全 文 ：＊国家博士点基金项目(批准号:20010610047)
＊＊通讯联系人
作者简介:陈东林 ,男 ,硕士 ,讲师 ,从事天然药物化学研究。
直缘乌头根中生物碱成分的研究＊
陈东林 ,简锡贤 ,王锋鹏＊＊
四川大学华西药学院 , 四川 成都 610041
　　摘要:目的　研究直缘乌头(Aconitum transsectum Diels.)根中的生物碱成分 。方法　采用 pH 梯度 、中压柱层
析 、常压硅胶柱层析及离心薄层层析法。结果　分得 11 个已知二萜生物碱 , 由光谱法分别鉴定为:滇乌碱(yuna-
conitine)、印乌碱(indaconitine)、黄草乌碱甲(vilmorrianine A)、黄草乌碱丙(vilmorrianine C)、草乌甲素(crassialine A)、膝
乌碱(geniconitine)、查斯曼宁(chasmanine)、8-去乙酰滇乌碱(8-deacetylyunaconitine)、塔拉萨敏(talatisamine)、14-乙
酰塔拉萨敏(14-acetyltalatisamine)和 chasmaconitine。结论　黄草乌碱甲和 chasmaconitine 是首次从该植物中分离得
到。
关键词:直缘乌头;C19-二萜生物碱;成分研究
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2002)05-0326-04
　　直缘乌头(Aconitum transsectum Diels.)又名大草
乌 、小黑牛 ,产于中国云南西北部 ,根有大毒 ,可药
用 ,民间用于治疗风湿等症[ 1] ,主要用作工业生产草
乌甲素的原料。有文献曾报道过该种植物的生物碱
成分[ 2] 。直缘乌头提取了草乌甲素后的总碱(工厂
俗称下脚料)资源丰富 ,我们对其中的生物碱成分进
行深入系统的植化研究 ,以期从中分离出未知的微
量成分以供药理 、药效活性筛选 ,从而发现高效低毒
的天然药物 。从草乌甲素下脚料中分离得到 15 个
单体化合物 ,根据光谱和化学方法鉴定了其中 11个
已知去甲二萜生物碱成分 ,其中有一种生物碱的含
量占总碱含量的 80%以上 ,可为二萜生物碱的结构
修饰提供充足的原料 。
1　实验部分
1.1　仪器 、材料及试剂
核磁共振仪(Bruker公司 ,AC-E 200 ,Varian 公
司 ,UNION 400/54);中压柱层析仪(Bǜchi 公司 , B-
681型泵);离心薄层层析仪(北京青云仪器厂 , LFZ
-1型)。硅胶G 、H(10 ～ 40 μ,分析纯 ,青岛海洋化
工厂);氯仿(工业氯仿重蒸);石油醚 、丙酮 、甲醇(分
析纯 , 成都化学试剂厂)。下脚料(云南屏边药厂)。
1.2　下脚料的前处理
直缘乌头总碱(578 g ,草乌甲素工业生产下脚
料),以 3%HCl 2 L溶解过滤 ,滤液用活性炭脱色两
次 , 过滤;活性炭部分用氯仿 150 ml 分三次洗涤 ,
氯仿液加入0.5 mol·L-1HCl 200 ml振摇 , 静止分层
后水液与前两次滤液合并 , 用浓氨水调 pH 7 , 以氯
仿萃取 。氯仿液减压浓缩 , 发泡抽干得白色粉末状
总生物碱Ⅰ(23.6 g)。水层再用浓氨水碱化至 pH>
9 , 以氯仿萃取 , 氯仿液减压浓缩抽干得淡黄色固
体状总生物碱Ⅱ(501 g)。
1.3　单体生物碱的分离
总生物碱Ⅰ(20.5 g)经中压柱层析(硅胶 500 g ,
石油醚-丙酮 10∶1 ～ 1∶2梯度洗脱), 洗脱液合并
浓缩得A 、B 、C 、D 、E 、F 、G 、H 、I 、J共11份。从F 部分
得到化合物 1(白色无定形粉末 , 7.21 g)。B部分
(400 mg)经离心薄层层析 , 以石油醚-丙酮 9∶1洗
脱 , 得 B-1和化合物5(白色无定形粉末 , 80 mg)。
B-1部分(135 mg)经离心薄层层析(石油酮-丙酮
10∶1)得 B-1-1部分(80 mg),再经离心薄层层析 ,
流动相为氯仿-甲醇(100∶1), 得化合物 10(白色无
定形粉末 , 12 mg)和化合物 11(白色无定形粉末 ,
20 mg)。C部分(1.28 g)经离心薄层层析 , 以石油
醚-丙酮 9∶1洗脱 , 得 C-2部分(100 mg),再经柱
层析 , 石油酮-丙酮-二乙胺(90∶10∶1)洗脱得化
合物 9(白色无定形粉末 , 15 mg)和化合物 4(白色
无定形粉末 , 10 mg)。D部分(1.72 g)经离心薄层
