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The Study of Immune Activities of Extracts from Wild and Cultivated Cistanche deserticola in Xinjiang

新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉提取物免疫活性研究



全 文 :·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2016, 32(1):131-137
收稿日期 :2015-08-18
基金项目 :新疆维吾尔自治区科技援疆项目(201591150)
作者简介 :杨秀梅,女,硕士研究生,研究方向 :新型疫苗佐剂的研究 ;E-mail :444375019@qq.com
通讯作者 :张爱莲,女,副教授,研究方向 :新型疫苗佐剂的研究 ;E-mail :zal@xju.edu.cn
新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉提取物免疫活性研究
杨秀梅1  杨雨1  王丹阳1  吴道澄2  张爱莲1
(1. 新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐 830046 ;
2. 西安交通大学生命科学与技术学院,西安 710000)
摘 要 : 旨在比较新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉提取物主要活性成分差异,并检测其诱导小鼠体内树突状细胞(Dendritic
cells,DC)成熟能力,评价其免疫活性。采用超声法制备提取物,紫外法测定多糖及苯乙醇苷类化合物含量 ;脚掌免疫小鼠,
流式细胞术检测其对小鼠体内 CD11c+DCs 表面 CD86(Cell differentiation antigens 86,CD86)和 MHCII(Major histocompatibility
complex II,MHCII)表达情况。结果表明,野生及栽培荒漠肉苁蓉水提物中多糖含量分别为 59.58% 和 76.82%,醇提物中苯乙醇
苷类化合物含量分别为 17.12% 和 8.47% ;小鼠免疫实验结果表明,野生和栽培荒漠肉苁蓉提取物可显著增强小鼠体内 CD11c+DCs
表面 CD86 和 MHCII 上调表达(P<0.01),且效果与阳性对照组 LPS 相当,相同剂量野生与栽培醇提物除对 CD86 的作用差异显著
外(P<0.05),其它提取物之间对 CD86 和 MHCII 的作用均无显著差异(P>0.05)。新疆野生和栽培荒漠肉苁蓉主要成分之间存在
一定差异,且在适宜浓度下均可显著促进小鼠体内 DCs 成熟,且差异不大。
关键词 : 荒漠肉苁蓉 ;多糖 ;苯乙醇苷类化合物 ;树突状细胞
DOI :10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.022
The Study of Immune Activities of Extracts from Wild and Cultivated
Cistanche deserticola in Xinjiang
YANG Xiu-mei1 YANG Yu1 WANG Dan-yang1 WU Dao-cheng2 ZHANG Ai-lian1
(1. Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering,College of Life Science and Technology,Xinjiang University,
Urmqi 830046 ;2. College of Life Science and Technology,Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710000)
Abstract: This work is to compare the differences of major active components in the extracts between wild and cultivated Cistanche
deserticola in Xinjiang, detect their capacities to induce the maturation of dendritic cells(DCs)in mice, and evaluate their immune activities.
The extracts were prepared by ultrasonic extraction, and the contents of polysaccharides and phenylethanoid glycosides were measured by
ultraviolet-visible spectrophotometer method. The immune to BALB/c mice with extracts was through foot pad, and the expressions of CD86(cell
differentiation antigens 86)and MHCII(major histocompatibility complex II)on the surface of CD11c+DCs inside mouse were detected by flow
cytometry. The polysaccharides contents in the aqueous extracts from wild and cultivated C. deserticola were 59.58% and 76.82% respectively,
and the contents of phenylethanoid glycosides in the alcohol extracts were 17.12% and 8.48% respectively. The immune tests of mice showed that
the extracts from both wild and cultivated C. deserticola enhanced the expression level of CD86 and MHCII on the surface of CD11c+DCs inside
mice(P<0.01);and the effect was similar to that of the positive control group(LPS). The effect of the same dosage of wild and cultivated
ethanol extracts on the CD86 was significantly different(P<0.05). The effect of the other extracts on MHCII and CD86 was not significantly
different(P>0.05). In conclusion, there were differences in the main components between Xinjiang wild and cultivated C. deserticola, and in
appropriate concentration they both could significantly promoted DCs maturation in mice, and the difference was not significant.
