始给药后第 9 天食量逐渐减少 , 于停药后体重降低 l 一 2 公斤 ,
停 药一周后食量及体重恢复 。 其余指标在给药后均无明显改变 。
讨 论
漆姑草是一种低毒高效的广谱抗癌中草药 , 其水提物经临床试验初步证明对慢性粒细胞
型白血病及多种急性白血病有效 , ( “ 一 ” )但由于其水提物的体积较大 , 病人口服十 分 不 便 ,
因而妨碍了其推广使用 . 本文针对 漆姑草的主要化学成分进行了体内抗癌筛选试验 , 确定了
其抗癌有效成分是黄酮贰 , 并制成了注射剂供临床试用 。
木文通过狗的急性及亚急性毒 性试验确定 了漆姑草黄酮贰对狗的最大耐受量 (0 . 83 毫克
/公斤 /日 ) , 此量为小白鼠最大耐受量 (1 O毫克 /公斤 /日 ) 的 1 / 1 2 , 为小白鼠L D 。 。 (腹腔
注射 ) 白勺1 / J 6 。 临床试验可采用狗最大耐受量灼 1 / 10 , 即 。 . 2% 2 毫 升 /成 人 / 日 (0 . 0 8毫
克 /公斤 /日 ) , 此量相当于小白鼠最大耐受量的 12 5倍 , 说明此一剂量是安 全 的 (一 般 认
为 , 按体重计算 , 小鼠最大耐受 量相当于人用剂量 1 0 倍以 上 , 则较安全 ,可供临床应用 7 ) 。
由于漆姑草水提物通过临床试验没有发现严重的毒性反应 , 因此 , 在应用上述剂量一段时期
后 , 如病人没有 出现明显的毒性反应 , 则可适当增加剂量 , 以增加疗效 。
结 论
1
、 漆姑草的主要化学成分抗癌筛选试验结果 : 黄酮试 10 毫克 /公斤 又 7 (腹腔 注 射 )
对 u , ; 有显著的抗癌作用 , 重复 2 次试验的抑制率分别为 57 . 9%及 5 3 . 5% (P < 0 . 0 1) , 皂
试功毫克 /公斤 丫 9 (腹嚓注射 ) 对 S : 。 。无抗癌作用 ; 挥发油 0 . 1毫升 /公 斤 x g (腹 腔 注
射 ) 对 S 、 。 。无抗癌作用 。
漆姑草黄酮贰注射液临床前毒 比试验 : 灌胃给药的 L D 。 。 (,J 、 自鼠 ) 为 30 5 士 2 1 . 1毫 克
/公斤 , 腹腔注射 的L D 。 。 (小白鼠 ) 为 29 . 9 士 5 . 4毫克 /公斤 ; 狗急性毒性试验 (静注 ) 0 . 8 3
毫克 /公斤对血压与呼吸无明显影响 , 8 . 3毫克 /公斤能使血压降低 , 呼吸加快 。 狗的亚 急 性
毒性试验证明。 . 83 毫克 /公斤 x 14 (肌肉注射 ) 没有严重的毒 性反应 。
参 考 文 献
1
、 《全国中草药汇编》 编写组 : 全国中草药汇编 (上册 ) , 8舰页 , 人民卫生出 版 社
北京 , 19 7 5 。
2
、 贵阳医学院药理学教研室黄厚聘等 : 漆姑草 .均药理研究 , 中草药通讯 , ( 5 ) 27 一
3 2 , 1 9 7 7
,
3
、 贵阳医学院内科学教研室 : 漆姑草治疗屋性粒细 `{包型白血病近期疗效观察 , 贵阳医
学院白血病资料汇编 , 1 9 7 6 。
4
、 贵州思南县医院 : 漆姑草治疗慢性粒细胞型白血病 1例 , 贵州省肿瘤会议 资料 ,
1 9 7 2
,
6
、 湖南湘西土族苗族 自治州人民医院中西医结合内科 : 漆姑草治疗急性白血病 13 例疗
效观察 , 全国白血病会议资料 , 19 78 ,
6
、 贵阳医学院药学系田成国等 : 抗癌中草 药一漆咕草的成分研究 , 全国药 学 会 议 资
料 , 1 9 7 9 。
7
、 徐叔云等 : 临床药理 2 0讲 , 凌0 5页 , 安徽人民出版社 , 合肥 , 19 7 5 。