层析 , 石油醚-丙酮(6∶1)洗脱 , 得化合物 3(白色
无定形粉末 , 55 mg)和化合物 2(白色无定形粉末 ,
50 mg)。I 部分(741 mg)经柱层析 , 氯仿-甲醇(97∶
3)洗脱 , 再经离心薄层层析 ,流动相为石油醚-丙
酮(4∶1), 得化合物 8(白色无定形粉末 , 18 mg)。
取总生物碱Ⅱ(10 g)用石油酮-丙酮(10∶1)热
溶 , 过滤 , 得滤液A和沉淀 B。滤液 A静置结晶得
化合物 7(白色针状晶体 , 6.5 g)。沉淀 B(550 mg)
华西药学杂志
W C J · P S 　2002 , 17(5):326～ 328　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2002.05.002
经离心薄层层析 , 以氯仿-甲醇(97∶3 ～ 95∶5)梯度
洗脱 , 得 B-2部分(83 mg),再经柱层析 , 流动相为
氯仿-甲醇-二乙胺(98∶2∶1)洗脱 , 得化合物 6
(白色无定形粉末 , 18 mg)。
1 R1=OH R2=OCH3 R3=OAc R4=OH R5=OAs
2 R1=OH R2=OCH3 R3=OAc R4=OH R5=OBz
3 R1=OH R2=OCH3 R3=OAc R4=H R5=OAs
4 R1=H R2=OCH3 R3=OAc R4=H R5=OAs
5 R1=H R2=OCH3 R3=OAc R4=OH R5=OAs
6 R1=H R2=OH R3=OH R4=H R5=OAs
7 R1=H R2=OCH3 R3=OH R4=H R5=OH
8 R1=OH R2=OCH3 R3=OH R4=OH R5=OAs
9 R1=H R2=H R3=OH R4=H R5=OH
10 R1=H R2=H R3=OH R4=H R5=OAc
11 R1=H R2=OCH3 R3=OAc R4=OH R5=OBz
1.4　生物碱的结构鉴定
1.4.1　滇乌碱 1　白色无定形粉末 , 其分子式为
C35H49NO11 , 1H NMR(200 MHz , CDCl3)δ:1.09(3H , t ,
J =7.0Hz , NCH2CH3), 1.30(3H , s ,OCOCH3), 3.14 ,
3.24 , 3.28 ,3.52(各3H , s ,4×OCH3), 3.85(3H , s , Ar
-OCH3), 4.02(1H , d , J =6.0Hz , 6β -H), 4.85
(1H ,d , J =5.0Hz , 14β -H), 6.90 ～ 7.99(4H , AA
BB , J =9.0Hz , Ar-H)。氢谱数据与文献[ 3]报道
一致。与滇乌碱对照品 TLC比较(S1 , 氯仿-甲醇
=95∶5;S2 , 石油醚-丙酮=1∶1;S3 , 乙醚-丙酮=9
∶1),Rf值相同 。
1.4.2　印乌碱 2　白色无定形粉末 , 其分子式为
C34H47NO10 , 1H NMR(200 MHz , CDCl3)δ:1.10(3H ,
t , J =7.2Hz , NCH2CH3), 1.29(3H , s , OCOCH3),
3.16 ,3.26 ,3.30 , 3.55(各 3H , s ,4×OCH3),4.03(1H ,
d , J =6.6Hz , 6β -H),4.91(1H , d , J =5.0Hz , 14β -
H), 7.40 ～ 8.08(5H , m , Ar -H)。氢谱数据与文
献[ 4]报道一致。与印乌碱对照品TLC比较(S1 ,氯仿
-甲醇=95∶5;S2 , 石油醚-丙酮=2∶1;S3 , 乙醚-
丙酮=9∶1), Rf值相同 。
1.4.3　黄草乌碱甲 3　白色无定形粉末 ,分子式为
C35H49NO10 。1H NMR(200 MHz , CDCl3)δ:1.09(3H ,
t , J =7.0Hz , NCH2CH3), 1.41(3H , s , OCOCH3),
3.19 ,3.26 , 3.30 , 3.39(各 3H , s , 4×OCH3), 3.86
(3H , s ,Ar-OCH3),4.12(1H ,d , J =6.4Hz , 6β -H),
5.05(1H , t , J =5.0Hz , 14β -H), 6.92-8.01(4H ,
AA BB , J =9.0Hz , Ar-H)。13C NMR(50 MHz , CD-
