全 文 ：Effects of Cyclovirobuxine D-one methanol crystals on inward rectifier current
in isolated rat ventricular myocytes
Yu Haibin，Liu Hongjun，Shen Junling，Zhu Mingjun，Cui Lin，Liu Weihong
(The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM，Zhengzhou 450000)
Objective:To investigate the effects of solution of Cyclovirobuxine D one menthanol crystals on inward rectifier current(IK1)in isolated
rat ventricular myocytes． Methods:The isolated ventricular cells were enzymatically obtained from the healthy rat hearts，and whole cell patch
-clamp method was used to record the current curves of IK1 in control group，drug group and washing-out group respectively． Ｒesults:In rat
myocardial cells，solution of Cyclovirobuxine D-one menthanol crystals at the concentration of 4 × 10-4 g /L and 4 × 10-3 g /L reduced the peak
values and the steady-state values at holding potential -100 mV on the inward current curves of IK1 significantly compared with prior to admin-
istration． At the same time，the peak values on the outward current curves of IK1 were inhibited obviously． After washing-out with extracellu-
lar fluid，the peak values and the steady-state values at holding potential -100mV on the inward current curves of IK1 rised in comparison with
the state of after administration． The peak values on the outward current curves of IK1 increased clearly． Conclusion:solution of Cycloviro-
buxine D-one menthanol crystals can reversibly inhibit the inward current and outward current of IK1，which might explain its effects on APD
prolongation and antiarrhythmic phenomenon．
Key words cyclovirobuxine D-one menthanol crystals(环维黄杨星 D －甲醇结晶体) ;IK1;patch clamp;APD;arrhythmia
类叶升麻苷抗 H2O2 诱导的 PC12 细胞氧化损伤的保护作用
*
彭晓明1，高 莉1，甘 萍2，霍仕霞1，闫 明1＊＊
(1新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所·新疆维吾尔医方剂学实验室，乌鲁木齐 830049;
2石河子大学药学院，石河子 832003)
摘 要 目的:类叶升麻苷对 H2O2 诱导的 PC12 细胞损伤的影响。方法:以 300μmol /L的 H2O2 处理 PC12 细胞，建立氧化损
伤模型，并以 5、10、20、40、60、80、100μg /ml的类叶升麻苷拮抗其作用。通过倒置显微镜观察细胞形态，采用 MTT 比色法检测细胞
存活率，酶标法试剂盒测定 LDH渗漏率，TBA法试剂盒测定胞内胞外 MDA含量，WST法试剂盒测定胞内胞外 SOD活性。结果:类
