全 文 ：［收稿日期］ 20110817(002)
［基金项目］ 浙江省重大科技计划项目(2009C02005)
［第一作者］ 潘心禾，高级工程师，主要从事中药资源研究，
Tel:0578-2271129，E-mail:lkspxh@ 126. com
［通讯作者］ * 张新凤，博士，副教授，主要从事天然产物化学
研究，Tel:0571-63742885，E-mail: xinfengxh @
hotmail． com
柳叶蜡梅化学成分及其抗氧化活性研究
潘心禾1，史小娟2，张新凤2* ，斯金平2
(1. 浙江省丽水林业科学研究院 中药材研究所，浙江 丽水 323000;2. 浙江农林大学
亚热带森林培育国家重点实验室培育基地 天然药物研究开发中心，浙江 临安 311300)
［摘要］ 目的:研究柳叶蜡梅 Chimonanthus salicifolius 叶中的化学成分及其抗氧化活性。方法:采用各种柱色谱法进行
分离纯化柳叶蜡梅叶中的化学成分，采用理化性质和 NMR 等波谱学方法鉴定化合物结构;采用 ABTS 法评价各化合物的抗氧
化活性。结果:从柳叶蜡梅叶乙醇提取物中分离得到 7 个化合物，分别为 7-羟基-6-甲氧基香豆素(1) ，莨菪亭-7-O-β-D-葡萄糖
苷(2) ，山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)、山萘酚-3-O-芸香糖苷(4)、山萘酚(5)、槲皮素(6)和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(7)。抗
氧化活性结果表明化合物 1，5，6 具有较好的清除抗氧化活性(ABTS)自由基的作用，其半数抑制率(IC50)分别为 8. 72，1. 62，
0. 563 mmol·L － 1。结论:化合物 2，3，7 均是首次从蜡梅属植物中分离得到，部分化合物具有较好的抗氧化活性。
［关键词］ 柳叶蜡梅;化学成分;抗氧化活性
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)01-0099-04
［DOI］ CNKI:11-3495 /R． 20111107． 1624． 004 ［网络出版时间］ 2011-11-07 16:24
［网络出版地址］ http:/ / www． cnki． net / kcms / detail /11． 3495． R． 20111107． 1624． 004． html
Constituents of Chimonanthus salicifolius and Their Antioxidant Activity
PAN Xin-he 1，SHI Xiao-juan2，ZHANG Xin-feng2* ，SI Jin-ping2
(1. Institute of Chinese Medicinal Materials，Lishui Institute of Forestry Sciences，Lishui 323000，China;
2. Nurturing Station for State Key Laboratory of Subtropical Silviculture，Research and Development Center
for Natural Medicine，Zhejiang Agricultural and Forestry University，Lin’an 311300，China)
［Abstract］ Objective:To study the constituents from Chimonanthus salicifolius and their antioxidant
activities． Method:Constituent isolation and purification was carried by kinds of column chromatography，and their
structures were elucidated on the basis of spectral data analysis． ABTS method was used to evaluate the free radical
scavenging activity of the isolated compounds． Result:Seven compounds (1-7)were isolated and their structures
were identified as follows:scopoletin (1) ，scopoletin-7-O-β-D-glucoside (2) ，kaempferol-3-O-β-D-glucoside