Key words: Cistanche deserticola ;polysaccharides ;phenylethanoid glycosides ;dendritic cell
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.1132
荒漠肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)又称
肉苁蓉,为列当科肉苁蓉属沙生植物,主要寄生在
梭梭、红柳等荒漠植物根部,其主要成分包括多糖、
苯乙醇苷类化合物、有机酸、生物碱等[1],其中多
糖含量较高具有抗氧化、抗病毒等调节免疫系统多
种功能 ;苯乙醇苷类化合物具有抗肿瘤、抗衰老等
多种功能[2,3],其含量被定为评定肉苁蓉药理学活
性的重要指标[4]。由于肉苁蓉极高的药用价值[5],
野生肉苁蓉过度开采濒临灭绝,鉴于此人工栽培肉
苁蓉已经在新疆大面积成功种植[6]。虽然国内外学
者对肉苁蓉的化学成分、有效成分的分离、纯化及
药理作用的研究、抗衰老活性成分、食品保健等诸
多方面做了大量研究,但对肉苁蓉提取物的免疫活
性研究较少,尤其是比较野生与栽培荒漠肉苁蓉提
取物免疫活性的研究还未见报道。
树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是目前功能
最强的专职性抗原提呈细胞,在诱导免疫应答过程
中起着重要作用,其成熟状态决定机体免疫调节的
方向,DCs 由未成熟转向成熟,细胞表面共刺激分
子高表达[7],同时迁移到淋巴结诱导抗原特异性 T
细胞增殖,激活免疫应答[8,9],因此,对 DCs 的研
究为天然产物调节免疫功能提供了新的视角。
本实验以新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉为原材料,
利用超声结合水提醇沉法[10],经 Sevag 试剂除蛋
白[11]制备水提物和超声辅助制备醇提物,水提物
中主要活性分成为多糖,蒽酮硫酸法[12]测定多糖
含量 ;醇提物中主要的活性成分为苯乙醇苷类化合
物,Al(NO3)3-NaNO2-NaOH 显 色 体 系
[13] 测 定 苯
乙醇苷类化合物含量,并通过脚掌免疫 BALB/c 小
鼠,流式细胞术检测提取物对 BALB/c 小鼠体内 DCs
成熟的影响,初步评价新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉
提取物的免疫活性,旨在为更好地开发利用新疆栽
培荒漠肉苁蓉提供参考,也为利用新疆药用植物筛
选新型疫苗佐剂奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 材料 5-6 周雌性 BALB/c 小鼠购自新疆医科
大学动物中心。新疆野生和栽培荒漠肉苁蓉(市售)。
1.1.2 试剂 石油醚、三氯甲烷、正丁醇、蒽酮、
葡萄糖、松果菊苷等均为分析纯,流式抗体 :PE-
CD11c、APC-CD86/FITC- MHCII 购自美国 BD 公司,
其它试剂均为进口或国产分析纯。
1.1.3 仪器 721 型全波长分光光度计 :上海第三
分析仪器厂 ;RE-52A 旋转蒸发仪 :上海亚荣生化仪
器厂 ;78-1 磁力加热搅拌器 :金坛市医疗仪器厂 ;
A L204 电子天平 :梅特勒一托利多仪器有限公司,
精度 0.1 mg ;流式细胞仪 :美国 BD 公司。
1.2 方法
1.2.1 新 疆 野 生 及 栽 培 荒 漠 肉 苁 蓉 水 提 物 的 制
备 水提物的制备采用超声结合水提醇沉的方法。
步骤如下 :取新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉粉末,加
入 10 倍体积的石油醚超声辅助脱脂 ;加入 10 倍体
