全 文 ：蕨麻水溶性多糖的提取及其单糖组分的分析
刘春兰 , 雷美康 , 邓义红 , 李转秀 ,曾　明
(中央民族大学 生命与环境科学学院 ,北京　100081)
摘　要:　本文采用热水提取 、乙醇沉淀 、a-淀粉酶法脱淀粉 、链酶蛋白酶和 Sevag 法联合除蛋白 ,得到蕨麻多
糖.对提取的蕨麻多糖进行了总糖含量及糖醛酸含量的测定.粗多糖(P1)总糖含量为 41.8%, 糖醛酸含量为
11.1%.脱淀粉脱蛋白多糖(P2)总糖含量为 39.4%,糖醛酸含量为 35.9%.经纸层析和高效液相色谱分析 , 表
明该多糖主要由阿拉伯糖 、鼠李糖 、葡萄糖 、半乳糖 、半乳糖醛酸组成 , 说明蕨麻多糖为酸性杂多糖.
关键词:　蕨麻;多糖;分离纯化;组成
中图分类号:Q539　　文献标识码:A　　文章编号:1005-8036(2007)01-0016-03
收稿日期:2006-09-04
作者简介:刘春兰(1962-),女(汉族),吉林人 ,中央民族大学生命与环境科学学院副教授.
　　藏药蕨麻(Potentilla anserina L .)是青藏高原的一种特有经济作物 ,为蔷薇科委陵菜属植物鹅绒委陵
菜之膨大块根 ,又叫“人参果” ,藏语名“戳玛” ,藏医称“卓老酒曾” ,属多年生草本植物.蕨麻作为一种具
有很高营养价值和医疗保健功能的药食两用植物 ,有着广阔的开发前景[ 1] .现今 ,国内外的相关研究并
不是很多 ,特别是针对蕨麻多糖.杨桦[ 2] 等从蕨麻中分离出多糖成分 ,并测定了总糖含量.陈炅然[ 3 ～ 4] 等
进行了蕨麻多糖的药理学活性研究.但他们水提的粗多糖都未进行脱淀粉 ,也就是没有把营养性多糖与
功能性多糖分离开.本文采用水提醇沉法从蕨麻中提取出了多糖组分 ,采用酶法脱去粗多糖中的淀粉 ,
然后脱蛋白 ,得到蕨麻初步纯化多糖.然后对蕨麻多糖进行进一步的理化性质分析.这不仅填补了蕨麻
在多糖分析方面的研究空白 ,而且可以为蕨麻的应用开发提供可靠的理论依据.尤其是在青藏高原地
区 ,野生蕨麻资源十分丰富 ,对其进行研究 ,不但可以实现其丰富的营养价值和珍贵的药用价值 ,而且可以
给该地区带来可观的经济效益和社会效益 ,更会在开发西部资源的同时 ,提高我国功能食品的研究水
平[ 1] .
1　实验部分
1.1　材料 、试剂和仪器
1.1.1　材料:蕨麻(产地甘肃甘南 ,晒干粉碎备用)
1.1.2　主要试剂
α-淀粉酶(生化试剂), 北京双旋微生物培养基制品厂;
链蛋白酶(生化试剂), From Streptomyces Griseus Roche;
标准糖为生化试剂 ,其他常用化学试剂均为分析纯.
1.1.3　主要仪器
LD4—2型离心机 、800B-离心机 、JA2003型电子天平 、TDA-恒温水浴锅 、ZK一 82A真空干燥箱 、紫外
-可见分光光度计(V-550)、高效液相色谱仪(日本岛津公司)、紫外灯(北京碧都空气净化设备公司).
1.2　粗多糖的提取及初步纯化
1.2.1　粗多糖提取流程:
2007年 2月
第 16卷　第 1期
中央民族大学学报(自然科学版)
Journal of the CUN(Natural Sciences Edition)
Feb.2007
Vol.16　No.1
残渣
粗多糖 上清液
离心
醇沉
浓缩
滤液
乙醇提取
过滤
热水浸提(2次)
醇提残渣
石油醚脱脂
脱脂残渣
蕨麻块根(粉碎)
1.2.1　粗多糖初步纯化流程如右图示:
1.3　蕨麻多糖理化性质研究
1.3.1　硫酸一苯酚法测定多糖含量[ 5]
1.3.2　硫酸一咔唑法测定糖醛酸含量[ 5]
1.3.3　多糖的纸层析[ 6]
样品(脱淀粉及蛋白)的完全酸水解液.展开
剂为正丁醇:冰醋酸:水=4∶1∶5(v v),展层时间
26h ,待纸上的溶剂干燥后 ,喷洒显色剂(邻苯二
甲酸苯胺),在 100℃下显色 10min.
1.3.4多糖的高效液相色谱分析[ 7]
蕨麻多糖(脱淀粉及蛋白)酸水解液过孔径
为0.46mm的滤膜 ,进样量为 20μl.
条件:氨基柱(Hypersit-NH2:150mm ×4.6mm
×5um )流动相:乙氰∶水=80∶20 流速:1.2ml
min.
2　结果与讨论
分析
2
酶法和Sevage法联合
微量凯式定氮法
α- 淀粉酶
脱蛋白
测定蛋白质含量
脱淀粉
淀粉检测
KI-I
蕨麻粗多糖
2.1　蕨麻粗多糖分析
2.1.1　粗多糖性质
蕨麻水提醇沉得粗多糖 ,粗多糖得率为 4.1%.