(3) ，kaempferol-3-O-β-D-rutinoside (4) ，kaempferol (5) ，quercetin (6) ，emodin-8-O-β-D-glucopyranoside
(7)． The compounds 1，5 and 6 showed higher antioxidant activity than positive control trolox with IC50 values
8. 72，1. 53，0. 563 mmol·L － 1 respectively． Conclusion:Compounds 2，3 and 7 were isolated from this genus for
the first time． Some compounds had the significant antioxidant activity．
［Key words］ Chimonanthus salicifolius;chemical constituents;antioxidant activity
柳叶蜡梅是中国特有种［1］，仅分布于安徽、江 西及浙江一带［2］，已被列为安徽省省级珍稀濒危保
护植物［3］。柳叶蜡梅在民间多作茶饮品，兼具药
用［4-5］，其性味微苦、辛、凉，具有解表祛风、清热解
毒等功能，临床上可用于治疗寒湿困脾、肝胃不和引
起的肠胃不适、腹部胀痛、泄泻等消化道疾病，也可
用于预防感冒、流行性感冒、预防中暑、治疗慢性气
管炎、胸闷等症状，还能增强人体免疫力。以柳叶蜡
梅叶为主要原料的畲药“食凉茶”，已被《浙江省中
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第 18 卷第 1 期
2012 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 1
Jan．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.01.039
药炮制规范》收载。
目前国内外学者对柳叶蜡梅挥发油及药理作用
有一定的研究［6-8］。但在系统化学成分的研究方面
进展不如同属植物山蜡梅，已有报道山蜡梅叶中含
有生物碱、黄酮、香豆素等类型成分［9］。为了阐明
柳叶蜡梅叶的化学成分，作者对柳叶蜡梅叶乙醇提
取物进行了分离纯化，得到了 7 个化合物，其中 2 个
是香豆素类化合物，4 个为黄酮类化合物，1 个为蒽
醌类化合物;其中化合物 2，3，7 均是首次从蜡梅属
植物中分离得到，并且化合物 1，5，6 具有一定的抗
氧化活性。
1 材料
X-4 型数字显微熔点仪(温度未校正) ，瑞士
Bruker Avance 600 核磁共振波谱仪(TMS 为内标) ，
R-210 型旋转蒸发仪(瑞士 Buchi 公司) ，UV2550 型
紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)。柱
色谱用硅胶(300 ～ 400 目，青岛海洋化工厂) ，
Sephadex LH-20 (Pharmacia 公司) ，140 C18 -PREP
(Hacalai 公司) ，YMC (SL12 S-50) ，AB-8 型大孔吸
附树脂 (南开大学) ，正相及反相硅胶薄层色谱板
(德国 MERCK 公司)。
2，2-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸，ABTS，
Sigma 公司) ，Trolox(Sigma 公司) ，过硫酸钾(宜兴
市第二化学试剂厂)。分离用甲醇、乙醇、正丁醇、
丙酮、二氯甲烷等试剂均为分析纯。
柳叶蜡梅嫩枝叶于 2008 年 6 月在浙江丽水市
大东坝镇灯塔村蜡梅种植基地采集，经浙江农林大
学楼 炉 焕 教 授 鉴 定 为 蜡 梅 属 植 物 柳 叶 蜡 梅
Chimonanthus salicifolius S． Y． hu。
2 提取与分离
柳叶蜡梅嫩枝叶(3. 3 kg)阴干，粉碎成粗粉，装
入渗漉筒内，用 95%的乙醇浸泡 24 h，采用渗漉法
进行提取。将渗漉液减压真空浓缩，得柳叶蜡梅叶
总浸膏(297 g)。将总浸膏用水溶解，用石油醚进行
脱脂处理，得到石油醚萃取部分和水溶部分。将水
溶部分上大孔树脂柱，依次用水、30% 乙醇、50% 乙
醇、100%乙醇梯度洗脱进行洗脱，分别得到水、30%
流份(146. 7 g )、50%流份(42. 4 g)、100%流份(25
g)4 个流份。将 30%流份用硅胶拌匀，上硅胶柱，流
动相采用二氯甲烷、甲醇(30∶ 1，20∶ 1，15∶ 1，10∶ 1，8∶
1，5∶ 1，2∶ 1，1∶ 1)进行梯度洗脱，TLC 检测合并相同
