全 文 ：井冈山大学学报(自然科学版)

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文章编号：1674-8085(2012)06-0086-03

民族药金耳环多糖的提取和含量测定

*魏学军 1，林先燕 1，夏亚兰 1，刘文兰 1，李 江 2
（1. 黔南民族医学高等专科学校，贵州，都匀 558003；2. 贵阳中医学院，贵州，贵阳 550001）

摘 要：探讨建立金耳环多糖的提取和含量测定方法。采用水提醇沉法从金耳环药材中提取并分离出粗多糖，经
除杂、脱蛋白、脱色及脱脂纯化后，用分光光度法测定多糖含量。金耳环精制多糖得率为 1.579 0%，多糖质量分
数为 99.95% ，RSD 为 0.70%。该方法简单、快速、灵敏度高、重复性好，可用于金耳环多糖的含量测定。
关键词：金耳环；多糖；提取；含量测定
中图分类号：R29 文献标识码：A DOI:10.3969/j.issn.1674-8085.2012.06.019

EXTRACTION AND DETERMINATION OF POLYSACCHARIDES FROM
ASARUM INSIGNE
* WEI Xue-jun1, LIN Xian-yan1, XIA Ya-lan1, LI Wen-lan1, LI Jiang2
(1. Qiannan Medical College for Nationalities, Duyun, Guizhou 558003, China ;
2. Guiyang College of TCM, Guiyang, Guizhou 550001, China)
Abstract: To establish the method for extraction and determination of polysaccharide form Asarum insigne. The
crude polysaccharide was obtained by water extraction and alcohol sink method from A. insigne, after removing
impurity, taking off the protein, decoloring and skimmed purification, its content was determined by
spectrophotometry. The receiving rate of refined polysaccharide from A. insigne is 1. 5790%, its mass fraction is
99. 95% and RSD is 0. 70%.This method is simple, rapid, has high sensitivity and good repeatability. It can be
used for content determination of the polysaccharide in A. insigne.
Key words: asarum insigne; polysaccharide; extraction; content determination

金耳环为马兜铃科植物Asarum insigne Diels金
耳环的干燥全草，主要分布在江西、广东、广西等
地。金耳环具有温经散寒，祛痰止咳，散瘀消肿，
行气止痛的功效，其所含成分包括黄酮类、氨基酸、
糖类和挥发油等[1]。由于疗效显著，采集方便，在
贵州三都水族集聚地被广泛的用于风寒感冒、慢性
支气管炎、风寒痹痛、跌打损伤、细菌性痢疾等症
候的治疗，水药记载名为骂广瓦[2]。其所含多糖类
成分是中草药中重要的活性物质，对止咳祛痰、抗
衰老、抗病毒、抗肿瘤、降血糖和降血脂等有显
著疗效[3-4]，目前有关金耳环多糖的研究未见文献
报道。课题组同期实验研究发现金耳环具有止咳
祛痰[5]、止血的药理作用，后续实验验证其所含
多糖类成分是产生上述作用的重要活性部位（待发
表），故对金耳环多糖的提取及含量测定进行研究，
以期为建立金耳环的质量控制标准和开发应用提
供相关理论依据。
1 仪器与试药
Cary 100 型双光束紫外可见分光光度计（安捷
伦科技有限公司）； Mettler AE 240 电子天平（瑞
士）；DW-60W156 超低温冰箱（青岛海尔）；DHG -
第 33 卷第 6 期 Vol.33 No.6 井冈山大学学报(自然科学版)
2012 年 11 月 Nov. 2012 Journal of Jinggangshan University (Natural Science) 86

