全 文 ：［收稿日期］ 20131115(016)
［基金项目］ 吉林市科技计划项目(201162512)
［第一作者］ 曲正义，硕士，助理研究员，从事药效质量评价研
究，Tel:0431-81919571，E-mail:qzy209@ 163． com
［通讯作者］ * 王英平，博士，教授，从事药用植物资源及质量
评价研究，Tel:0431-81919571，E-mail:yingpingw@
126． com
ＲP-HPLC同时测定向日葵列当中
苯乙醇苷类化合物 crenatoside和类叶升麻苷
曲正义，金银萍，孙成贺，李亚丽，姚春林，王英平*
(中国农业科学院特产研究所，长春 130112)
［摘要］ 目的:建立同时测定向日葵列当中 crenatoside和类叶升麻苷含量的 HPLC法。方法:采用反相高效液相色谱法，
用 Agilent ZOＲBAX SB-C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)柱，以乙腈-0. 01%冰醋酸溶液(18∶ 82)为流动相，流速1. 0 mL·min
－1，检
测波长 330 nm，柱温 30 ℃，在 30 min内分离检测了这两种化合物。结果:ＲP-HPLC测定的 crenatoside和类叶升麻苷线性范围
分别在在 1. 08 ～ 16. 2 μg(r = 0. 999 9)和 1. 00 ～ 15. 0 μg(r = 0. 999 8) ，平均加样回收率分别为 97. 23%，96. 27%，ＲSD分别为
1. 21%，1. 66%。结论:该方法简便，精密度、重复性良好，结果准确可靠，可以作为向日葵列当及其相关制剂的质量控制。
［关键词］ 向日葵列当;苯乙醇苷类化合物;crenatoside;类叶升麻苷
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)10-0087-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014100087
Simultaneous Determination of Crenatoside and Acteoside in
Orobanche cumana by ＲP-HPLC
QU Zheng-yi，JIN Yin-ping，SUN Cheng-he，LI Ya-li，YAO Chun-lin，WANG Ying-ping*
(Institute of Special Wild Economic Animal and Plant Science，Changchun 130112，China)
［Abstract］ Objective:To establish a ＲP-HPLC method for simultaneous determination of phenylethanoid
glycosides crenatoside and acteoside in Orobanche cumana． Method:The analysis was performed on a Agilent
ZOＲBAX SB-C18column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)with CH3CN-0. 01%HOAc (18∶ 82)as mobile phase at a
flow rate of 1. 0 mL·min －1and at a column temperature of 30 ℃，330 nm as the detection wavelength，the well
separation was achieved in 30 min． Ｒesult:Crenatoside showed good relationship at the range of 1. 08-16. 2 μg
(r = 0. 999 9) ，and acteoside at the range of 1. 00-15. 0 μg (r = 0. 999 8)． The average recovery were 97. 23%
and 96. 27%， relative standard derivation (ＲSD) of 1. 21% and 1. 66% for crenatoside and acteoside．
Conclusion:The proposed method is simple， rapid，accurate and reliable． It can be used for the quality
evaluation of O． cumana and its preparation．
［Key words］ Orobanche cumana;phenylethanoid;glycoside;crenatoside;acteoside
向日葵列当主要分布于黑龙江、吉林、北京、甘
肃、辽宁、内蒙古、河北、山西、陕西、青海、新疆等省
区［1-2］。列当属多种植物在我国民间以作为药用，
具有强筋壮骨、补肾助阳、抗疲劳、改善脑组织循环、
增强免疫及雄性激素样等作用，其主要活性成分为
苯乙醇苷类物质［3-5］。如含有向日葵列当的国家中
药保护品种脑塞通，在治疗中风方面具有很好疗效。
作者及赵梦霞对列当属植物向日葵列当进行了化学
成分研究，从中分离鉴定了 4 个苯乙醇苷类化合物，
分别为 crenatoside、isocrenatoside、类叶升麻苷和 3-
O-methyl-crenatoside。其中 crenatoside 和类叶升麻
苷含量较高，通过药理实验证明 crenatoside 和类叶
升麻苷均具有显著的抗氧化、抗菌活性［6-8］，类叶升
·78·
第 20 卷第 10 期
2014 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 10