组分，并经多次硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶 Sehpdex
LH-20，后经反相硅胶 C18柱进行分离及结晶纯化，
得化合物 1(35 mg) ，2(53 mg) ，3(265 mg) ，4(2. 3
g) ;50% 流份经反复硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶
Sephadex LH-20 及 C18 柱色谱分离得到化合物 5
(125 mg) ，6(864 mg) ，7(21 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1 无色晶体(MeOH) ，mp 193. 4 ℃。
UV (MeOH)λmax:230. 0，254. 0，299. 0，347. 0 nm;
IR (KBr)νmax / cm
－ 1:3 330 (OH) ，1 700 (C = O) ，
1 605，1 560，1 510 (aromatic ring) ;1H-NMR (300
MHz，Methanol-d4) δ:4. 16 (3H，s，OCH3) ，6. 21
(1H，d，J = 9. 3 Hz，H-3) ，6. 78 (1H，s，H-5) ，7. 11
(1H，s，H-8) ，7. 85 (1H，d，J = 9. 3 Hz，H-4)。13 C-
NMR (75 MHz，methanol-d4) δ:55. 8 (OCH3) ，
103. 0 (C-8) ，109. 0 (C-5) ，111. 5 (C-10) ，111. 6
(C-3) ，145. 1 (C-4) ，146. 1 (C-6) ，150. 4 (C-9) ，
151. 9 (C-7) ，163. 0 (C-2)。以上数据与文献［10-
11］报道的基本一致，故鉴定为 7-羟基-6-甲氧基香
豆素即东莨菪亭(scopoletin)。
化合物 2 黄色晶体(MeOH) ，1H-NMR (300
MHz，methanol-d4)δ:6. 31 (1H，d，J = 9. 5 Hz，H-
3) ，7. 94 (1H，d，J = 9. 5 Hz，H-4) ，7. 26 (1H，s，H-
5) ，7. 13 (1H，s，H-8) ，5. 31 (1H，J = 5. 2 Hz，H-
1) ，3. 81 (3H，s，OCH3 )。
13 C-NMR (75 MHz，
methanol-d4)δ:56. 5 (OCH3) ，161. 0 (C-2) ，113. 8
(C-3) ，144. 7 (C-4) ，110. 2 (C-5) ，149. 4 (C-6) ，
150. 7(C-7) ，103. 5 (C-8) ，146. 5 (C-9) ，112. 7 (C-
10) ，100. 1 (C-1) ，73. 5(C-2) ，77. 6(C-3) ，70. 1
(C-4) ，77. 2(C-5) ，61. 1(C-6)。以上数据与化合
物 1 相比较，出现了一个葡萄糖基的信号，故鉴定为
东莨菪亭-7-O-β-D-葡萄糖苷 (scopoletin-7-O-β-D-
glucoside)。
化合物 3 淡黄色针晶(丙酮) ，1H-NMR (600
MHz，DMSO-d6)δ:6. 17 (1H，d，J = 1. 9 Hz) ，6. 41
(1H，d，J = 1. 9 Hz) ，7. 98 (2H，d，J = 8. 7 Hz，H-
2’，6’) ，6. 85 (2H，d，J = 8. 7 Hz，H-3’，5’) ，5. 35
(1H，d，J = 7. 6 Hz，H-1″ of glc)。13 C-NMR (150
MHz，DMSO-d6) δ:156. 9 (C-2) ，133. 6 (C-3) ，
177. 9 (C-4) ，160. 2 (C-5) ，99. 2 (C-6) ，164. 5 (C-
7) ，94. 2 (C-8) ，156. 9(C-9) ，104. 4 (C-10) ，121. 3
(C-1) ，131. 4 (C-2，6) ，115. 6 (C-3，5) ，159. 5
(C-4) ，101. 3 (C-1″) ，74. 5 (C-2″) ，77. 6 (C-3″) ，
70. 2 (C-4″) ，76. 7 (C-5″) ，61. 2 (C-6″)。以上数据
与文献［12-13］一致，鉴定该化合物为山萘酚 3-O-β-
D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucoside)。
化合物 4 黄色针状结晶(MeOH) ，mp 191 ～