Cl3)δ:83.4(d , 1), 33.1(t , 2), 71.7(d , 3), 43.0
(s , 4), 46.7(d , 5), 82.2(d , 6), 44.7(d , 7), 85.7
(s , 8), 48.6(d , 9), 43.5(d , 10), 50.4(s , 11),
28.3(t , 12), 39.1(d , 13), 75.2(d , 14), 38.0(t ,
15), 82.6(d , 16), 61.4(d , 17), 77.1(t , 18), 48.6
(t , 19), 47.6(t , 21), 13.1(q , 22), 55.6(q , 1-
OCH3), 57.8(q , 6-OCH3), 56.5(q , 16-OCH3),
59.0(q , 18-OCH3), 55.3(q , 4 -OCH3), 169.7(s ,
OCOCH3), 21.7(q , OCOCH3), 165.9(s , Ar-CO),
122.7(s , 1 ), 131.6(d , 2 ), 113.6(d , 3 ), 163.3
(s , 4 ), 113.6(d , 5 ), 131.6(d , 6 )。以上数据与
文献[ 5] 基本一致 。但是 ,C-13与 C-15的化学位
移值与文献正好相反 ,根据 DEPT 谱可将文献值修
订为C-13(δ:39.1 d);C-15(δ:38.0 t)。
1.4.4　黄草乌碱丙 4　白色无定形粉末 ,分子式为
C35H49NO9。1H NMR(200MHz , CDCl3)δ:1.08(3H , t ,
J =7.0Hz , NCH2CH3), 1.43(3H , s ,OCOCH3),3.20 ,
3.26 ,3.29 , 3.39(各 3H , s ,4×OCH3),3.85(3H , s ,Ar
-OCH3),4.10(1H ,d , J =6.8Hz ,6β-H), 5.04(1H ,
t , J =5.0Hz , 14β-H), 6.90 ～ 7.99(4H ,AA BB , J
=9.0Hz ,Ar-H)。氢谱数据与文献[ 5]一致。与黄
草乌碱丙对照品 TLC 比较(S1 ,氯仿-甲醇=95∶5;
S2 , 石油醚-丙酮=2∶1;S3 ,乙醚-丙酮=9∶1), Rf
值相同 。
1.4.5　草乌甲素 5　白色无定形粉末 ,其分子式为
C35H49NO10 。1H NMR(200 MHz , CDCl3)δ:1.06(3H ,
t , J =7.0Hz , NCH2CH3), 1.30(3H , s , OCOCH3),
3.12 ,3.23 ,3.25 ,3.49(各 3H , s ,4×OCH3),3.83(3H ,
s ,Ar-H),3.94(1H ,d , J =6.6Hz , 6β -H),4.84(1H ,
d , J =5.0Hz , 14β-H), 6.90 ～ 7.98(4H ,AA BB , J
=9.0Hz ,Ar-H)。13C NMR(50 MHz , CDCl3)δ:84.9
(d , 1),26.3(t , 2), 35.8(t , 3), 39.1(s , 4), 49.0(d ,
5),83.0(d ,6), 49.5(d , 7), 85.5(s ,8), 41.0(d , 9),
45.1(d , 10), 50.2(s , 11), 34.8(t , 12), 74.8(s , 13),
78.5(d ,14),39.3(t , 15), 83.7(d , 16), 61.9(d , 17),
80.3(t , 18), 53.6(t , 19), 49.1(t , 21), 13.4(q , 22),
56.1(q , 1-OCH3), 58.7(q , 6-OCH3), 57.7(q , 16
-OCH3), 59.1(q , 18 -OCH3), 55.4(q , 4 -
327第 5期 陈东林 ,等。直缘乌头根中生物碱成分的研究 　　　
OCH3),169.8(s ,OCOCH3), 21.6(q ,OCOCH3), 166.1
(s ,ArCO),122.7(s ,1 ), 131.7(d ,2 ),113.7(d ,3 ),
163.4(s ,4 ),113.7(d ,5 ),131.7(d , 6 )。以上数据
与文献[ 6]报道基本一致。
1.4.6 　膝乌碱 6 　白色无定形粉末 , 分子式为