May，2014
麻苷还具有雌激素 /抗雌激素样作用、调节免疫、壮
阳、增强记忆力等多种生物活性［9-11］。
国内外对向日葵列当化学成分及药理活性研究
较少，未建立有效的药材质量控制方法，本实验参考
同科植物建立了向日葵列当中 crenatoside 和类叶升
麻苷 2 种苯乙醇苷类物质的反相高效液相测定法，
为向日葵列当的进一步开发利用提供依据。
1 材料
10AvP高效液相色谱仪(日本岛津) ，包括 LC-
10AtvP型液相色谱泵、SIL-10AdvP 型自动进样器、
CTO-AvP 型色谱柱恒温箱、CLASS-vP 色谱工作
站)。Crenatoside对照品为本课题组从向日葵列当
中分离纯化得到，按本实验色谱条件，峰面积归一化
法计算纯度 ＞ 98%，类叶升麻苷购自四川维克奇生
物科技有限公司(批号 120921)。乙腈为色谱纯，水
为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。试验中所
用药材 2013 年 9 月采自吉林省长岭县，由中国农业
科学院特产研究所姚春林研究员鉴定为列当科列当
属植物向日葵列当 Orobanche cumana Wallr． 的
全草。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent ZOＲBAX SB-C18色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 01%冰醋
酸溶液(18∶ 82) ，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检
测波长 330 nm，进样量 20 μL。在上述条件下，
crenatoside和类叶升麻苷的保留时间分别为 23. 9，
15. 1 min，无杂质干扰，二者分离度良好。见图 1。
A. 对照品;B. 供试品;
1. 类叶升麻苷;2. crenatoside
图 1 向日葵列当 HPLC
2. 2 Crenatoside和类叶升麻苷对照品储备液的制
备 精密称取 crenatoside对照品 5. 4 mg置10 mL量
瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成每 1
mL含0. 540 0 mg的溶液。精密称取类叶升麻苷对照
品 5. 0 mg置 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，配制成每 1 mL含 0. 500 0 mg的溶液。
2. 3 样品溶液的制备 精密称取干燥，粉碎并过
40 目筛的向日葵列当药材 0. 50 g，置 100 mL 具塞
锥形瓶中，精密加入 80%乙醇溶液 50 mL，称定质
量，热回流提取 60 min，放至室温，用 80%乙醇补足
失重，混匀，过滤，回收浓缩滤液，定容于 10 mL的量
瓶中，摇匀，即得。
2. 4 线性关系考察 精密吸取 2. 2 项下配置的
crenatoside、类叶升麻苷混合储备液 2，5，10，20，
30 μL依 2. 1 项下色谱条件测定，以对照品质量(X)
对色谱峰面积(Y)做标准曲线，得回归方程分别为
crenatoside Y = 1. 996 × 106X + 4. 730 × 106，r =
0. 999 9;类叶升麻苷 Y = 9. 235 × 105X + 1. 973 ×
105，r = 0. 999 8。
2. 5 精密度试验 取供试品溶液连续进样 6 次，按
2. 1 项下色谱条件测定，结果 crenatoside 及类叶升
麻苷峰面积的 ＲSD 分别为 1. 32%，1. 65%，表明仪
器精密度良好。
2. 6 重复性试验 取同一批药材粉末 6 份，按 2. 3
项下制备方法制备，按 2. 1 项下色谱条件平行测定，
结果 crenatoside及类叶升麻苷含量的 ＲSD 分别为
1. 16%，1. 53%，表明方法重复性良好。
2. 7 回收率试验 精密称取 0. 50 g 已测得含量的样
品(crenatoside 2. 86 mg·g －1，类叶升麻苷 7. 02 mg·g －1)
6 份，其中 5 份分别加入 crenatoside 约 1. 41 mg，类
叶升麻苷约 3. 53 mg，第 6 份作对照，按照 2. 3 项下
制备方法制备样品溶液，并按 2. 1 项下色谱条件测
定，计算回收率，得到 crenatoside 的平均回收率为
97. 23%，ＲSD 1. 21%;类叶升麻苷的平均回收率为
96. 27%，ＲSD 1. 66%，表明该方法准确率高。试验
结果见表 1。
2. 8 样品溶液的稳定性试验 取新制备的样品溶
液分别在放置 0，2，4，8，12 h 后进样分析，记录峰面
积，结果 crenatoside及类叶升麻苷峰面积的 ＲSD 分
别为 0. 85%，0. 93%，表明供试品溶液在室温下放
置 12 h内稳定性良好。
2. 9 样品含量测定 精密称取向日葵列当药材粉
末 0. 50 g，按 2. 3 项下方法制备。分别精密吸取混
合对照品溶液(crenatoside 0. 54 g·L －1，类叶升麻苷
0. 50 g·L －1)与供试品溶液各 20 μL，注入高效液相
色谱仪，测定，以外标法计算含量，见表 2。
·88·
第 20 卷第 10 期
2014 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 10
May，2014
表 1 相日蔡刘当中 2 种成分的加样回收率试验
成分
称样量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
crenatoside 0. 500 6 1. 417 1. 415 2. 790 97. 03 97. 23 1. 21
