免费文献传递   相关文献

丁香罗勒抗菌作用研究



全 文 :现代医药卫生 2009 年第 25卷第 16期
丁香罗勒(Ocimum gratissimum L.)是唇形科罗勒属植物,原
产于非洲中部热带地区,现在我国南方多省都有栽培。丁香罗
勒是重要的香料植物和药用植物,其全草看用于提取芳香精油,
是香料和日用化妆品工业的重要原料。此外,丁香罗勒油还具
抗菌 [1]、抗真菌 [2]、抑制疟原虫 [3]等作用,是非洲民间常用药 [4]。国
内也有报道用丁香罗勒精油用于治疗螨虫、疥疮等皮肤病 [5,6]。丁
香罗勒精油中的主要成分是丁香酚(eugenol),此外还有麝香草
酚(thymol)。本文作者在前期研究中发现丁香罗勒精油对植物
病原菌有较强的抑制作用,为进一步了解丁香罗勒抗菌作用的
有效部位以利于相关产品的开发,分别对丁香罗勒的醇提物和
丁香罗勒精油进行了体外抗菌试验。
1 材料与方法
1.1 供试药液
1.1.1 丁香罗勒精油的制备:参照《中国药典》(2000版)方法提
取。精油用10%吐温-80生理盐水稀释10倍,备用。
丁香罗勒抗菌作用研究
莫小路,朱庆玲,郑宗超,严 振※
(广东省中药研究所,广东 广州 510520)
文章编号:1009-5519(2009)16-2462-02 中图分类号:R28 文献标识码:A
基金项目:广东省科技计划项目(No 2006B20301046)
*通讯作者:严 振
的药物。不是所有的病人都需要治疗。最近的研究建议新近发
现的Ⅱ、Ⅲ期病人,即使肺功能正常,也可从即刻治疗中获益,
建议强的松口服3个月,然后吸入布地奈德15个月 [15]。Ⅳ期伴进
行性肺纤维化的病人,通常全身治疗效果甚微或无效。
为减少激素的不良作用,近年来国内外应用小剂量口服激
素加局部吸入激素的方法,治疗Ⅱ、Ⅲ期患者,不良作用明显减
少,而疗效不减,达到了预期目的地夫考特是强的松龙的甲基
恶唑啉衍生物,该药对慢性结节病的疗效与强的松相似(抗炎
活性5 mg强的松=6 mg地夫考特),但不良作用明显减少,特别
是对骨代谢的影响很小。
10.2 抗微生物药:磷酸氯喹和羟基氯喹:原来均为抗疟疾药,
近来发现对肺结节病(特别是肺纤维化晚期)、神经系统结节病
也有较好疗效。现已有作者呼吁氯喹应作为慢性结节病的一线
治疗药物, 但多数作者仍建议将氯喹作为激素的替代药物。最
近一个报道显示米诺环素及脱氧土霉素治疗表皮结节病是有
效的[16]。
10.3 免疫抑制剂:这类药物包括环磷酰胺、氨甲蝶呤(MTX)、
来氟米特、环孢菌素A,硫唑嘌呤、 褪黑激素、麦考酚酸吗已酯、
特异的TNF-a抑制剂等。TNF-a抑制剂是一个结节病治疗的靶
点,TNF-a抑制剂包括英夫利昔单抗和依那西普。 他们临床上
常用于类风湿关节炎及活动性局限性回肠炎。几个病例研究显
示他们可以显著改善累及不同器官的难治性慢性结节病。考虑
该药的潜在毒性及高昂费用,进一步的研究应该去明确到底哪
一类病人可从这类药中获益。
10.4 肺移植:晚期肺结节病是第二位需要肺移植的肺间质性
疾病。 我国于1995年成功为一终末期肺结节病病人行单肺移
植,存活达4年多。国外早在1983 年即行肺结节病单肺移植,现
已有近百例成功的报道,因供体等原因,应用较少。
参考文献:
[1] Baughman R,Teirstein A, Judson M,et al.Clinical characteristics of
patients in A Case Control Study of Sarcoidosis[J].Am J Respir Crit
Care Med,2001,164:1885.
[2] Semenzato G,Bortoli M,Brunetti E,et al.Immunology and pathophys-
iology[J].In: European Respiratory Monography on Sarcoidosis,2006,
10 (monograph 32):49.