积无水乙醇超声辅助脱色 ;加入 10 倍体积蒸馏水
37℃超声两次,4 000 r/min 离心 10 min,合并上清,
真空旋蒸浓缩 ;加入 4 倍体积的无水乙醇,4℃过夜
醇沉 ;真空抽滤烘干,得粗提物粉末 ;加入 100 倍
体积蒸馏水磁力搅拌器使其充分溶解,加入 Sevag
试剂(氯仿∶正丁醇 =4∶1)除蛋白,4 000 r/min 离
心 10 min,重复多次,直到无乳白色变性蛋白吸出
为止,收集上清,真空旋蒸浓缩,以同样的方法醇沉,
即得新疆野生及栽培疆荒漠肉苁蓉水提物。
1.2.2 新 疆 野 生 及 栽 培 荒 漠 肉 苁 蓉 醇 提 物 的 制
备 醇提物的制备选择超声醇提法制备。步骤如
下 :新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉粉末,以相同条件
用石油醚脱脂后烘干,加入 80% 乙醇(料液比为
1∶10),真空旋蒸,65℃烘干得到醇提物,助溶剂
(Tween-20∶0.9% NaCl=1∶9)(V/V)溶解醇提物。
1.2.3 新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉水提物多糖含量
测定 采用蒽酮 - 硫酸法检测水提物中多糖含量。
步骤如下 :以葡萄糖为标准品绘制标准曲线,精密
称取葡糖糖用蒸馏水溶解,浓度调整为 0.5 mg/mL,
分别加入上述溶液 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、
0.8、0.9 和 1.0 mL,再加入 8 mL 0.2% 蒽酮 - 硫酸溶
液,沸水浴 10 min,检测 OD625 nm 值,得回归方程 :
A=0.8022C+0.0632,r=0.9954。样品以相同方式处理,
根据标准曲线方程计算多糖含量及得率 :
M
C×N×V
M0
M1 ×ᗇ⦷ % ×100%
其中,M1 代表样品经过脱脂、脱色、水提浓缩、醇
2016,32(1) 133杨秀梅等:新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉提取物免疫活性研究
沉后的质量(g),M0 代表提取前样品的质量(g),
C 代表样品中多糖含量(mg/mL),N 代表样品稀释
倍数,V 代表样品体积(mL),M 代表含量测定时
样品的质量(g)。
1.2.4 新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉醇提物中苯乙醇
苷类化合物含量测定 采用 Al(NO3)3-NaNO2-NaOH
显示体系检测醇提物中苯乙醇苷类化合物含量。步
骤如下 :以松果菊苷为标准品绘制标准曲线,甲醇
溶液溶解松果菊苷,将浓度调整为 0.43 mg/mL,等
比列稀释标准品,分别加入上述溶液 0、20、40、
60、80、100、120、140、160、180 和 200 μL,加入
100 μL 5% 硝酸钠溶液,室温静置 6 min,加入 10%
硝酸铝静置 6 min,加入 10% 氢氧化钠静置 18 min,
检测 OD510 nm 值,得回归方程 :A=0.0759C+0.0436,
r= 0.9968。以同样的方式处理样品,根据标准曲线
方程计算苯乙醇苷类化合物含量及得率 :
M
C×N×V
M0
M1 ×ᗇ⦷ % ×100%
其中,M1 代表经过脱脂、醇提浓缩后的质量(g),
M0 代表提取前样品的质量(g),C 代表待测样中苯
乙醇苷类化合物含量(mg/mL),N 代表样品的稀释
倍数,M 代表含量测定样品的质量(g)。
1.2.5 动物分组及免疫 野生荒漠肉苁蓉水提物
(Aqueous extracts of wild C. deserticola,AEWCD)、栽
培荒漠肉苁蓉水提物(Aqueous extracts of cultivated C.