叶升麻苷浓度从 10μg /ml起，即可显著改善 PC12 细胞形态，提高细胞的存活率，减少细胞 LDH的渗漏，抑制胞内和胞外 MDA的生
成，提高胞内和胞外 SOD酶活性，且随着给药剂量的增加，其对损伤细胞的改善作用也愈强。结论:类叶升麻苷对 H2O2 诱导的
PC12 细胞损伤具有显著保护作用，其机制可能与抗氧化作用有关。
关键词 类叶升麻苷;H2O2;PC12;氧化损伤
大脑由于消耗大量氧气，易被氧自由基攻击的多聚不饱和
脂肪酸水平较高，含有较低水平的抗氧化剂等原因成为人体内
最容易遭受氧化应激损伤的器官。近年来研究表明［1］氧化应
激和 β淀粉样蛋白与 AD密切相关。
肉苁蓉具有提高 SOD活性，清除体内自由基，延缓衰老，促
进记忆，改善化学药物所造成的记忆损害作用［2］。其有效成分
为苯乙醇苷类化合物(phenylethanoid glycosides，PhGs)。本实验
室从肉苁蓉中分离得到含量 ＞ 90%的苯乙醇苷类成分———类叶
升麻苷(acteoside，AS)。既往研究表明［3，4］，AS 对 D-半乳糖诱
导小鼠产生 AD病样的动物模型以及东莨菪碱致小鼠学习记忆
障碍均具有明显改善作用。因此本实验用 H2O2 诱导 PC12 细
胞建立氧化损伤模型，研究类叶升麻苷对 PC12 细胞的保护作
用，为该药从氧化损伤靶向对 AD的应用治疗奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 类叶升麻苷，由新疆维吾尔医药研究所基础
医学研究室提供，其化学结构经核磁共振波谱法和质谱法确认，
高效液相色谱(HPLC)面积归一化法鉴定其纯度 ＞ 90%。
1． 2 细胞株 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 PC12 细胞系(高分
化)购自于中国科学院细胞库。
1． 3 试剂 ＲPMI-1640 培养基为 GIBCO 产品，胎牛血清为
Hyclone产品。氨苄青霉素钠和硫酸链霉素购自 Amersco 公司。
丙酮酸钠购自天津市光复精细化工研究所。H2O2、MTT 为 Sig-
ma产品，乳酸脱氢酶(LDH)测试盒(批号 20121127)、SOD超氧
化物歧化酶测定试剂盒(批号 20130116)、MDA 微量丙二醛测
53中药药理与临床 2013;29(3)
* 新疆维吾尔自治区公益性科研院所基金项目( KY2012114) ＊＊通讯作者
定试剂盒(批号 20130108)、BCA 蛋白含量测定试剂盒(批号
20130110)均购自南京建成生物工程研究所。
1． 4 仪器 超净工作台(苏净，YJ-875) ，倒置显微镜(上海光
学六厂，37XB) ，CO2 培养箱(Sanyo，MCO-18AIC) ，酶标仪(Ther-
moFisher，Multiskan Go 1510)。
1． 5 方法 将 PC12 细胞以 5 × 105 个 /ml接种于含 10%胎牛
血清、0． 11g /L 丙酮酸钠、2． 5g /L 葡萄糖、1． 5g /L 的 NaHCO3、
100U /ml青霉素和 100U /ml 链霉素的 ＲPMI-1640 培养基中，置
于 37℃，体积分数 5%的 CO2 培养箱中培养，每隔 3 天换一次
液。当培养瓶中 PC12 细胞融合率达到 80%左右时，用含 10%
胎牛血清(FBS)的 ＲPMI 1640 培养基吹打下来，调节细胞密度
至 5 × 104 个 /ml，以 100μl /孔铺至 96 孔培养板。培养 48h后分
组给药，分别设定:正常对照组、模型组、阳性药组、预防给药组、
治疗给药组。模型组用 300μM/L 的 H2O2 诱导;阳性药为 4．
3μg /ml(10μM/L)的 Vitmin E溶液;预防给药组为 300μM/L 的
H2O2 与不同浓度的类叶升麻苷溶液同时加入，治疗给药组为先
加入 300μM/L的 H2O2 诱导 24h后，再加入不同浓度的类叶升
麻苷溶液，其中类叶升麻苷药物浓度为:5、10、20、40、60、80、
100μg /ml。各给药组作用 24h 后，于显微镜下观察细胞形态并
拍照。
1． 5． 1 MTT法测定细胞存活率 细胞接种于 96 孔培养板培
养 48h，经上述方法处理后加入 MTT，继续培养 4h，吸弃培养液，
加入 DMSO 震荡溶解后，于 Multiskan Go 1510 酶标仪测定
490nm处吸光度值。
1． 5． 2 细胞培养上清液中 LDH酶活性的测定 细胞给药处理
后，收集细胞培养上清液，参照南京建成生物工程研究所 LDH
试剂盒说明书测定培养液中 LDH酶活性。
1． 5． 3 PC12 胞内和胞外 MDA含量和 SOD活性测定 将 PC12
细胞接种于 24 孔板，细胞损伤及给药方法同上。收集细胞培养
上清液，用于测定胞外 MDA 含量和 SOD 活性。下层细胞用
PBS洗涤 2 遍，每孔加入 500μl的 PBS，用移液枪反复吹打，转移