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第 18 卷第 1 期
2012 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 1
Jan．，2012
192 ℃，1H-NMR (300 MHz，methanol-d4) δ:6. 39
(1H，J = 2. 1 Hz，H-6) ，6. 19 (1H，J = 2. 1 Hz，H-
8) ，6. 86 (2H，J = 8. 7 Hz，H-3，5) ，7. 97 (2H，J =
8. 7 Hz，H-2，6) ，5. 29 (1H，d，J = 7. 8 Hz，H-1″ of
glc) ，4. 52 (1H，br s，H-1of rha) ，0. 96 (3H，d，J =
6. 2 Hz，CH3-6  of rha)。
13 C-NMR (75 MHz，
methanol-d4)δ:157. 0 (C-2) ，133. 7 (C-3) ，177. 9
(C-4) ，161. 7 (C-5) ，99. 2 (C-6) ，164. 6 (C-7) ，
94. 2 (C-8) ，157. 3 (C-9) ，104. 5 (C-10) ，121. 4 (C-
1) ，131. 3 (C-2，6) ，115. 6 (C-3，5) ，160. 3 (C-
4) ，101. 8 (C-1″) ，74. 6 (C-2″) ，76. 8 (C-3″) ，70. 4
(C-4″) ，76. 2 (C-5″) ，67. 3 (C-6″) ，101. 2 (C-1) ，
70. 8 (C-2) ，71. 1 (C-3) ，72. 3 (C-4) ，68. 7 (C-
5) ，18. 2 (C-6)。以上数据与文献报道［14-15］的基
本一致，故鉴定为山萘酚-3-O-芸香糖苷(kaempferol-
3-O-β-D- rutinoside)。
化合物 5 黄色粉末(MeOH) ，mp 230 ～ 232
℃，1H-NMR (600 MHz，DMSO-d6)δ:6. 20 (1H，s，
H-6) ，6. 45 (1H，s，H-8) ，6. 94 (2H，d，J = 8. 7 Hz，
H-3，5) ，8. 04 (2H，d，J = 8. 7 Hz，H-2，6)。13 C-
NMR (150 MHz，DMSO-d6)δ:147. 2 (C-2) ，136. 0
(C-3) ，176. 2 (C-4) ，161. 2 (C-5) ，98. 5 (C-6) ，
164. 2 (C-7) ，93. 9 (C-8) ，156. 7 (C-9) ，103. 4 (C-
10) ，122. 1 (C-1) ，129. 9 (C-2，6) ，115. 8 (C-3，
5) ，159. 5 (C-4)。以上数据与文献报道［11，16］的基
本一致，故鉴定为山萘酚(kaempferol)。
化合物 6 黄色粉末(MeOH) ，1H-NMR (600
MHz，DMSO-d6)δ:6. 20 (1H，d，J = 1. 8 Hz) ，6. 45
(1H，d，J = 1. 8 Hz) ，7. 65 (1H，d，J = 1. 8 Hz) ，
6. 87 (1H，d，J = 6 Hz) ，7. 51 (1H，dd，J = 6，1. 8
Hz)。13 C-NMR (150 MHz，DMSO-d6)δ:145. 5 (C-
2) ，136. 2 (C-3) ，176. 3 (C-4) ，156. 6 (C-5) ，98. 6
(C-6) ，164. 3 (C-7) ，93. 8 (C-8) ，161. 2 (C-9) ，
103. 5 (C-10) ，122. 4 (C-1) ，115. 5 (C-2) ，147. 3
(C-3) ，148. 2 (C-4) ，116. 1(C-5) ，120. 4(C-6)。
以上数据与文献［11］报道的基本一致，故鉴定为槲
皮素(quercetin)。
化合物 7 橘红色粉末(MeOH) ，mp 219. 3 ～
220. 1 ℃，1H-NMR (600 MHz，DMSO-d6) δ:6. 99
(1H，d，J = 2. 4 Hz) ，7. 27 (1H，d，J = 2. 4 Hz) ，
7. 44(s，1H) ，7. 14 (s，1H) ，2. 39 (s，3H) ，5. 04
(1H，d，J = 7. 5)。13 C-NMR (150 MHz，DMSO-d6)
δ:161. 5 (C-1) ，124. 6 (C-2) ，147. 4 (C-3) ，119. 7
(C-4) ，108. 8 (C-5) ，164. 6(C-6) ，108. 8 (C-7) ，