C32H45NO8 。1H NMR (200 MHz , CDCl3)δ:1.10(3H ,
t , J =7.0Hz , NCH2CH3),3.19 ,3.26 ,3.29(各 3H , s ,
3×OCH3),3.83(3H , s ,Ar-OCH3),4.77(1H , d , J =
6.8Hz , 6β -H), 5.09(1H , δ, J =4.6Hz , 14β-H),
6.89 ～ 7.94(4H , AA BB , J =8.6Hz , Ar-H)。氢
谱数据与文献[ 7] 报道一致。与膝乌碱对照品 TLC
比较(S1 , 氯仿-甲醇=95∶5;S2 , 石油醚-丙酮-
二乙胺=2∶1∶1;S3 , 乙醚-丙酮=9∶1),Rf值相同。
1.4.7　查斯曼宁7　白色针状结晶 ,其分子式为
C25H41NO6 , 1H NMR(200 MHz , CDCl3)δ:1.05(3H ,
t , J =7.2Hz , NCH2CH3), 3.22 ,3.29 , 3.29 ,3.32(各
3H , s ,4×OCH3), 4.11(1H , t , J =4.6Hz , 14β -H),
4.18(1H , t , J =7.0Hz , 6β -H),4.56(1H , d ,加 D2O
后消失)。13C NMR(50 MHz , CDCl3)δ:86.2(d , 1),
25.9(t ,2), 35.3(t , 3), 39.5(s , 4), 48.6(d , 5),82.4
(d ,6),52.6(d , 7), 72.4(s , 8), 50.4(d , 9), 37.9(d ,
10),50.3(s , 11), 28.4(t , 12), 45.6(d ,13), 75.4(d ,
14), 38.8(t , 15), 82.1(d ,16),62.6(d ,17),80.8(t ,
18),53.8(t ,19), 49.3(t ,21),13.7(q ,22), 56.4(q ,1
-OCH3), 57.3(q , 6-OCH3), 56.2(q , 16-OCH3),
59.2(q ,18-OCH3)。以上数据与文献[ 8]报道基本一
致。
1.4.8　8-去乙酰滇乌碱 8　白色无定形粉末 ,分
子式为 C33H47NO10 。1H NMR (200 MHz , CDCl3)δ:
1.11(3H , t , J =7.0Hz , NCH2CH3), 3.25 , 3.28 ,
3.30 , 3.40(各 3H , s , 4 ×OCH3), 3.85(3H , s , Ar -
OCH3), 4.07(1H , d , J=6.6 Hz , 6β -H), 5.12(1H ,
d ,J =4.8Hz , 14β -H), 6.92 ～ 7.98(4H ,AA BB ,
J =8.8Hz , Ar-H)。氢谱数据与文献[ 9]报道一致 。
与8-去乙酰滇乌碱对照品 TLC比较(S1 , 氯仿-甲
醇=95∶5;S2 ,石油醚-丙酮=1∶1;S3 , 乙醚-丙酮
=9∶1), Rf值相同 。
1.4.9　塔拉萨敏9　白色无定形粉末 ,其分子式为
C24H39NO5 , 1H NMR(200 MHz , CDCl3)δ:1.06(3H ,
t , J =7.2Hz ,NCH2CH3),3.27 ,3.30 , 3.35(各 3H , s ,3
×OCH3), 3.63(1H , s , 加 D2O 后消失 , OH), 4.13
(1H , t , J =4.8Hz ,14β-H)。氢谱数据与文献[ 10] 报
道一致 。与塔拉萨敏对照品TLC比较(S1 ,氯仿-甲
醇=95∶5;S2 ,石油醚-丙酮=2∶1;S3 ,乙醚-丙酮=
9∶1), Rf值相同。
1.4.10　14-乙酰塔拉萨敏 10　白色无定形粉末 ,
分子式 C26H41NO5 。1H NMR (200 MHz , CDCl3)δ:
1.01(3H , t , J =7.0Hz , NCH2CH3), 2.05(3H , s ,
CH3COO),3.22 ,3.26 ,3.30(各 3H , s ,3×OCH3),4.86
(1H , t , J =4.8Hz , 14β -H)。氢谱数据与文献[ 10]报
道一致 。与14-乙酰塔拉萨敏对照品TLC 比较(S1 ,
氯仿-甲醇=95∶5;S2 ,石油醚-丙酮=2∶1;S3 ,乙醚
-丙酮=9∶1), Rf值相同 。