收稿日期：2012-05-12；修改日期：2012-08-28
基金项目：贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目(黔省专合字 2010156 号)；贵州省黔南州科技局中药现代化专项资金项目(黔南科合社字 201018 号)
作者简介：*魏学军(1972-），男，四川成都人，副教授，主要从事中药质量控制研究(E-mail：qndywxj@163.com);
林先燕(1972-），女，贵州平塘人，副教授，主要从事天然植物预防保健研究(E-mail：lxyyz2000517@163.com);
夏亚兰(1980-），女，贵州遵义人，讲师，主要从事天然药物的药效学研究(E-mail：xiayalan10@163.com);
刘文兰(1990-），女，湖南邵阳人，硕士生，主要从事中药质量控制研究(E-mail：270066307@qq.com);
李 江(1973-），男，四川江津人，教授，博士，硕士生导师，主要从事天然药物应用于开发研究(E-mail：lj2005zy@163.com).
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9240A 真空干燥箱（上海金山）；2.0R 大容量低速
离心机（德国 Heraeus）。葡萄糖标准品（中国食品
药品检定所，批号：110833–200904），其他试剂均
为分析纯。金耳环药材采于贵州三都水族自治县境
内，经贵阳中医学院李江教授鉴定为正品。
2 方法与结果
2.1 金耳环多糖的提取与精制
取 60 ℃恒温干燥的金耳环 10 g，充分浸渍，
回流提取 2 次，每次 l h。合并滤液并浓缩，加入无
水乙醇使含醇量至 80%，静置 24 h。倾去上清液，
沉淀用去离子水溶解，反复冻融除杂至无沉淀，
Sevage 法除蛋白质至无游离蛋白 (多糖溶液在
280 nm 处无紫外吸收)，H2O2(15%)脱色。过滤，
加入无水乙醇使含醇量至 80%，静置 24 h，倾去上
清液，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚多次
洗涤，除去其脂溶性成分。于 60 ℃减压干燥，称
重得精制多糖 0.157 9 g，得率为 1.579 %[6-7]。
2.2 金耳环多糖的鉴别
取金耳环多糖 2 mg，用蒸馏水 10 mL 溶解后精
密吸取 1 mL 至具塞试管中，加入 1mL α-萘酚溶液，
混匀后沿试管壁加入浓硫酸溶液 1 mL，静置观察。
实验结果表明，液面交界处有金耳环多糖棕红色环
状阳性反应。
2.3 金耳环多糖样品溶液的制备
精密称取金耳环精制多糖 20 mg，定容于
100 mL 量瓶中，再吸取上述溶液 1.0 mL 定容至
10 mL，摇匀得样品溶液。
2.4 标准曲线的绘制
2.4.1 葡萄糖标准溶液的制备
精密称取 105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品
10 mg，置于 100 mL 量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，
配制成 100 μg·mL－1 的标准葡萄糖溶液备用。
2.4.2 最大吸收波长的确定
精密吸取配制的 20 μg·mL－1 标准葡萄糖溶液
和 40 μg·mL－1 精制金耳环多糖溶液各 1.0 mL，分
别加入 5%苯酚溶液 1.0 mL，再迅速沿管壁加
入 5.0 mL 浓硫酸，摇匀，静置 5 min，置沸水浴中
加热 15 min，再置冷水浴中 10 min，补充失去的水
分至刻度。另以 1.0 mL 蒸馏水同法操作作为空白对
照，在 450~530 nm 扫描，确定最大吸收波长。实
验结果表明，葡萄糖和金耳环多糖均在 496 nm 处
有最大吸收。
2.4.3 标准曲线的绘制
精密吸取“2.4.1”项下标准葡萄糖溶液 0.1，
0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 分别加于 20 mL 的具塞
试管中，并分别加蒸馏水补至 2.0 mL，配制成 5，
10，20，30，40，50 μg·mL－1 的葡萄糖标准系列溶
液，另取 2. 0 mL 蒸馏水作为空白对照。用“2.4.2”
方法显色后，在最大吸收波长 496 nm 处测定吸光
度，以吸光度(A)为纵坐标，以葡萄糖标准溶液质量
浓度(C，μg·mL－1) 为横坐标，绘制标准曲线，进行
线性回归。得标准曲线的回归方程: A = 0.013 6 C－
0.065 9，r = 0.999 4。
2.5 换算因子的测定
精密称取 60 ℃干燥恒重的精制多糖 20 mg，置
