全 文 ：　　根据表 1中的数据 ,用计算机拟合出 μ-C方程
式 ,并绘出 μ-C曲线 ,如图 3所示。
根据表 1中的数据 ,建立了 μ-C方程为:
μ=-7.722 65C+0.088 49 , R =0.997 5
由这个公式可以推出当荷叶生物碱液的浓度 C
=0.011 46 mg· mL-1时 , μ=0,即最佳抑菌浓度为
C=0.011 46mg· mL-1
3　结论
荷叶生物碱液对大肠杆菌的代谢具有抑制作
用 ,随药物浓度的增加生长速率常数线性降低 。荷
叶生物碱液对大肠杆菌代谢作用的最佳用药浓度为
0.011 46 mg· mL-1 ,以上结果和数据可以为药物
筛选 、新特效药的合成提供定量的理论依据 。
参考文献
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收稿日期:2007-10-04
通讯作者:郭增军 , Tel:029-82655133;E-mail:guozj@mail.xjtu.edu.
cn
太白乌头提取物抗氧化活性研究
徐　颖 ,郭增军＊
(西安交通大学医学院 ,陕西 西安 710061)
　　摘要:目的　研究太白乌头提取物的抗氧化活性。方法　将太白乌头乙醇提取物采用溶剂萃取法 , 分成极性不同的五个
部分 , 并采用 DPPH法和邻苯三酚自氧化法测定各部分的清除 DPPH· (二苯代苦味肼自由基)和· O2 -(超氧阴离子自由基)
的能力 , 以测定其抗氧化活性 , 并和抗坏血酸进行比较。结果　清除 DPPH·能力大小为:抗坏血酸 >乙酸乙酯部分 >正丁醇
部分 >石油醚部分 >水部分≈氯仿部分 ,清除· O2 -的能力以石油醚部分 、乙酸乙酯部分为好 , 其他部分认为无清除· O2 -的
活性。结论　太白乌头醇提物乙酸乙酯部分 、正丁醇部分和石油醚有较好的抗氧化活性 ,有进一步分离纯化的价值。
　　关键词:太白乌头;DPPH自由基;· O2 -;抗氧化活性
　　中图分类号:R965　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1673-6427(2008)01-0038-03
StudyonAntioxidantActivityofExtractsfromAconitumtaipeicum
XUYing, GUOZeng-jun
(ColegeofMedicine, XianJiaotongUniversity, Xian710061, China)
　　Abstract:Objective　TostudytheantioxidantactivityofextractsfromAconitumtaipeicum.Methods　 The
ethanolextractsofAconitumtaipeicumweredividedintofivefractionsbytheincreasingpolarity, thendetermineits
antioxidantactivitybyDPPHassyandpyrogalolautooxidationmethodsrespectively.Results　Thescavengingac-
tivitytoDPPHfreeradicalwasasfolows:VitaminC>ethylacetatefractions>n-butylalcoholfractions>petrole-
umfractions>waterfractions≈chloroformfractions.Conclusion　Ithasvalueoffurtherseparationandpurifica-
tionforethylacetatefractions, n-butylalcoholfractionsandpetroleumfractionsofAconitumtaipeicumextracts.
Keywords:Aconitumtaipeicum;DPPHfreeradical;· O2 -;antioxidantactivity
　　自由基是指能独立存在的 ,含有 1个或 1个以
上的不配对电子的任何原子或原子团。自由基可与
生物体内的许多物质如脂肪酸 、蛋白质等作用 ,导致
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DOI :10.13728/j.1673-6427.2008.01.017
机体的损伤。据报道自由基所引起的疾病已超过
100余种 ,主要有心肌梗塞 、癌症 [ 1 ～ 2]等 ,更重要的