1.4.11　chasmaconitine 11　白色无定形粉末 ,分子
式 C34H47NO9 , 1H NMR (200 MHz , CDCl3)δ:1.10
(3H , t , J = 7.2Hz , NCH2CH3), 1.33(3H , s ,
CH3COO), 3.18 , 3.28 , 3.37 , 3.57(各 3H , s , 3 ×
OCH3),4.03(1H ,d , J =6.6Hz , 6β-H), 4.91(1H , t , J
=5.0Hz ,14β -H), 7.40 ～ 8.05(5H ,m ,Ar-H)。氢
谱数据与文献[ 11]报道一致。与 chasmaconitine 对照
品 TLC 比较(S1 ,氯仿-甲醇=95∶5;S2 ,石油醚-丙
酮=2∶1;S3 ,乙醚-丙酮=9∶1), Rf值相同 。
2　结论
从草乌甲素工业生产后的总碱中共分离得到
15个单体化合物 ,其中 11个为己知去甲二萜生物
碱 ,黄草乌碱甲和 chasmaconitine 是首次从该植物中
分离得到 ,而其主要成分查斯曼宁的含量占总碱的
80%以上。
参 考 文 献
1　中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志 [M] .第 27 卷.北
京:科学出版社 , 1979.113 , 228
2　SZ Zheng , LM Gao , XJ Hao , et al.Norditerpenoid alkaloids from A-
conitum transsectum [ J] .Phytochemistry , 1997 , 46(3):951
3　LS Ding , YZ Chen , FE Wu , et al.A diterpenoid alkaloid f rom Aconi-
tum Vilmoriniaum var.Patentipilum [ J] .Phytochemistry , 1990 , 29
(11):3694
4　KS Khetwal , HK Desai , BS Joshi.Norditerpenoid alkaloids from the
aerial parts of Aconitum balfourii Stapf [ J] .Heterocycles, 1994 , 38
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5　杨崇仁 ,郝小江 ,王德祖 ,等.黄草乌的生物碱研究 Ⅰ 黄草乌碱
甲和碱丙的化学结构 [ J] .化学学报 , 1981, 39(2):147
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物学报 , 1985 , 27(5):504
(下转第 331页)
328　　　 华 西 药 学 杂 志 第 17卷
PRELIMINARY STUDY ON PIEZOELECTRIC CRYSTAL
DNA SENSOR OF LEISHMANIA PROTOZOAN
XING Hao-yang1 , CHEN Xiang-dong2 , MA Yin1 , Lǜ Tai-ping3
1.West China School of Preclinical Medicine and Forensic Medicine , Sichuan University , Chengdu 610041, China
2.Sichuan Province Key Lab for Transducer Technology &Engineering , University of Electronic Science &Technology , Chengdu 610054 , China
3.West China School of Pharmacy , Sichuan University , Chengdu 610041 , China
　　Abstract:OBJECTIVE　To develop a piezoelectric crystal
DNA sensor of Leishmania protozoan.METHODS　The DNA sen-
sor was prepared by immobilizing DNA probe on surface of piezo-
electric quartz crystal.The resonant frequencies were measured in
