全 文 ：　 　 JTCVM
2006年第 2期
　
实验技术
蕨麻多糖的提取 、含量测定和理化性质分析
王谢忠 1 , 胡庭俊 2 ,李晓明1 , 陈炅然 2 , 郑荣梁3
(1. 甘肃农业大学动物医学院 ,甘肃兰州　730070;2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所;
3. 上海高校一氧化氮及炎症医学 E -研究院)
　　中图分类号:S859.7　　　　　 　　文献标识码:A　 　文章编号:1000 - 6354(2006)02 -0034 - 02
　　蕨麻(Poten tilla anserine L. )又名戳玛 、卓玛沙曾 、延寿果
和仙人果等 ,江南称其人参果 , 为蔷薇科植物委陵菜属鹅绒
委陵菜的块根 , 多年生草本 , 广泛分布于我国甘肃 、青海 、宁
夏 、西藏 、山西等十多个省区。全草入药 , 春采性凉 , 秋采性
温 ,有收敛止血 、止咳利痰 、治诸血及下痢 、健脾益胃 、生津止
渴 、益气补血等功用。蕨麻作为藏药历史悠久 , 历代有关蕨
麻的记载已有不少 , 但对其研究只涉及临床应用 、某些药理
作用等。笔者等对蕨麻多糖(PAP)的提取 、含量测定和理化
性质进行了分析 ,现报道如下。
1　材料
1. 1　仪器
索式提取器;岛津 UV - 3000紫外分光光度计;NEXUS
红外分析仪。
1. 2　药材
蕨麻 ,产自青海玉树地区。
2　方法与结果
2. 1　蕨麻多糖的提取
称取干燥蕨麻 ,置索式提取器中, 加入石油醚(60 ～ 90℃)
回流提取 12 h, 脱脂 , 挥干溶媒后 ,取常水浸泡于蒸锅中 , 过
夜 ,加 12倍量的水 , 置电炉上煎煮 1. 5 h, 后将水溶液过滤 ,
重复 3次 ,将 3次所得滤液合并 ,置蒸发皿中蒸发浓缩至 1∶1。
将浓缩液置烧杯中 , 加 5倍量 95%的乙醇 , 低温静置过夜。
将沉淀物置离心管中离心 (3 000 r /m in, 10 m in), 弃上清 ,
加入 95%的乙醇充分搅拌后离心(3 000 r /m in, 10 m in), 弃
上清 , 再依次分别加入无水乙醇 、丙酮 、乙醚充分洗涤后离
心(3 000 r /m in, 10 m in), 弃上清。 将所得沉淀物置平皿
中 , 待乙醚挥发完后所得灰色粉末即为蕨麻粗多糖 , 称重。
得率为 6. 22%。
2. 2　蕨麻多糖的理化性质
2. 2. 1　碘 -碘化钾反应　在白瓷板的凹孔中加入 0. 1%
PAP 200 μl,再加入碘 -碘化钾液 50μl, 观察颜色变化。 以
蒸馏水为阴性对照 , 0. 5%的淀粉指示液为阳性对照。结果
表明 , PAP的碘 -碘化钾反应呈阴性 , 说明 PAP样品中不含
淀粉。
收稿日期:2005 - 11 - 20
项目来源:国家自然科学基金项目资助(批准号:30371056);上海教
委一氧化氮及炎症医学 E -研究院 ( E - 04010)资助
作者简介:王谢忠(1980 - )男 , 在读硕士 , 从事兽医病理学。通讯作
者:胡庭俊
2. 2. 2　茚三酮反应　取 0. 1%的 PAP溶液 1. 0 m l置试管
中 ,加 0. 1%的茚三酮溶液 0. 5 m l,混匀 , 煮沸 1 ～ 3 m in, 观察
颜色变化。以蒸馏水为阴性对照 , 0. 5%的甘氨酸溶液为阳
性对照。结果表明 , PAP的茚三酮反应呈阴性 ,说明 PAP样
品中不含氨基酸或蛋白质。
2. 2. 3　M olish反应　取 0. 1%的 PAP溶液 1. 0 m l, 置试管