是其氧化产物和中间产物会损伤生物膜 、酶 、蛋白质
及细胞的功能 ,其中一些是公认的致癌物 [ 3] 。
太白乌头 AconitumtaipeicumHand.-Mzt.,又名
金牛七 ,系毛茛科 Ranunculaceae植物太白乌头的干
燥母根和子根。其药理作用包括驱风活血 、解痉止
痛 、麻醉败毒 、免疫调节 、心血管作用和抗肿瘤作
用 [ 4 ～ 7] 。本试验采用 DPPH法和邻苯三酚自氧化法
对太白乌头用不同极性溶剂提取部分进行抗氧化活
性的测定 ,了解其抗氧化活性成分在各相的分布 ,为
以后进一步研究其活性化合物奠定基础。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　原料　太白乌头 AconitumtaipeicumHand.-
Mzt.采于陕西太白山 ,经西安交通大学医学院天然
药物化学教研室郭增军副教授鉴定。
1.1.2　试剂及仪器　DPPH· (二苯代苦味肼自由
基):Sigma公司生产;邻苯三酚:天津博迪化工有限
公司;三(羟甲基)氨基甲烷:天津福晨化学试剂厂;
抗坏血酸:上海山浦化工有限公司;乙二胺四乙酸:
天津百世化工有限公司 。 752紫外光栅分光光度
计:上海第三分析仪器厂。
1.2　试验方法
1.2.1　样品的制备　取干燥的太白乌头根 200 g,
粉碎 ,过 20目筛 。以乙醇为溶剂 ,索氏提取器回流
提取 ,过滤并用旋转蒸发仪回收溶剂得乙醇提取物
浸膏。加入少量水使混悬 ,而后依次用石油醚 、乙酸
乙酯 、氯仿 、正丁醇依次萃取 ,用旋转蒸发仪回收溶
剂至干得极性不同的五部分 ,即石油醚部分 、乙酸乙
酯部分 、氯仿部分 、正丁醇部分和水溶部分 。
1.2.2　试液的配制　样品溶液配制:DPPH·法时 ,
取极性不同的 5部分用甲醇配成适当浓度 。邻苯三
酚自氧化法时 ,水溶部分用双蒸水配制 ,其他部分用
甲醇配制。
0.1mmol· L-1DPPH·溶液:取 4 mgDPPH·
加甲醇定容至 100 mL(避光储存 , 1 d内有效)。
1.5mmol· L-1抗坏血酸溶液:取 13.2 mg抗
坏血酸加水定容至 50mL(冰箱储存 , 2 d有效)。
pH值 8.2的 0.05 mol· L-1Tris-HCl溶液:取
0.605 7 gTris(三羟甲基氨基甲烷)加双蒸水 50
mL,加入 0.048 5 gEDTA, 0.01molHCl· L-1 22.9
mL,加双蒸水定容至 100 mL(易吸收空气中的
CO2 ,密封保存)。
0.01mol·L-1邻苯三酚溶液:0.126 1g邻苯三
酚加 0.01 molHCl·L-1稀释定容至 100mL。
1.2.3　DPPH·法测抗氧化活性　在有机溶剂中 ,
DPPH· 溶液的最大吸收波长均在 517 nm附近。
当 DPPH·溶液中加入自由基清除剂时 ,溶液颜色
变浅 ,在 517 nm处吸光度变小 ,而吸光度变小的程
度与自由基被清除的程度呈定量关系。
在 0至 6号比色皿中分别加入 0、5、10、20、40、
70、100μL样品溶液 ,然后加甲醇至 3mL。在 0至 6
号比色皿中加入 0、5、10、20、40、70、100 μL样品溶
液 ,然后加 DPPH·溶液至 3 mL。混匀 。避光室温
反应 30 min,在 517nm处以 i(i=0 ～ 6)号比色皿调
零 ,测 i号比色皿的吸光度 Ai,每一吸光度平行测三
次取其平均值 。计算每个比色皿中的样品浓度(公
式 1)和相对吸光度(公式 2),以比色皿中的样品浓
度为横坐标相对吸光度为纵坐标作图。并求出相对
吸光度为 0.5时样品浓度 IC50和 AIHE(公式 3)。
比色皿中样品浓度(μg· mL-1)
=样品初始浓度(mg/mL)×体积(μL)
3mL (1)
相对吸光度 =AiAo (2)
AIHE=IC50 / IC50(AA) (3)
1.2.4　邻苯三酚自氧化法测抗氧化活性　该法是
利用在碱性条件下 ,邻苯三酚发生自氧化 ,生成有色
物质红碚酚 ,同时生成 · O2 -[ 8] 。 SOD或具类 SOD
活性的物质在有质子存在的介质中能迅速将
· O2 -歧化产生 O2和 H2O2 ,从而阻止中间产物的
积累 ,据此可测定抗氧化活性 。
在比色皿 1 ～ 4中分别加入 2.8mLpH值为 8.2
的 0.05 mol· L-1 (含 2 mmol· L-1 EDTA溶液)的
Tris-HCl溶液 ,然后在 1皿中加再 0.1 mL样品溶剂
和 0.1 mL0.01 mol· L-1的 HCl,在 2中加 0.1 mL