于 100 mL 量瓶中定容。再吸取上述溶液 1.0 mL 定
容至 10 mL。吸取 2.0 mL 上述溶液按“2.4.2”方法显
色后，在 496 nm 处测定吸光度，按下式计算换算
因子：
f = W/( C × D )
式中: W 为多糖质量( mg ) ，C 为多糖液中葡萄糖
的浓度(μg.mL－1) ，D 为多糖的稀释倍数。测得换
算因子 f = 1.337 3，RSD = 1.32% ( n = 3)。
2.6 稳定性试验
精密吸取金耳环多糖样品溶液 1.0 mL，按测定
标准曲线的方法，分别在 0.5，1，2，4，8，16，
24 h 处测定吸光度，实验结果表明，在 24 h 时吸
光度开始下降，说明多糖溶液在 16 h 以内比较稳
定，RSD 为 1.87%(前 5 次)。
2.7 精密度试验
精密吸取金耳环多糖样品溶液 1.0 mL，按测定
标准曲线的方法，连续测定 6 次，其吸光度平均值
0.136 1，RSD 为 1.23%，表明此方法精密度良好。
2.8 重复性试验
精密吸取金耳环多糖样品溶液 1.0 mL 6 份，按
测定标准曲线的方法测定吸光度，RSD 为 1.64%，
重复性良好。
2.9 回收率试验
精密吸取金耳环多糖样品溶液 1.0 mL 共 6 份，
置于 20 mL 试管中，分别精密加入 10 μg.mL－1 葡萄
糖标准溶液 1.0 mL，按测定标准曲线的方法操作，
计算回收率。结果平均回收率为 99.96 %，RSD 为
0.42%（n = 6）。
2.10 样品中多糖含量的测定
精密吸取金耳环多糖样品溶液 1.0 mL，按标准
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曲线制备的方法测其吸光度值，代入回归方程计算
葡萄糖质量浓度(μg·mL－1) ，按下式计算多糖质量
分数:
多糖质量分数% = C × D × f /W × 100%
其中，C 为样品液的葡萄糖质量浓度(μg·mL－1)，D
为样品的稀释倍数，f 为换算因子，W 为样品的质
量(mg)。测定结果见表 1。
表 1 多糖质量分数（n = 6）
Table 1 The quality score of polysaccharides
实验号 A 值 多糖/% 平均含量/% RSD/%
1 0.139 8 101.13
2 0.138 3 100.40
3 0.137 2 99.86 99.95 0.70
4 0.136 6 99.56
5 0.136 1 99.31
6 0.136 3 99.41
3 讨论
本实验采用水提醇沉法提取金耳环粗多糖，经
分离纯化后得精制多糖；然后采用分光光度法在实
验确定的最大吸收波长 496 nm 处测定多糖含量并
计算多糖质量分数。由实验结果可知精制多糖得率
为 1.579 0%，多糖质量分数为 99.95%，RSD 为
0.70%，说明按上述提取方法所得的多糖纯度较高。
该方法简便可靠，灵敏度高，稳定性和重复性好，
可用于金耳环多糖的提取和含量测定，亦可为金耳
环多糖的其他药效学研究提供理想的实验用药。
课题组在预实验研究中发现，纯化工艺是影响
多糖得率的重要因素之一。冻融除杂和 Sevage 法
除蛋白质次数超过 3 次以后，随着次数的增加，多
糖得率总体呈下降趋势，多糖质量分数提升不明
显，故本实验中冻融除杂和 Sevage 法除蛋白质次
数均固定为 3 次，这与张晓莉[7]等研究结果提出的
10 次以上具有明显的差异。对其他影响因素，如提
取工艺等研究，将继续探讨。
本实验是以贵州三都水族自治县境内所采金
耳环为样本，考虑到不同地区气候、海拔、土壤、
植被状况以及采收时间的不同，含量测定结果是否
适用于其他地区，有待进一步研究。
参考文献：
[1] 中华本草编委会.中华本草(第8卷)[M]. 上海:上海科学
技术出版社,1999: 504 - 505．
[2] 司有奇,陆龙辉.中国水族医药宝典[M].贵阳：贵州民族
出版社，2007:318.
[3] 田庚元,冯宇澄,林颍.植物多糖的研究进展[J].中国中药
杂志,1995,20(7):441.
[4] 申利红,王建森,李雅,等.植物多糖的研究及应用进展[J].
中国农学通报，2011，27(2):349 - 352.
[5] 夏亚兰,魏学军,林先燕,等.水药骂广瓦提取液对小鼠止
咳祛痰作用的实验研究[J].重庆医学，2012，41(10)：
966 - 967.
[6] 宋晶，吴启南.芡实多糖的提取及含量测定[J].辽宁中
医,2010,37(7):1331 - 1333.
[7] 张晓莉,李玉婷,王亚贤,等.红花多糖的提取与含量测
定[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(7):19 - 21.