0. 501 3 1. 419 1. 417 2. 771 95. 41
0. 500 9 1. 418 1. 419 2. 797 97. 18
0. 501 2 1. 418 1. 417 2. 813 98. 45
0. 501 5 1. 419 1. 416 2. 808 98. 09
类叶升麻苷 0. 500 6 3. 534 3. 531 7. 027 98. 90 96. 27 1. 66
0. 501 3 3. 539 3. 532 7. 067 98. 67
0. 500 9 3. 536 3. 535 7. 037 99. 03
0. 501 2 3. 538 3. 532 7. 017 98. 50
0. 501 5 3. 541 3. 536 7. 054 99. 35
表 2 向日葵列当中 crenatoside及类叶升麻苷含量测定
样品编号
crenatoside含量
/mg·g － 1
ＲSD
/%
类叶升麻苷含量
/mg·g － 1
ＲSD
/%
130925-1 2. 81 7. 04
130925-2 2. 84 2. 18 6. 93 1. 16
130925-3 2. 93 7. 09
3 讨论
3. 1 色谱柱的选择 作者比较了 Agilent ZOＲBAX
SB-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)和 Hypersil
ODS2(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，结果表明 Hypersil
ODS2(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)分离效果较差，
Crenatoside和类叶升麻苷没有达到适宜的分离度，
Agilent ZOＲBAX SB-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm)分离效果好，能够达到适宜的分离度。
3. 2 检测波长的选择 Crenatoside 和类叶升麻苷
均为苯乙醇苷类化合物，紫外吸收光谱类似，均在
330 ～ 334 nm 有最大吸收，同时参考《中国药典》
2010 年版一部肉苁蓉项下的测定波长为 330
nm［12］，故选择最大吸收波长 330 nm作为检测波长。
3. 3 流动相的选择 比较了甲醇-酸水和乙腈-酸
水两种流动相系统，结果显示甲醇-酸水系统下的峰
形较差，改用乙腈-酸水后峰形较好，在乙腈-酸水的
基础上，又对酸水的浓度进行了优选，发现若采用
1%和 0. 1%的冰醋酸，流动相 pH 接近 2，可能会使
色谱柱键合相在强酸性条件下水解，从而缩短色谱
柱寿命，影响方法的灵敏度和耐用性。本试验最终
采用乙腈-0. 01%冰醋酸(18∶ 82)作为流动相。
3. 4 提取方法的选择 比较了不同提取方法(冷
浸、渗滤、超声、热回流)以及提取时间(30，60，90
min)对 药 材 提 取 的 影 响，结 果 热 回 流 方 法
crenatoside和类叶升麻苷提取率最高，发现提取时
间 60 min 以后虽然时间延长，目标提取率几乎不
变。考察了 30%，50%，80%，95%乙醇 4 种溶剂对
crenatoside和类叶升麻苷的提取效果，最终确定体
积分数 80%的乙醇热回流 60 min 作为向日葵列当
药材的提取方法。
4 结论
向日葵列当中 crenatoside含量为 2. 86 mg·g －1，
类叶升麻苷含量为 7. 02 mg·g －1，二者合计已达药
材质量的 1%左右，是一种值得开发和深入研究的
列当科列当属植物。本试验所建立的 ＲP-HPLC 检
测向日葵列当中 crenatoside和类叶升麻苷的方法简
便易行、精密度和重现性良好、结果准确，可为向日
葵列当病害防治提供资源利用的新途径，达到“变
废为宝”的目标。
［参考文献］
［1］ 汪劲武．列当王国探奇［J］．植物杂志，1995(1) :29.
［2］ 刘颖，齐艳春，任丽梅． 向日葵列当发生特点及防除
对策［J］．上海农业科技，2007(1) :1021.
［3］ 江苏新医学院．中药大辞典．上册［M］．上海:上海人
民出版社，1977:8541.
［4］ 高昂，姚默，崔超，等．列当属药学研究概况［J］．安徽
农业科学，2011，39(33) :20394.
［5］ 刘晓林，赵秀香，魏颖颖，等．向日葵列当粗提物对植
物病原真菌的抑制作用［J］． 江苏农业科学，2008
(3) :104.
［6］ 曲正义，侯微，金银萍，等．向日葵列当抗氧化活性研
究［J］．中药材，2010，33(11) :1780.
［7］ 曲正义．向日葵列当化学成分及其抗氧化活性研究
［D］．北京:中国农业科学院，2010:13.
［8］ 赵梦霞．向日葵列当化学成分及其活性研究［D］．哈
尔滨:哈尔滨工业大学，2012:20.
［9］ 李媛，宋媛媛，张洪泉． 肉苁蓉的化学成分及药理作
用研究进展［J］． 中国野生植物资源，2010，29
(1) :7.
［10］ Papoutsi Z，KassiE，Mitakou S，et al． Acteoside and
martynoside exhibit estrogenic /antiestrogenic properties
［J］． J Steroid Biochem MolBiol，2006，98(1) :63.
［11］ 林娟，高莉，霍仕霞，等．类叶升麻苷对东莨菪碱致小
鼠学习记忆障碍的改善作用［J］． 中国中药杂志，
2012，37(19) :2956．
［12］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典．一部［S］．北
京:中国医药科技出版社，2010:126.
［责任编辑 顾雪竹］
·98·
曲正义，等:ＲP-HPLC同时测定向日葵列当中苯乙醇苷类化合物 crenatoside和类叶升麻苷