至 2ml EP管中。在超声波细胞粉碎机下对 PC12 细胞进行破碎
后，于 10000rpm离心 10min，吸上清测定其总蛋白浓度、胞内
MDA含量和 SOD活性。测定方法参照南京建成生物工程研究
所总蛋白和 MDA、SOD测定试剂盒。
2 结果
2． 1 类叶升麻苷对 H2O2 损伤 PC12 细胞形态的影响 由图 1
所示，正常 PC12 细胞轮廓层次较分明，细胞立体感及折光性较
强，细胞突触明显且较多，细胞数量也较多。而模型对照组的细
胞轮廓层次较差，神经元胞体表面粗糙，且细胞突触减少。给予
类叶升麻苷药物的各剂量组，其相对于模型组而言，PC12 细胞
的立体感、折光性增强，细胞突起增多并交织成网状，胞浆内颗
粒物减少，退化死亡的 PC12 细胞明显减少，提示不同浓度类叶
升麻苷对 PC12 都有一定程度保护作用，且保护强度呈现一定
的浓度依赖性。
图 1 类叶升麻苷对 H2O2 诱导 PC12 细胞损伤保护的细胞形态局部图( 200 × )
1:正常组; 2:模型组; 3: VE( 4． 3μg /ml) ; 4: acteoside( 5μg /ml) ; 5: acteoside( 10μg /ml) ; 6: acteoside( 20μg /ml) ; 7: acteoside( 40μg /ml) ; 8: acteoside( 60μg /
ml) ; 9: acteoside( 80μg /ml) ; 10: acteoside( 100μg /ml)
2． 2 类叶升麻苷对 H2O2 损伤 PC12 细胞存活率及 LDH 的影
响 PC12 细胞经 H2O2 诱导 24h 后，细胞存活率显著降低。但
经不同浓度 AS作用后，PC12 细胞的存活率得到显著改善。实
验中 AS最低浓度 5μg /ml即有很强的保护作用，随着给药浓度
的增加，其对 PC12 细胞的存活率的恢复愈明显。AS 在预防实
验中 10μg /ml以及治疗实验中 100μg /ml 时，其细胞存活率可
恢复到正常细胞水平，且有增殖促进趋势。预防实验和治疗实
验中，不同剂量 AS处理后的细胞 LDH 的释放量均比模型组有
所减少，随着给药剂量的递增，其 LDH 释放量的降低程度也增
强。表明类叶升麻苷对 H2O2 诱导的 PC12 细胞膜具有保护作
用，见表 1。
表 1 类叶升麻苷对 H2O2 诱导的 PC12 细胞存活率及 LDH的影响
(珋x ± s，n = 6)
组别
剂量
(μg /ml)
细胞存活率(%)
预防 治疗
LDH(U/L)
预防 治疗
正常组 100 100 61． 37 ± 1． 36 180． 18 ± 18． 09
模型组 77． 31 ± 1． 64 36． 30 ± 0． 77 139． 06 ± 8． 16 278． 68 ± 12． 23
VE 4． 3 125． 28 ± 0． 37＊＊ 232． 02 ± 1． 71＊＊ 82． 37 ± 14． 87＊＊ 182． 28 ± 43． 42＊＊
类叶升麻苷 5 93． 70 ± 0． 76＊＊ 51． 40 ± 0． 57＊＊ 136． 67 ± 3． 73 277． 56 ± 5． 66
类叶升麻苷 10 108． 20 ± 1． 04＊＊ 52． 66 ± 0． 48＊＊ 126． 98 ± 9． 69* 264． 46 ± 37． 52
类叶升麻苷 20 90． 29 ± 1． 11＊＊ 60． 09 ± 0． 27＊＊ 125． 24 ± 6． 19* 243． 06 ± 14． 46*
类叶升麻苷 40 104． 11 ± 0． 92＊＊ 60． 45 ± 0． 31＊＊ 124． 81 ± 7． 66* 228． 17 ± 10． 98＊＊
类叶升麻苷 60 96． 70 ± 0． 96＊＊ 69． 81 ± 0． 23＊＊ 110． 23 ± 12． 18＊＊ 219． 34 ± 3． 60＊＊
类叶升麻苷 80 110． 82 ± 0． 92＊＊ 76． 83 ± 0． 58＊＊ 115． 89 ± 12． 84＊＊ 217． 66 ± 3． 13＊＊
类叶升麻苷 100 110． 19 ± 1． 10＊＊ 193． 70 ± 0． 91＊＊ 119． 15 ± 6． 29＊＊ 213． 34 ± 8． 16＊＊
与模型组比较 * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01(下同)
63 中药药理与临床 2013;29(3)
2． 3 类叶升麻苷对 H2O2 损伤 PC12 细胞 MDA、SOD的影响
PC12 细胞经 H2O2 诱导损伤后，胞内和胞外的 MDA 含量均较
之正常细胞有所升高，SOD 活性降低。不同浓度 AS 作用于损
伤细胞后，其胞内胞外 MDA 含量均随 AS 浓度的增大而降低，
而 SOD活性随 AS浓度的增大而升高，且尤以胞外 SOD 活性升
