全 文 ：　　
基金项目:“十五”国家科技攻关计划“西部开发科技行动”重大项目(2004BA901A25)
作者简介:陈芳 ,女 ,硕士研究生　　＊通讯作者:　　Tel:(010)66933323　　Fax:　　E-mail:cgm1004@VIP.sina.com
内标峰面积。另配制含内标的格列齐特浓度分别为
0.25 ,1.0 ,4.0 mg·L-1的标准溶液 ,20 μL 进样 ,记录
格列齐特和内标峰面积。比较血浆样品和标准样品
的峰面积 ,计算格列齐特和内标的萃取回收率 。结
果格列齐特低 、中 、高 3个浓度的萃取回收率分别为
为96.55%, 97.32%, 94.44%。内标地西泮的萃取
回收率为 90.12%。
2.6.2　方法回收率　取空白血浆及对照品溶液 ,按
“2.5”项下方法制备格列齐特低 、中 、高 3个质量浓
度(0.25 ,1.0 ,4.0 mg·L-1)的质量控制(QC)样品 ,每
一质量浓度平行操作 5份 ,代入线性方程计算质量
浓度 ,以测得值与加入值的比值计算回收率 ,并计算
日内精密度 。分别配制 10 mL低 、中 、高 3个质量浓
度(0.25 ,1.0 ,4.0 mg·L-1)样品 ,各分装成 5份 ,连续
5 d测定上述浓度样品 ,考察方法日间精密度 。结果
见表 1。
表 1　回收率和精密度实验结果
Tab 1　Results of recovery and the precision test
ρ/mg·L-1 Recovery/ % Intra-day RSD/ % Inter-day RSD/ %
0.25 96.42±4.49 4.66 4.82
1.0 98.27±3.07 3.12 3.26
4.0 99.85±3.54 3.55 3.54
2.7　样品稳定性实验
2.7.1　血浆样品室温放置稳定性　用空白血浆配
制相当于格列齐特低 、中 、高 3 个质量浓度(0.25 ,
1.0 ,4.0 mg·L-1)的样品 ,在室温条件下放置 ,分别
在 0 , 2 , 4 , 6 , 12 h 测定 , 结果浓度平均值分别为
0.246 ,1.03 ,3.95 mg·L-1 , RSD分别为 8.5%, 6.3%,
7.7%(n=5)。结果表明 ,血浆样品在室温放置 12 h
内稳定。
2.7.2　血浆样品冻融稳定性　用空白血浆配制相
当于格列齐特低 、中 、高 3个质量浓度(0.25 , 1.0 ,
4.0 mg·L-1)的样品 ,在-20 ℃冰箱中冷冻后取出 ,
室温融化 ,测定 ,重复操作 4次 ,得血浆样品冻融稳
定性结果 ,质量浓度分别为 0.246 ,0.998 , 4.06 mg·
L-1 ,RSD分别为 6.4%,5.5%,5.1%(n=5),结果表
明 ,血浆样品在 4次冻融过程中稳定 。
2.7.3　血浆样品冷冻放置稳定性 　用空白血浆配
制相当于格列齐特低 、中 、高 3 个质量浓度(0.25 ,
1.0 ,4.0 mg·L-1)的样品 ,在-20 ℃冰箱中放置 ,分
别在 0 ,5 ,10 ,20 ,30 d 测定 ,得血浆样品冷冻放置稳
定性 , 结果质量浓度分别为 0.253 , 1.04 , 3.92 mg·
L
-1 , RSD分别为7.4%,6.1%,7.6%(n=5),结果表
明 ,血浆样品在冷冻条件下放置 30 d内稳定 。
3　讨　论
3.1　本实验采用 SPE操作简便 、迅速 、毒性小 、重复
性好 、干扰少 。可适用于批量处理样品和用于人体
药动学的研究。
3.2　本实验 SPE 处理血样的关键是要在血清中加
入 0.2 mol·L-1盐酸 ,否则 ,在用蒸馏水冲洗柱时 ,所
测成分被蒸馏水先冲洗出柱 ,致使用甲醇洗柱时 ,所
得回收率极低。
(收稿日期:2005-07-12)
HPLC 测定蕨麻素缓释微丸中蕨麻苷
的含量
陈芳1 ,2 ,蔡光明1 ,夏新华2(1.解放军第 302医院中医药研究
所 ,北京 100039;2.湖南中医学院 ,长沙 410004)
中图分类号:R917.401　　　文献标识码:A　　　文章编
号:1001-2494(2006)06-0473-02
蕨麻素(蕨麻总皂苷类成分 ,以下简称 JMS),是
由中药蔷薇科委陵菜属植物鹅绒委陵菜(Potentilla
ansterina L.)的块根提取的活性部位 ,药效实验研究
发现 JMS 具有抑制乙肝病毒复制 ,保肝降酶 ,提高
免疫力 ,增强肝脏解毒和代谢等作用 。目前 , JMS已
按新药中药制剂———蕨麻总苷片开发并获得 SFDA
批准进入抗肝炎新药 Ⅱ期临床试验 。在此基础上 ,
为了使其发展成为高效 、安全 、使用方便的药物 ,进
行了新剂型 JMS缓释微丸的研究 。JMS缓释微丸是
以 JMS为原料药加辅料制成的粒径为 0.6 ～ 0.8 mm
的小丸包缓释衣后装胶囊而制成的缓释制剂。其中
JMS中主要化合物蕨麻苷(简称 JMG)是国内外首次
发现的新化合物成分 ,是 JMS中的主要有效成分之
一 ,且含量高(>20%)。因此 ,测定 JMG的含量 ,对
控制 JMS 微丸药品制备工艺的稳定及药品质量的
稳定性 ,确保临床疗效具有重要意义 。本实验以
JMG为质量控制指标 ,建立了高效液相色谱法测定
JMS缓释微丸中 JMG 含量的方法。该法操作简便 ,
灵敏度高 ,可操作性强 。
1　仪器与试药