中 ,加 2%的 α-萘酚乙醇溶液 (M olish试剂)200 μl, 将试管
倾斜 ,沿试管壁慢慢加浓硫酸 1. 0 m l, 后直立试管 , 观察浓硫
酸与糖溶液交接面颜色的变化。 以蒸馏水为阴性对照 ,
0.5%的淀粉指示液为阳性对照。 结果表明 , PAP的 M olish
反应呈阳性 ,说明 PAP样品中含糖。
2. 2. 4 　红外光谱分析　取蕨麻多糖少许 , KB r压片后于
NEXUS红外分析仪上进行分析。红外光谱在 4 000 ～ 400 cm - 1
区间内扫描 ,有多糖的特征吸收峰 ,在 841 cm - 1的吸收峰说
明 PAP以 α糖苷键连接(图 1)。
图 1　PAP的红外光谱图
2. 3　蕨麻多糖含量测定
采用苯酚 -硫酸法 , 以葡聚糖为标准 , 测定上述蕨麻粗
多糖的总糖含量。
2. 3. 1　制作标准曲线　准确称取标准葡聚糖 20 mg于 500 m l
容量瓶中 ,加水溶解并稀释至刻度 , 分别吸取 0. 4、 0. 6、 0. 8、
1. 0、1. 2、1. 4、1. 6和 1. 8 m l, 置具塞试管中, 各管加蒸馏水至
2. 0 m l,后加 6%苯酚溶液 1. 0 m l, 再快速加入浓硫酸 5. 0 m l,
静置 10 m in, 摇匀 ,室温放置 20 m in,后于 490 nm波长处测定
光吸收度 ,以 2. 0 m l蒸馏水按同样显色操作作为空白对照 ,以
葡聚糖微克数为横坐标 , 以光吸收度为纵坐标 , 绘制标准曲
线。结果对照品在 16 ～ 48μg与光吸收度呈良好线性关系 ,回
归方程为 y=0. 0137x+0. 743( r=0. 995)。
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实验技术
2. 3. 2　样品含量测定　准确称取蕨麻粗多糖 4m g于 100 m l
容量瓶中 ,加水溶解并稀释至刻度 , 吸取 1. 0 m l(相当于多糖
约 40 m g)置具塞试管中 ,按照标准曲线法测定光吸收度 , 重
复操作 5次 ,根据回归方程计算 , 蕨麻粗多糖中总糖含量(相
当于葡聚糖)为 49. 45%。
3　小结
本实验结果表明 ,用热水从蕨麻中提取的 PAP样品得率
为 6. 22%, 总糖含量为 49. 45%, 经 M olish反应和红外光谱
图表明该 PAP样品中含有糖的部分 , 红外光谱图同时还表明
PAP以 α糖苷键连接 , 碘 -碘化钾反应表明该 PAP样品中
不含淀粉 ,茚三酮反应表明该 PAP样品中不含氨基酸或蛋白
质。由此可见 ,本试验所用方法提取的 PAP得率较高。这一
研究结果为 PAP的合理开发利用提供了理论依据 , 具有一定
的参考价值。
参考文献:
[ 1] 纪耀华 ,刘志红 , 程力敏.芦荟多糖的提取与粗多糖中总
糖的含量分析 [ J] . 时珍国医国药 , 2001, 12(5):407.
[ 2] 陈　群 ,杨桂文 , 安利国. 银杏白果多糖的提取 、纯化和
分析 [ J] . 中国药学杂志 , 2002, 37(5):331.
[ 3] 张惟杰.糖复合物生化研究技术 [ M ] . 杭州:浙江大学出
版社 , 1999, 193.
[ 4] 胡庭俊 ,程富胜. 生物活性多糖抗感染免疫的研究概述
[ J] . 中兽医医药杂志 , 2004, 23:63 ～ 65.
[ 5] 田庚元.植物多糖的研究进展 [ J] . 中国中药杂志 , 1995,
20(7):441.