高幅度最为显著。表 2 结果显示，氧化损伤细胞的 MDA含量和
SOD活性的变化与 AS呈现出一定的浓度依赖性，见表 2。
表 2 类叶升麻苷对 H2O2 诱导的 PC12 细胞 MDA、SOD的影响(珋x ± s，n = 6)
组别
剂量
(μg /ml)
MDA(nmol /ml)
预防
胞内 胞外
治疗
胞内 胞外
SOD(U/ml)
预防
胞内 胞外
治疗
胞内 胞外
正常组 0． 39 ± 0． 58 1． 17 ± 0． 17 0． 68 ± 0． 04 1． 36 ± 0． 66 16． 56 ± 0． 24 15． 79 ± 0． 37 21． 36 ± 3． 29 18． 24 ± 0． 33
模型组 1． 33 ± 0． 32 2． 23 ± 0． 81 1． 09 ± 0． 29 2． 47 ± 0． 35 6． 95 ± 0． 32 2． 17 ± 0． 08 11． 41 ± 0． 55 3． 36 ± 0． 26
VE 4． 3 0． 61 ± 0． 16＊＊ 1． 62 ± 0． 33＊＊ 0． 69 ± 0． 07＊＊ 1． 58 ± 0． 61＊＊ 13． 18 ± 0． 25＊＊ 14． 56 ± 0． 77＊＊ 19． 63 ± 3． 28＊＊ 16． 50 ± 0． 94＊＊
类叶升麻苷 5 0． 98 ± 0． 01* 2． 09 ± 0． 47* 1． 02 ± 0． 04* 2． 14 ± 0． 56* 7． 15 ± 0． 83 2． 41 ± 0． 88 15． 11 ± 2． 68* 3． 74 ± 0． 16*
类叶升麻苷 10 0． 91 ± 0． 59* 1． 87 ± 0． 28* 0． 98 ± 0． 32 2． 01 ± 0． 28* 9． 36 ± 0． 38＊＊ 3． 11 ± 0． 15* 15． 23 ± 3． 81* 5． 36 ± 0． 61＊＊
类叶升麻苷 20 0． 78 ± 0． 05＊＊ 1． 86 ± 0． 42* 0． 98 ± 0． 01* 1． 91 ± 0． 82* 10． 67 ± 0． 59＊＊ 3． 95 ± 0． 21* 17． 49 ± 1． 20＊＊ 5． 07 ± 0． 26＊＊
类叶升麻苷 40 0． 65 ± 0． 56＊＊ 1． 86 ± 0． 26＊＊ 0． 89 ± 0． 09＊＊ 1． 76 ± 0． 37＊＊ 11． 05 ± 0． 21＊＊ 4． 67 ± 0． 49＊＊ 18． 31 ± 2． 54＊＊ 6． 11 ± 0． 08＊＊
类叶升麻苷 60 0． 62 ± 0． 06＊＊ 1． 84 ± 0． 45＊＊ 0． 83 ± 0． 15＊＊ 1． 86 ± 0． 53＊＊ 11． 64 ± 0． 82＊＊ 7． 08 ± 0． 14＊＊ 16． 66 ± 2． 32＊＊ 7． 14 ± 0． 05＊＊
类叶升麻苷 80 0． 62 ± 0． 02＊＊ 1． 82 ± 0． 39＊＊ 0． 76 ± 0． 18＊＊ 1． 61 ± 0． 57＊＊ 11． 40 ± 0． 59＊＊ 9． 75 ± 0． 37＊＊ 18． 19 ± 2． 66＊＊ 11． 88 ± 0． 35＊＊
类叶升麻苷 100 0． 61 ± 0． 17＊＊ 1． 67 ± 0． 21＊＊ 0． 72 ± 0． 08＊＊ 1． 59 ± 0． 31＊＊ 13． 31 ± 0． 22＊＊ 12． 67 ± 0． 88＊＊ 18． 72 ± 0． 53＊＊ 13． 92 ± 0． 31＊＊
3 讨论
氧化应激目前在各种急性和慢性神经退化性疾病中的作
用是近年来研究的热点之一，其被认为在包括 AD 在内的许多
疾病中发挥重要作用。研究显示，阿尔茨海默病的病理组织中
的 H2O2 与氧化应激、Aβ 神经毒性均有关系。Aβ 生成 H2O2，
继而 H2O2 和铁、铜相互作用生成高度毒性的 ＲOS，这可能是阿
尔茨海默病与氧化应激相关的机制［5］。氧化应激是由于体内
的氧化还原平衡失调，产生了过多的活性氧物质(ＲOS) ，而使机
体面临潜在的损伤。H2O2 是一种较强的氧化剂，极易进入细胞
内，通过 Haber-Weiss或 Fenton反应，形成高活性的自由基。这
些自由基几乎可与细胞内的任何成分发生反应，造成细胞损
伤。PC12 细胞是从大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤中分离得到的细胞
系，分化的 PC12 细胞在形态和功能上具有典型的神经细胞特
征，被广泛应用于研究神经系统疾病如 AD 和 PD。因此，本研
究以体外培养 PC12 细胞系(高分化)为实验对象，以 300μM/L
的 H2O2 诱导细胞产生氧化应激状态，观察类叶升麻苷对 PC12
细胞氧化损伤的保护作用。
LDH(乳酸脱氢酶)是细胞内的标志酶，通常情况下细胞内