deserticola,AECCD)、 野 生 醇 提 物(Ethanol extract
of wild C. deserticola,EEWCD)、栽培醇提物(Ethanol
extract of cultivated C.deserticola,EECCD)分别选用
50 μg 和 200 μg 两个剂量免疫小鼠。随机将 BALB/c
小鼠分成 11 组 :阴性对照组(0.9% NaCl、Tween-
20)、 阳 性 对 照 组(LPS 100 ng)、AEWCD 50 μg、
AEWCD 200 μg、AECCD 50 μg、AECCD 200 μg、
EEWCD 50 μg、EEWCD 200 μg、EECCD 50 μg 和
EECCD 200 μg 实验组,每组 6 只,脚掌免疫小鼠,
每只 50 μL。
1.2.6 流式细胞术检测新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉
水提物及醇提物对小鼠 DCs 的影响 脚掌免疫小鼠
36 h 后,取腿窝及腹股沟淋巴结制备单细胞悬液,
将细胞数调整为 1×106 cells,进行 CD11c+DCs 表面
CD86/MHCII 染 色, 室 温 避 光 20 min, 用 10 mL 含
0.5% 胎牛血清的磷酸缓冲溶液(Phosphate Buffered
Saline,PBS)1 200 r/min 7 min 洗一次,加入 300 μL
PBS,过 200 目铜网,流式细胞术检测 CD11c+DCs
表面 CD86/MHCII 表达情况。
1.2.7 统计学分析 采用 FlowJo 7.6 软件处理流式
细胞术检测结果,GraphPad Prism 5.0 进行分析,计
量数据均采用平均数 ± 标准差,数据进行单因素方
差分析和多组均数间比较,差异显著标准为 P<0.05。
2 结果
2.1 新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉水提物中多糖含量
葡萄糖标准曲线回归方程为 A=0.8022C+0.0632,
r=0.995 4,表明葡萄糖含量在 0.05-0.5 mg/mL 范围
内线性关系良好。根据回归方程计算野生及栽培荒
漠肉苁蓉中多糖含量及得率。结果(表 1)显示,
野生荒漠肉苁蓉水提物中多糖含量为 59.58%,栽培
荒漠肉苁蓉水提物中多糖含量为 76.82%,两者间差
异显著(P<0.05)。
表 1 新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉水提物中多糖含量测定
名称 质量比 /(mg·g-1) 百分比 /% 得率 /%
栽培样品 768.21±4.64 76.82%±1.47* 4.41%±0.91
野生样品 595.84±4.61 59.58%±1.46 3.15%±0.78
注 :表中数据为平均数 ± 标准差,n=3,* 表示 P<0.05
2.2 新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉醇提物中苯乙醇
苷类化合物含量
松 果 菊 苷 标 准 曲 线 回 归 方 程 为 A=0.0759C+
0.0436,r=0.9968, 说 明 松 果 菊 苷 在 0.043-0.43
mg/mL 范围内线性关系良好。根据回归方程计算得
出野生及栽培荒漠肉苁蓉醇提物中苯乙醇苷类化合
物含量及得率。结果(表 2)显示,野生荒漠肉苁
蓉醇提物中的苯乙醇苷类化合物含量为 17.12%,栽
培荒漠肉苁蓉醇提物中的苯乙醇苷类化合物含量为
8.47%,两者之间无显著差异(P>0.05)。
表 2 新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉醇提物苯乙醇苷含量检测
名称 质量比 /(mg·g-1) 百分比 /% 得率 /%
栽培样品 84.76±4.38 8.47±0.29 3.89%±0.13
野生杨样品 171.93±4.89 17.12±0.42 10.76%±0.77
注 :表中数据为平均数 ± 标准差,n=3,P>0.05
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.1134
2.3 流式细胞术检测新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉
水提物对小鼠DCs表面分子表达的影响
野生及栽培荒漠肉苁蓉水提物不同剂量,脚
掌免疫小鼠 36 h 后取腿窝及腹股沟淋巴结,流式
细胞术检测结果(图 1)表明,随着水提物浓度越
高,促进 CD11c+DCs 表面 MHCII 及 CD86 的表达能
力越强 ;低剂量和高剂量组与对照相比差异极显著
(P<0.01),高剂量组优于阳性对照 LPS 组,且差异
显著(P<0.05);野生及栽培水提物相同剂量之间没
有显著差异(P>0.05);说明野生及栽培荒漠肉苁蓉
水提物能显著促进 DCs 成熟。
2.4 流式细胞术检测EEWCD/EECCD对BALB/c小
鼠体内DCs表面分子表达的影响
野生及栽培荒漠肉苁蓉醇提物不同剂量,脚
掌免疫小鼠 36 h 后取腿窝及腹股沟淋巴结,流式
细胞术检测结果(图 2)表明,低剂量组与对照
相比无显著差异(P>0.05),高剂量组可显著促进
CD11c+DCs 表面 MHCII 的表达(P<0.01),与阳性对
照 LPS 组效果相当(P>0.05),且野生和栽培醇提物
之间无显著差异(P>0.05);低剂量和高剂量组与对
照相比都显著促进 CD86 分子的表达(P<0.01),野
生及栽培醇提物高剂量组间差异显著(P<0.05)。说
明野生及栽培荒漠肉苁蓉醇提物显著促进 DCs 成熟。
3 讨论
中草药有效成分对机体存在着普遍的免疫调节
作用,如人参、肉苁蓉、枸杞、黄芪等都可以综合