·473·中国药学杂志 2006年 3月第 41卷第 6期　　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2006 March , Vol.41 No.6
仪器:美国惠普 HP -1100高效液相色谱仪;甲
醇(色谱纯);对照品:JMG(自制 ,纯度 98.5%), 样
品:JMS 缓释微丸(自制 , 批号 050315 , 050516 ,
050517 ,050518 ,050527)。
2　方法与结果
2.1　JMS 缓释微丸的制备
取处方量的原辅料 ,加入适量的粘合剂混合均
匀 ,然后加入挤出机挤出 ,挤出物投入滚圆机滚圆成
素丸 ,素丸低温烘干后过筛 ,筛分得粒径为 0.6 ～ 0.8
mm的合格素丸 。素丸包缓释衣至增重 16%后装入
1号胶囊即得 JMS ,缓释微丸胶囊 。
2.2　JMS 缓释微丸阴性样品的制备
处方中不含 JMS ,其它辅料以及工艺和 JMS 缓
释微丸的制备相同。
2.3　供试品溶液配制
取 JMS微丸胶囊 6粒(0.50 g/粒)去胶囊壳 ,研
细。取其细粉约 0.080 g ,置 100 mL 具塞三角烧瓶
中 ,精密加入甲醇 40 mL ,称定 ,超声 15 min ,使其充
分溶解 ,放冷至室温 ,精密称量下用甲醇补足损失的
重量 ,摇匀 ,过滤。取续滤液 ,用 0.45 μm 微孔滤膜
过滤即得 。
2.4　对照品储备液配制
精密称取 JMG对照品 100 mg 置于 25 mL 量瓶
中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,置于 4℃冰箱
备用 。
2.5　色谱条件
Pinnacle Ⅱ C18柱(4.6mm×250 mm ,5μm);流动
相:甲醇-水(60∶40);柱温为室温;检测波长为 208
nm;流速为 1.0 mL·min-1 。
2.6　可行性试验
按处方配比制备不含 JMS 的空白微丸阴性样
品。称 JMS 微丸样品及相当量阴性样品 ,按样品测
定项下方法分别进行提取。然后分别取 JMG 对照
品溶液 、JMS微丸样品溶液 、不含 JMS的 JMS微丸阴
性样品溶液 ,进样 10 μL ,打印色谱图 ,结果 JMG 峰
的保留时间约为 10 min;阴性样品在 JMG峰处无假
阳性峰 ,即 JMS微丸中其他成分对 JMG 含量测定没
有影响。理论塔板数以 JMG 峰计不少于4 000 。
2.7　线性关系考察
分别精密量取由 JMG 对照品储备液稀释的不
同质量浓度(0.050 ,0.10 ,0.20 ,0.50 ,1.00 g·L-1)工
作溶液进样 ,每一浓度进样 2次 ,每次进样 10 μL ,记
录峰面积。以峰面积均值对进样浓度进行回归处
理 ,得线性回归方程:Y =3 302.5ρ+1.490 9;r =
0.999 9 。线性范围为 0.050 ～ 1.0 g·L-1 ,定量限为
0.050 g·L-1 。
2.8　精密度实验
取 JMG对照品溶液 ,重复自动进样 5次 。结果
峰面积均值为1 674.8 , RSD为 0.65%(n=5)。
2.9　重现性试验
取同一批 JMS 微丸胶囊(050327)供试品溶液进
样 10μL ,重复进样 5次 。结果 JMG 峰面积均值为
1418.6 , RSD为 1.11(n=5)。
2.10　稳定性试验
取 JMS微丸供试品溶液及 JMG对照品溶液 ,密
封室温放置 ,于 0 ,1 ,2 ,4 ,8 , 16 , 24 h进样 10μL 测定
峰面积 。结果表明供试品溶液及对照品溶液在 24 h
内基本稳定 ,以峰面积计算 , RSD分别为 1.23%和
0.95%。
2.11　加样回收率试验
按“2.3”项下方法 ,精密称取同一批 JMS 微丸细
粉 6份 , 其中 4 份分别加入 JMG 对照品储备液 4
mL ,另外 2份作空白。按“2.5”项下条件进样 ,结果
平均回收率为98.62%, RSD为 1.2%。
2.12　样品测定
取供试品溶液 10 μL 进样 ,外标法计算含量。
结果见表1。
表 1　样品测定结果.n=3
Tab 1　Determination result of JMG in JMS pellets.n =3
Lot JMG content/g·g-1 RSD/ %
050315 0.170 2.05
050516 0.175 1.11
050517 0.173 1.69
050518 0.177 1.98
3　讨　论
3.1　采用本法测定 JMS微丸中 JMG 含量具有操作
简便 、重现性好 、结果准确等优点 ,可为 JMS缓释微
丸质量标准的起草提供 JMG含量的测定方法。采
用对 JMG溶解性能好的甲醇为溶剂 ,分别用超声溶
解 10 ,15 ,20 min。结果表明 ,超声溶解 15 min可溶
解完全 。
3.2　本实验中挤出滚圆制丸和流化床包衣工艺对
微丸含量影响较小 ,5批胶囊的原料药中 JMG含量
无显著性差别 ,胶囊中 JMG 的含量亦无显著性差
别 。 (收稿日期:2005-10-18)
·474· Chin Pharm J , 2006 March , Vol.41 No.6　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2006年 3月第 41卷第 6期