样品溶剂和 0.1mL0.01mol· L-1的邻苯三酚溶液 ,
迅速摇匀比色皿 , 3 min后 ,以 1调零测 2的吸光度
A0。在 3中加 0.1 mL样品溶液和 0.1 mL0.01
mol·L-1的盐酸溶液 ,在 4皿中加入 0.1mL样品溶
液和 0.1mL0.01mol·L-1的邻苯三酚溶液 ,迅速摇
匀比色皿 , 3 min后 ,以 3皿溶液调零测 4皿溶液的
吸光度 A。并以比色皿中的样品浓度为横坐标相对
—39—现代中药研究与实践 2008年第 22卷第 1期ResearchandPracticeofChineseMedicines
吸光度为纵坐标作图 ,求出相对吸光度为 0.5时样
品浓度 IC50和和 AIHE。
2　结果与讨论
2.1　抗坏血酸对 DPPH·和 ·O2 -的清除作用　抗
坏血酸是一种常用的抗氧化剂 ,其抗氧化性源自其
结构中的烯二醇基团极易脱氢而被氧化为二酮结
构 。
抗坏血酸清除 DPPH·的 IC50 =2.013 ±0.107
μg·mL-1 ,抗坏血酸清除 · O2 -的 IC50 =45.37±
2.36μg· mL-1。
2.2　不同极性萃取部分对 DPPH·的清除作用
不同极性萃取部分清除 DPPH·的 IC50值结果
见表 1。
表 1　不同极性萃取部分清除 DPPH·的 IC50值
Tab.1　IC50 valueofscavengingactivityonDPPH · indiferent
extractionfraction〗
样品 IC50(μg· mL-1) AIHE
石油醚部分 80.064±7.502 39.77
乙酸乙酯部分 23.092±2.083 11.47
氯仿部分 104.872±6.201 52.10
正丁醇部分 48.920±5.730 24.30
水部分 102.672±12.348 51.00
　　DPPH·是少数人工合成的稳定的自由基之一 ,
其稳定性主要来自共振稳定作用以及 3个苯环的空
间障碍 ,使夹在中间氮原子上的不成对电子不能发
挥其应有的电子成对作用 ,其对自由基清除剂具有
广谱性筛选效果 。由表 1可以看出 ,太白乌头的乙
酸乙酯部分有最强的清除 DPPH·能力 ,其后依次
为正丁醇部分 、石油醚部分;氯仿和水溶部分相当且
清除 DPPH·的能力都较差 ,这可能与乙酸乙酯部
分含有较多的酚类化合物及正丁醇部分含有还原性
杂原子的生物碱有关 。这些成分单独存在具有抗氧
化作用外 ,它们组合在一起甚至产生协同作用使抗
氧化性大大增加 。如生物碱和酚类 ,生物碱的氮原
子被酚的氢质子化后 ,与氮原子结合的化学键变松
弛而易断裂 ,容易被氧化 ,而酚失去氢后苯环上电子
云密度降低导致酚更易氧化为醌 [ 9] 。但本研究太
白乌头萃取 5部分成分清除 DPPH·的能力均弱于
抗坏血酸 ,这种状况可能随着分离纯化的进一步进
行以及单体化合物的分出将得到改善 。
2.3　不同极性萃取部分对 ·O2 -的清除作用
不同极性萃取部分清除· O2 -的 IC50值见表 2。
表 2　不同极性萃取部分清除· O2 -的 IC50值Tab.2　IC
50
valueofscavengingactivityon· O
2
-indifferentex-tractionfraction
样品 IC50(μg· mL-1) AIHE石油醚部分 1594.28±87.38 35.14
乙酸乙酯部分 2307.87±120.25 50.87
氯仿部分 >10000
正丁醇部分 >10000
水部分 >10000
　在生物体系中 ,电子转移是一基本变化 ,氧分子可
以通过电子转移变成其他种类的活性氧 ,其间的相
互关系如下:O2→·O2 -→H2O2→· OH→H2O。尽
管· OH是最活泼的活性氧物种 ,其反应特点是无
专一性 ,几乎能与所有的体内物质反应 。但倘若清
除了 ·O2 -,则· OH的生成则成了无水之源 ,可以
从根本上预防体内活性氧自由基的生成 ,从而达到
抗肿瘤的目的 。由表 2可以看出仅有石油醚部分及
乙酸乙酯部分有清除 · O2 -的能力 ,但均弱于抗坏
血酸 ,这种情况可能随着分离纯化的进一步进行以
及单体化合物的分出得到改善。
本文研究表明:太白乌头醇提物乙酸乙酯部分 、
正丁醇部分和石油醚有较好的抗氧化活性 ,尤其是
乙酸乙酯部分 ,有进一步分离纯化的价值。单体化
合物的抗氧化性以及抗氧化性与抗肿瘤活性的相关
性有待进一步研究 。
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