性地提高机体免疫力,研究者发现中药中的多糖、
黄酮、皂苷、凝集素等成分对机体具有一定的免疫
增强作用,而对正常细胞没有毒副作用,因此,从
中草药中寻找有免疫活性成分成为研究的热点。大
量研究表明 :中草药提取物能促进 DCs 成熟[14,15]、
增强巨噬细胞的吞噬作用[16,17]、促进淋巴细胞增
殖[18]、细胞因子的分泌[19]、具有抗肿瘤[20,21]、抗
病毒[22]、抗炎[23]等功能,从而起到调节免疫系统
的作用。肉苁蓉是我国名贵中草药,其多糖和苯乙
醇苷类化合物具有调节免疫、抗病毒、抗衰老等作
用而引起关注。
由于 DCs 在诱导免疫应答过程中的重要作用,
本研究利用 DCs 作为肉苁蓉提取物免疫活性的检
测平台,比较新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉的免疫
活性,检测水提物及醇提物对 BALB/c 小鼠淋巴系
DCs 的影响。结果表明,水提物及醇提物均可显著
促进 DCs 成熟。这与之前 Li[24]和 Kim[25]的关于
植物多糖能显著促进 DCs 成熟的报道基本一致 ;李
暖等[26]关于苯乙醇苷类化合物中的松果菊苷能显
著增强 DCs 成熟的结论一致 ;相同剂量野生与栽
培荒漠肉苁蓉提取物促进 DCs 成熟差异不大,虽
然野生与栽培肉苁蓉提取物中多糖含量与苯乙醇苷
类化合物含量存在一定的差异 :即 200 μg 野生与
栽培水提物中多糖约为 119 μg(200×59.58%)和
153 μg(200×76.82%),栽培肉苁蓉中多糖含量较
高,但不影响其对 DCs 的作用,153 μg 栽培多糖与
119 μg 野生多糖效果作用 DCs 效果相当 ;200 μg 野
生及栽培醇提物中苯乙醇苷类化合物约为 34.24 μg
(200×17.12%)和 16.94 μg(200×8.47%),野生肉
苁蓉中苯乙醇苷类化合物含量较高,但对 DCs 作用
只有 CD86 的表达存在一定差异,MHCII 的表达无
显著差异,说明野生与栽培醇提物相比激活 T 细胞
的能力较强,递呈抗原的能力相当。综上所述野生
与栽培肉苁蓉对 DCs 作用相当,在后续研究中可用
栽培替代野生荒漠肉苁蓉,进一步验证新疆栽培荒
漠肉苁蓉在免疫学方面的运用前景,为从新疆药用
植物资源中筛选新的免疫活性物质奠定基础。
4 结论
通过超声结合水提醇沉法制备水提物,野生
及栽培新疆荒漠肉苁蓉多糖含量分别为 59.58% 和
76.82% ;利用超声醇提得新疆野生及栽培荒漠肉苁
蓉苯乙醇苷类化合物含量分别为 17.12% 和 8.47%。
结果表明,新疆野生和栽培荒漠肉苁蓉主要成分之
间存在一定差异。免疫小鼠后,流式细胞术检测结
果表明,野生和栽培荒漠肉苁蓉提取物可显著增强
小鼠体内 CD11c+DCs 表面 CD86 和 MHCII 上调表达,
且效果与阳性对照组 LPS 相当,相同剂量的水提物
之间差异不显著。同一剂量野生及栽培荒漠肉苁蓉
醇提物上调 CD11c+DCs 表面 MHCII 之间差异不显著,
但 CD86 的表达存在一定差异。说明新疆野生荒漠
肉苁蓉提取物在适宜剂量范围与栽培提取物的一定
剂量范围对 BALB/c 小鼠体内 DCs 作用效果相当。
2016,32(1) 135杨秀梅等:新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉提取物免疫活性研究
C
D
86
M
H
C
II
A
B
C
104
103
4.26%
0.9%NaCl
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
6.70%
AEWCD 50 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
9.88%
AEWCD 200 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
13.1%
LPS 100 ng
102
101
100
100 101 102 103 104
0.9%NaCl
104
103
5.09%
102
101
100
100 101 102 103 104
AEWCD 50 μg
104
103
9.40%
102
101
100
100 101 102 103 104
AEWCD 200 μg
104
103
11.08%
102
101
100
100 101 102 103 104
LPS 100 ng
104
103
10.50%
102
101
100
100 101 102 103 104
a
b
d
bc
d
c
M
FI
o
f C
D
86
36
30
24
18
12
6
0
0.9
%N
aC
l
AE
W
CD
50
μg
AE
CC
D
50
μg
AE
W
CD
20
0 μ
g
AE
CC
D
20
0 μ
g
LP
S 1
00
ng
CD11c
104
103
4.46%
0.9%NaCl
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
5.56%
AECCD 50 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
7.72%
AECCD 200 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
8.56%
LPS 100 ng
102
101
100
100 101 102 103 104
0.9%NaCl
104
103
4.46%
102
101
100
100 101 102 103 104
AECCD 50 μg
104
103
5.76%
102
101
100
100 101 102 103 104
AECCD 200 μg
104
103
9.81%
102
101
100
100 101 102 103 104