不同喹噁啉类抗菌促生长剂对肉鸡生产性能的影响
周学辉 1 , 曹香林2 ,张　力 3 ,杨志强1 , 梁剑平 1 ,苗小林 1
(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 , 甘肃兰州 　730050;2. 河南师范大学生命科学院;3.江苏畜牧兽医职业技术学院)
　　中图分类号:S859. 7　　 　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000 -6354(2006)02 - 0035 -03
1　材料与方法
1. 1　试验设计与材料
1. 1. 1　试验动物及其分组　选择甘肃省种鸡场 1日龄安
卡红羽肉鸡 320只 , 平均体重为 40. 07 ±1. 94 g, 分为 4个
处理(4组), 经检验各处理间体重差异不显著 (P >0. 05)。
每个处理分为 4个重复 ,每个重复试鸡 20只 。各处理分别
饲喂以下日粮:Ⅰ不添加抗生素日粮(空白对照)、Ⅱ添加
50 mg /kg喹乙醇日粮、Ⅲ添加 50 mg /kg的喹胺醇日粮 , Ⅳ添加
50 mg /kg喹烯酮的日粮。试验在中国农科院兰州畜牧与兽
药研究所进行。
1. 1. 2　试验饲粮　日粮均为干粉料。参照《安卡红羽肉鸡
饲养管理手册》推荐的营养水平进行日粮配制。
1. 1. 3　饲养管理　饲养阶段参照《安卡红羽肉鸡饲养管理
手册》执行 , 采用舍内 4层笼养 ,自由采食和自由饮水的饲养
方式;利用强制风扇对流通风;每天人工光照 23 h,黑暗 1 h。
实验期为 6周 , 1日龄时舍温 28 ～ 29℃,笼底温度为 36 ～ 37℃,
每星期降低 2 ～ 3 ℃,温度不足时 , 采用电炉人工供暖。 相对
湿度在 61% ～ 72%。按常规程序进行消毒及免疫。
1. 2　测定项目及方法
1. 2. 1　增重(ADG)、日采食量(ADFI)、饲料 /增重(F /G)分
别于 7、 14、21、28、35、42日龄进行每组内各重复称重 , 并统
计每周每重复试鸡的采食量 , 剩余料量 。计算出日增重
(ADG)、日采食量(ADFI)、饲料 /增重(F /G)。
收稿日期:2005 -11 - 25
项目来源:科技部技术开发专项———兽用抗菌新药 “喹胺醇 ”的开发
研究(编号:NCSTE - 2002 - JKZX - 246)
作者简介:周学辉(1964 - ),男 ,助理研究员 ,主要从事饲料添加剂研
究。
1. 2. 2　生化指标测定　于 21日龄时在每个处理每重复随
机抽取鸡 2只 ,颈静脉采血 5 m l, 3 000 r /m in离心 15 m in, 分
离血浆 , - 20℃保存待测。 总蛋白采用双缩脲法测定 , 白蛋
白采用溴甲酚绿比色法测定;采血后 , 捕杀试鸡 , 采集胸大
肌 5 g, 装于 Doffer导管 , - 20 ℃保存 , 待测肌肉中 DNA和
RNA。试鸡组织肌肉中 DNA和 RNA的提取采用施密特 -
撒哈泽 -昔来德法 (Schm idt - Thannhauser - Schneide r, 简称
STS法)。然后用紫外分光光度计测定。
1. 3　统计分析
试验数据均采用 spss 6. 0统计软件进行单因子方差分
析和 LSD多重比较。
2　结果与分析
2. 1　不同喹噁啉抗生素对肉鸡生产性能的影响
结果见表 1。由表 1可见 , 添加喹胺醇和喹烯酮组的平
均日增重 、采食量和饲料转化率都明显高于空白组和喹乙醇
组(P <0. 05)。添加喹乙醇组与空白组相比 ,平均日增重 、日
采食量和饲料转化率均差异显著(P <0. 05), 且明显低于添
加喹胺醇和喹烯酮组(P <0. 05)。说明喹胺醇和喹烯酮有促
生长作用。
2. 2　不同抗生素对血浆总蛋白 、白蛋白的影响
结果见表 2。由表 2可见 , 添加不同的抗生素后对肉鸡
血浆中总蛋白和白蛋白含量有明显的影响 ,饲喂喹胺醇和喹
烯酮的鸡血浆总蛋白和白蛋白含量有增加的趋势 , 但与对照
组差异并不显著(P >0. 05),这一结果与 Pond和 Yen报道的
结果一致 ,在猪饲料中添加 55 mg /kg卡巴氧后 , 测定血浆中
的总蛋白 、白蛋白 、血浆尿素氮等血浆生化指标与对照组差
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