漏出量很少。但细胞受损后，由于细胞膜通透性发生改变，LDH
由细胞渗漏至培养液中的量明显增多，因此通过细胞培养液
LDH渗漏率的测定可客观的衡量细胞的受损程度，若加药物干
预，又可较实际的评价药物的治疗作用。本实验表明，预防给药
组中类叶升麻苷浓度为 10μg /ml和治疗给药组浓度为 20μg /ml
时，其对 PC12 细胞的 LDH渗漏量即有显著的抑制作用，且随着
药物浓度的上升，LDH的渗漏量也逐渐降低，这与 MTT 法测定
的细胞存活率以及光镜下观察的细胞形态的改变趋势是一致
的。实验结果提示，类叶升麻苷对 PC12 细胞的胞膜具有恢复
作用。
近年研究表明:阿尔茨海默病患者脑组织中的 Aβ 可通过
与神经细胞膜的相互作用引起细胞内活性氧的产生增多而引
起膜蛋白的氧化，脂质过氧化以及 DNA、ＲNA的氧化，并伴有一
些氧化损伤的特异性标志物的出现，最终引起神经元的变性死
亡［6］。MDA和 SOD是反映自由基损伤的指标，自由基对神经
细胞的损害作用是引起生物膜上 PU-FA 发生脂质过氧化反应，
生成大量的髓过氧化物酶(MPO) ，MPO 的代谢产物 MDA 可使
磷脂、蛋白质发生交链、变性，同时其含量变化间接反映了组织
中氧自由基含量的变化。SOD 是主要存在于细胞浆和线粒体
中的一种金属蛋白酶，可催化歧化反应，清除引发自由基连锁反
应的起始基-超氧阴离子，通过一系列化学反应缓冲剂清除自由
基而具有抗自由基损伤作用，是机体内抗氧化系统的重要组成
部分，其活性高低可间接反映组织自由基的含量和脂质过氧化
程度。因此，测定 MDA、SOD 活性不仅可反映神经细胞损伤的
原因，而且还可以判断细胞损伤的程度。上述实验数据表明，类
叶升麻苷浓度从 10 mg /L 起可显著降低 PC12 细胞胞内胞外
MDA含量，升高胞内胞外 SOD 酶活性，从而减轻 H2O2 引起的
细胞氧化损伤。
综上所述，类叶升麻苷能够显著提高 H2O2 损伤后的 PC12
细胞存活率，改善细胞形态变化，抑制 LDH 的渗漏量，降低
MDA的合成以及上调 SOD 的酶活性。实验结果证明，类叶升
麻苷对 H2O2 诱导的 PC12 细胞损伤具有保护作用，其保护机制
可能与抗氧化有关。
参考文献
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＇s病细胞模型作用的研究 ．中国老年学杂志，2007，27(24)∶ 2378 ～ 2381
73中药药理与临床 2013;29(3)
Study on protective effects of acteoside on oxidative damage of PC12 induced by H2O2
Peng Xiaoming1，Gao Li1，Gan Ping2，Huo Shixia1，Yan Ming1
(1 Institute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Prescription Laboratory of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Urumqi 830049;
2 Pharmaceutical college of Shihezi University，Shihezi 832003)
Objective:To investigate the effect of acteoside on Oxidative damage of PC12 induced by H2O2 ． Methods:Establishment of the PC12
oxidative damage cellular model through 300μmol /L H2O2 treatment． And then antagonize the effect of H2O2 by different concentration(5，
10，20，40，60，80，100μg /ml)acteoside． Observed the cell morphology by inverted microscope，determinated the cell survival with MTT，
measured the LDH release by enzyme label kit，analysis the MDA contents and SOD activity by TBA kit and WST kit． Ｒesults:The concen-
tration of acteoside starting from 10μg /ml could significantly improve the cell morphology and the cell survival，decreased the cell LDH re-