different hybridization time and for different concentrations of com-
plementary DNA solution.RESULTS　The ■f increased with the
prolongation of hybridization time within 5 h , and an interrelation be-
tween the concentrations of DNA and ■f was observed in the low
concentration range.CONCLUSION 　 The piezoelectric crystal
DNA sensor of Leishmania protozoan can be used in the detection of
Leishmania protozoan in some circumstances.
　　Key words:Leishmania protozoan;LACK gene;DNA sensor;Piezoelectric quartz cry stal
CLC number:TQ460.7+2 Document code:A Article ID:1006-0103(2002)05-0329-03
(上接第 328 页)
8　SW Pelletier , WH De Camp , Z Djarmati.Proof of the st ructure of the
diterpene alkaloid chasmanine:the crystal and molecular st ructure of
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收稿日期:2002-06
C19-DITERPENOID ALKALOIDS FROM ACONITUM TRANSSECUTUM DIELS.
CHEN Dong-lin , JIAN Xi-xian , WANG Feng-peng
West China School of Pharmacy , Sichuan University , Chengdu 610041, China
　　Abstract:OBJECTIVE　To isolate C19-diterpenoid alkaloids
from the residue of the Crassialine A being industrially extracted
from Aconitum transsecutum Diels.METHODS 　The isolation
method were pH gradient extraction , MPLC , chromatotron and silica
column chromatography.The structures are identified on the basis of
spectral data.RESULTS　Eleven known C19-diterpenoid alkaloids
yunaconitine , indaconitine , vilmorrianine A , vilmorrianine C.cras-
sialine A , geniconitine , chasmanine , 8-deacetylyunaconitine , ta-
latisamine , 14-acetyltalatisamine and chasmaconitine were isolat-
ed.CONCLUSION　Vilmorrianine A and chasmaconitinewere iso-
lated from the Aconitum transsectum Diels.for the first time.
　　Key words:Aconitum transsecutum Diels;C19-diterpenoid alkaloids;Component analysis
CLC number:R284.1 Document code:A Article ID:1006-0103(2002)05-0326-04
331第 5期 幸浩洋 ,等。利什曼原虫 DNA压电晶体传感器的初步研究