LPS 100 ng
104
103
9.20%
102
101
100
100 101 102 103 104
CD11c
a
a
b
a
b
b
M
FI
o
f M
H
C
II
100
80
60
40
20
0
0.9
%N
aC
l
AE
W
CD
50
μg
AE
CC
D
50
μg
AE
W
CD
20
0 μ
g
AE
CC
D
20
0 μ
g
LP
S 1
00
ng
AEWCD/AECCD 脚掌免疫 BALB/c 小鼠 36 h 后,取腿窝和腹股沟淋巴结,流式细胞术检测 CD11c+DCs 表面分子 CD86 和 MHCII 表
达情况(n=6);A :DCs 表面 CD86 表达情况 ;B :DCs 表面 MHCII 的表达情况 ;C :DCs 表面 CD86 及 MHCII 平均荧光强度(Mean
fluorescence intensity,MFI)检测结果(Mean±SEM)。不同字母表示各组间差异显著(P<0.05)
图 1 AEWCD/AECCD 促进小鼠体内 DCs 成熟
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.1136
C
D
86
A
104
103
4.24%
0.9%NaCl
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
4.61%
Tweem-20
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
4.90%
EECCD 50 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
7.17%
EECCD 200 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
9.20%
LPS 100 ng
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
4.26%
0.9%NaCl
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
4.51%
Tween-20
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
12.9%
EEWCD 50 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
14.2%
EEWCD 200 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
13.1%
LPS 100 ng
102
101
100
100 101 102 103 104
CD11c
M
H
C
II
B
104
103
5.09%
0.9%NaCl
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
5.58%
Tween-20
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
9.70%
EEWCD 50 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
12.08%
EEWCD 200 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
10.50%
LPS 100 ng
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
4.46%
0.9%NaCl
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
4.25%
Tween-20
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
5.21%
EECCD 50 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
7.92%
EECCD 200 μg
102
101
100
100 101 102 103 104
104
103
8.56%
LPS 100 ng
102
101
100
100 101 102 103 104
CD11c
C
a a
b
c
ab
b
bc
M
FI
o
f C
D
86
35
28
21
14
7
0
0.9
%N
aC
l
Tw
een
-20
EE
W
CD
50
μg
EE
CC
D
50
μg
EE
W
CD
20
0 μ
g
EE
CC
D
20
0 μ
g
LP
S 1
00
ng
0.9
%N
aC
l
Tw
een
-20
EE
W
CD
50
μg
EE
CC
D
50
μg
EE
W
CD
20
0 μ
g
EE
CC
D
20
0 μ
g
LP
S 1
00
ng
a a
ab ab
c
bc
c
M
FI
o
f M
H
C
II
100
75
50
25
0
EEWCD/EECCD 脚掌免疫 BALB/c 小鼠 36 h 后,取腿窝和腹股沟淋巴结,流式细胞术检测体内 DCs 表面 CD86 及 MHCII 的 MFI(n=6),
A :DCs 表面 CD86 表达情况 ;B :DCs 表面 MHCII 表达情况 ;C :DCs 表面 CD86 及 MHCII 的 MFI 检测结果(Mean±SEM)。不同字母
表示各组间差异显著(P<0.05)
图 2 EEWCD/EECCD 促进体内 DCs 成熟
2016,32(1) 137杨秀梅等:新疆野生及栽培荒漠肉苁蓉提取物免疫活性研究
参 考 文 献
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(责任编辑 马鑫)