蕨麻粗多糖是一种褐色粉末状固体 ,无味 ,溶于水 ,不溶于乙醇 ,丙
酮 ,氯仿等有机溶剂.KI -I2 实验有蓝色现象 ,说明蕨麻粗多糖含有淀
粉.苯酚—硫酸反应产生橘红色缩合产物 ,说明蕨麻水溶性多糖含有糖.
硫酸一咔唑反应生成紫红色化合物 ,可以鉴别蕨麻粗多糖含有糖醛酸 ,
说明蕨麻多糖为酸性多糖.
2.1.3　苯酚—硫酸法测总糖含量
经测定蕨麻多糖溶液在 490nm处有最大吸光度 ,结果见图 1.
图 1　最佳吸收波长
Fig.1　The selection of the optimal absorbtion wavelengh
苯酚—硫酸法测定蕨麻粗多糖含量 ,回归曲线方
程为 y=0.0131x+0.0163 R2=0.9865标准曲线如图2.
得蕨麻粗多糖总糖含量为 41.8%.
2.1.4　硫酸-咔唑法测半乳糖醛酸含量
硫酸一咔唑法测定蕨麻粗糖中糖醛酸含量.回归
曲线方程为 y=0.0032x+0.0696 R2 =0.9868标准曲线
如图 3.得粗多糖糖醛酸含量为11.1%.
2.2　初步纯化蕨麻多糖的性质分析
KI—I2 分析 ,样品变蓝色 ,证明样品含有淀粉.蕨
麻粗多糖用α-淀粉酶法脱淀粉.凯氏定氮法测定脱淀
粉多糖中蛋白质含量为 15.2%.用链蛋白酶酶法和 Sevage 法联合脱蛋白得脱蛋白多糖.
苯酚—硫酸法测定总糖含量 ,脱蛋白多糖的总糖含量为 39.4%.硫酸一咔唑法测定糖醛酸含量 ,脱
蛋白多糖的糖醛酸含量为 35.9%.
17　第 1期 刘春兰等:蕨麻水溶性多糖的提取及其单糖组分的分析
2.3　单糖组成分析
纸层析分析蕨麻脱蛋白多糖的单糖组成为阿拉伯糖 、葡萄糖 、半乳糖 、半乳糖醛酸.高效液相色谱分析
脱蛋白多糖的单糖组成为阿拉伯糖 、鼠李糖 、葡萄糖 、半乳糖 、半乳糖醛酸.蕨麻脱蛋白多糖在高效液相色
谱中比在纸层析中多检测到一种单糖-鼠李糖 ,可能蕨麻多糖中的鼠李糖含量较低 ,纸层析未检测出来.
图 2　葡萄糖标准曲线
Fig.2　The standard curve of glucose
图 3　半乳糖醛酸含量的标准曲线
Fig.3　The standard curve of GalA
3　结　　论
本文用水提醇沉法从藏药蕨麻中提取水溶性多糖 ,所得粗多糖为褐色粉末 ,溶于水 ,不溶于乙醇等
有机溶剂 ,粗多糖得率为 4.1%.
经过纸层析及高效液相色谱分析 ,该多糖由阿拉伯糖 、鼠李糖 、葡萄糖 、半乳糖 、半乳糖醛酸组成 ,说
明此多糖为酸性杂多糖.
参考文献:
[ 1 ] 　回晶.西藏蕨麻补血机能及有效成分的研究[ D] .研究生申请硕士学位论文 , 2003.
[ 2 ] 　杨桦.藏药蕨麻中多糖的含量测定研究[ J] .中草药 , 2001 , 32(1):29-31.
[ 3 ] 　陈灵然.蕨麻多糖的分离及药理学活性研究[ D] .兰州大学同等学力硕士毕业论文 , 2004.
[ 4 ] 　陈炅然 ,等.蕨麻多糖的提取及其清除自由基的作用[ J] .中国兽医科技 , 2004 , 34(4):59-61.
[ 5 ] 　刘海青.沙棘叶水溶性多糖的研究[ D] .中央民族大学硕士学位论文 , 2005.
[ 6 ] 　李立恒 ,等.密环菌深层发酵液多糖的分离纯化和组成[ J] .湖南农业大学学报.2006 , 30(3):275-277.
[ 7 ] 　张晓红 ,等.高效液相色谱法对黄精多糖相对分子质量及组成的测定[ J] .色谱 , 2005 , 23(4):394-396.
Extraction and Analysis of Water Soluble Polysaccharide of Potentilla anserine L .
LIU Chun-lan , LEI Mei-kang , DENG Yi-hong ,LI Zhuan-xiu , ZENG Ming
(College of Life and Environmental Science , Central University for Nationalities , Beijing 100081, China)
Abstract:The crude polysaccharide was extracted from Potentilla anserina L.with hot water ,
precipitated by ethanol , and was isolated and purified.The total sugar of P1 , P2 was 41.8 %, 39.4%
respectively , and the content of glucuronic acid was 11.1%, 35.9% respectively.P2was a glycoprotein
with 15.2 %of protein.The crude polysaccharide was analysised by PC and HPLC ,They mainly consiste
of Ara , Rha ,Gal ,Glc ,GalA.
Key words:Potentilla anserine L .;polysaccharide;Isolition purification;composition
[责任编辑:白　玲]
18 中央民族大学学报(自然科学版) 第 16卷