161. 2 (C-8) ，186. 9 (C-9) ，182. 6 (C-10) ，136. 9
(C-11) ，114. 9 (C-12) ，113. 8 (C-13) ，132. 6
(C-14) ，21. 8 (-CH3) ，101. 2 (C-1) ，73. 7(C-2) ，
76. 8(C-3) ，69. 9(C-4) ，77. 7(C-5) ，61. 1(C-6)。
以上数据与文献［17-18］报道的基本一致，故鉴定为
大 黄 素-8-O-β- D-葡 萄 糖 苷 (emodin-8-O-β-D-
glucopyranoside)。
4 化合物清除抗氧化活性(ABTS)自由基的作用
采用 ABTS 法对化合物 1 ～ 7 的体外抗氧化活
性进行了评价，方法参照 Roberta 等［19］的报道并作
了相应的改动。配置好的 ABTS 自由基稳定液用水
稀释，使其在 734 nm 下吸光度为 0. 7 ± 0. 02。测定
时，在比色皿中加入 10 μL 不同浓度的样品，再加入
490 μL 的 ABTS + 工作液，混合 10 s，30 ℃ 静置 6
min，在 734 nm 波长下读取吸光度，每份样品平行操
作 3 次。以 500 μL 的无水乙醇作为空白，以 490 μL
ABTS +溶液与 10 μL 无水乙醇混合后的吸光度为对
照，计算清除率。
结果表明在 2 g·L － 1起始质量浓度下，只有化合
物 1，5，6 表现出较好的清除自由基能力，清除率
均 ＞ 85%，而化合物 2，3，4，7 仅表现出微弱的清除
自由基能力，清除率均低于 30%;与阳性对照 Trolox
［半数抑制率(IC50)= 0. 44 mmol·L
－ 1］相比，化合物
1，5，6 的 IC50分别为 8. 72，1. 53，0. 563 mmol·L
－ 1，
说明化合物 1 和 5 的清除 ABTS 自由基能力一般，
化合物 6 表现出较好的清除 ABTS 自由基能力。总
体看来，柳叶蜡梅叶中的黄酮苷元比黄酮苷类化合
物表现出较好的体外抗氧化活性。
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［责任编辑 邹晓翠］
［收稿日期］ 20110816(010)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81073142) ;湖南省教育厅重点项目(09A068) ;湖南省自然基金重点项目(11JJ2055)
［第一作者］ 曾姣丽，在读硕士研究生，主要从事中药药剂及其质量控制研究，Tel:0731-5381372，E-mail:zengjiaoli295 @ 163. com
［通讯作者］ * 贺福元，教授，硕士生导师，Tel:13787213681，E-mail:pharmsharking@ tom． com
双黄连注射剂中黄芩苷致敏原性的研究
曾姣丽1，贺福元1，2* ，唐昱1，段晓鹏 1，王海琴1，谢相贵1，包小燕1
(1. 湖南中医药大学药学院，长沙 410208;2. 湖南中医药大学药学院中药药性与药效国家中医药
管理局重点实验室，长沙 410208)
［摘要］ 目的:研究双黄连注射剂中黄芩苷的致敏原性。方法:通过运用酶联免疫双抗夹心和免疫指纹图谱 2 种方法结
合对双黄连注射剂中黄芩苷的致敏原性进行研究。结果:运用酶联免疫双抗夹心法检测黄芩苷的致敏性，结果呈阳性反应;
运用免疫指纹图谱法检测黄芩苷的致敏性，致敏率为 86. 28%。结论:通过运用以上方法结合确定了双黄连注射剂中黄芩苷
为致敏原，建立了快速筛查中药注射剂中致敏原的分析方法。
［关键词］ 黄芩苷;致敏原;酶联免疫;指纹图谱
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)01-0102-05
Study of Allergenicity of Baicalin in Shuanghuanglian Injection
ZENG Jiao-li1，HE Fu-yuan1，2* ，TANG Yu1，DUAN Xiao-peng1，WANG Hai-qin1，
XIE Xiang-gui1，BAO Xiao-yan1
(1. Department of Pharmaceutics，Hunan University of Traditional Chinese Medicine，
Changsha 410208，China;2. Department of Pharmaceutics，Hunan University of Traditional
·201·
第 18 卷第 1 期
2012 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 1
Jan．，2012