lease and it is not only could inhibit the production of intracellular and extracellular MDA，but also could increase the activety of intracellular
and extracellular SOD． Moreover，the improving effect show stronger with the drug concentration increased． Conclusion:The acteoside has
significant protective effect on the PC12 oxidative damage cellular model induced by H2O2，and it＇s protective mechanism probably relate to
the antioxidant．
Key words acteoside(类叶升麻苷) ;H2O2;PC12;oxidative damage
天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态及 PI3K表达的影响*
韩冰冰，李 洁
(山东中医药大学基础医学院，济南 250355)
摘 要 目的 :研究天花粉蛋白对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态、PI3K mＲNA 及蛋白表达的影响。方法:小鼠接种 B16
细胞复制模型，接种结束后小鼠随机分为天花粉蛋白高、中、低剂量组( 0． 6、0． 4、0． 2 mg /kg) 和空白对照组接受治疗。观察肿瘤一般
状况，CD31 与过碘酸-雪夫双重染色法检测血管生成拟态形态学，ＲT-PCＲ检测 PI3K mＲNA的表达，免疫组织化学检测 PI3K蛋白的
表达。结果:与空白对照组相比，天花粉蛋白高剂量组( 0． 6 mg /kg) 瘤组织体积与重量、VM 密度、PI3K mＲNA 与蛋白的表达均明显
降低。结论:天花粉蛋白能够抑制小鼠黑色素移植瘤的血管生成拟态，推测可能与调控 PI3K的表达有关。
关键词 天花粉蛋白;恶性黑色素瘤;血管生成拟态;PI3K
实体肿瘤的生长和转移有赖于血管生成。血管生成拟态
(vasculogenic mimicry，VM)是一种不依赖内皮细胞的全新的肿
瘤血管生成模式，抑制 VM 将可能成为肿瘤治疗的新靶点。天
花粉蛋白(trichosanthin，TCS)是从中药栝楼中提取的一种碱性
蛋白质，对胎盘滋养层的肿瘤及其它多种肿瘤均具有细胞毒作
用。本实验研究天花粉蛋白对 B16 黑色素瘤 VM、瘤组织 PI3K
mＲNA及蛋白表达的影响，探讨天花粉蛋白能否通过影响 PI3K
的表达而抑制 B16 黑色素瘤的 VM的形成。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 天花粉蛋白注射液，批号 101001，购自上海金
山制药有限公司。
1． 2 动物 C57BL /6 小鼠 40 只，6 ～ 8 周龄，雌雄各半，体重 18
～ 22g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证
编号:SCXK(京)2006-0009;B16 黑色素瘤细胞株，购自武汉博
士德生物工程有限公司。
1． 3 试剂 ＲT-PCＲ 试剂盒，批号:BK1801，Loading Buffer，批
号 CA1601A，均购自宝生物工程(大连)有限公司;PI3K与 β-ac-
tin引物均由济南博尚生物技术有限公司设计合成。PI3K 上游
引物 5- CAAGACGACTTTGTGACCTTCG、下游引物 5-GCTAT-
GAGGCGAG TTGAGATCC，227bp;β-actin 上 游 引 物 5-
GAAATCGTGCGTGACATCAAAG、下游引物 5- TGTAGTTTCAT
GGATGCCACAG，216bp。PI3K抗体，批号 11051101;PV-9000 通
用型二步法检测试剂盒，批号 K112705D，均购自北京中杉金桥
生物技术有限公司;CD31 抗体，批号 27648，购自武汉博士德生
物工程有限公司;过碘酸-雪夫(PAS)染色液，批号 512N046，购
自上海太阳生物技术有限公司。
1． 4 仪器 Mastercyclergra 型 PCＲ 自动系列化分析仪，德国
EPPENDOＲF公司;Biosens 805 型全自动凝胶成像系统，上海山
83 中药药理与临床 2013;29(3)
* 本课题受山东省中医药科技发展计划项目( 2009 － 026) 、山东省自然科学基金( ZＲ2010HQ008) 、山东省高等学校科技计划( JIOLF13) 共同资
助。