[3] Capelli A,Di Stefano A,Lusuardi M, et al. Increased macrophage
inflammatory protein-1alpha and macrophage inflammatory protein-
1beta levels in bronchoalveolar lavage fluid of patients affected by
different stages of pulmonary sarcoidosis[J].Am J Respir Crit Care
Med,2002,165:236.
[4] Moller DR,Forman JD,Liu MC,et al.Enhanced expression of IL-12
associated with Th1 cytokine profiles in active pulmonary sarcoidosis[J].
J Immunol,1996,156:4952.
[5] Antoniou KM,Tzouvelekis A,Alexandrakis MG,et al.Upregulation of
Th1 cytokine profile (IL-12, IL-18) in bronchoalveolar lavage fluid
in patients with pulmonary sarcoidosis[J].J Interferon Cytokine Res,
2006,26:400.
[6] Bingisser R,Speich R,Zollinger A,et al.Interleukin-10 secretion by
alveolar macrophages and monocytes in sarcoidosis[J].Respiration,
2000,67:280.
[7] Hauber HP,Gholami D,Meyer A,et al.Increased interleukin-13 ex-
pression in patients with sarcoidosis[J].Thorax,2003,58:519.
[8] Charlier C,Nunes H,Trinchet JC,et al.Evolution of previous sar-
coidosis under type 1 interferons given for severe associated disease[J].
Eur Respir J,2005,25:570.
[9] Capelli A,Di Stefano A,Lusuardi M,et al.Increased macrophage in-
flammatory protein-1alpha and macrophage inflammatory protein-
1beta levels in bronchoalveolar lavage fluid of patients affected by
different stages of pulmonary sarcoidosis[J].Am J Respir Crit Care
Med,2002,165:236.
[10] Hills SE,Parkes SA,Baker SBC.Epidemiology of sarcoidosis in the
Isle of Man: evidence for space-time clustering[J].Thorax,1987,
42:427.
[11] Song Z,Marzilli L,Greenlee BM,et al.Mycobacterial catalase-per-
oxidase is a tissue antigen and target of the adaptive immune re-
sponse in systemic sarcoidosis[J].J Exp Med,2005,201:755.
[12] Dubaniewicz A,Dubaniewicz-Wybieralska M,Sternau A,et al.My-
cobacterium tuberculosis complex and mycobacterial heat shock
proteins in lymph node tissue from patients with pulmonary sar-
coidosis[J].J Clin Microbiol,2006,44:3448.
[13] Baughman RP,Engel PJ,Meyer CA,et al.Pulmonary hypertension in
sarcoidosis[J].Sarcoidosis Vasc Diffuse Lung Dis, 2006,23:10.
[14] Perez RL,Kimani AP,King TE,et al. Bronchoalveolar lavage fluid
D dimer levels are higher and more prevalent in black patients with
pulmonary sarcoidosis[J].Respiration,2007,74:297.
[15] Pietinalho A,Tukiainen P,Haahtela T,et al. Early treatment of
stage II sarcoidosis improves 5-year pulmonary function[J].Chest,
2002,121:24.
[16] Bachelez H,Senet P,Cadranel J,et al.The use of tetracyclines for
the treatment of sarcoidosis[J].Arch Dermatol,2001,137:69.
收稿日期:2009-03-26
2462
现代医药卫生 2009 年第 25卷第 16期
表1 丁 香 罗 勒 精 油 抑 菌 试 验 结 果
供试菌种
大肠杆菌(Escherichia coli)
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)
普通变形杆菌(Proteus vulgaris)
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
表皮葡萄球(Staphylococcusepidermidis)
粪肠球菌(Enterococcus faecalis)
藤黄微球菌(Micrococcus luteus)
粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)
6.7
14.3
15.3
7.3
16.3
14.2
14.5
18.7
12
抑菌圈直径(mm)
滤纸片法 平板打孔法 对照
0
11.2
15.2
0
14.3
12.8
11
12.0
7.8
0
0
0
0
0
0
0
0
0
抑菌效果
-
++
+++
-
+++
++
++
+++
+
注:*表中抑菌圈直径为6个平行样的平均值;“+++”表示高度抑菌;“++”表示
中度抑菌;“+”表示低度抑菌
表2 丁香罗勒醇提物的抑菌试验结果
供试菌种
大肠杆菌(Escherichia coli)
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)
普通变形杆菌(Proteus vulgaris)
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
表皮葡萄球(Staphylococcusepidermidis)
粪肠球菌(Enterococcus faecalis)
藤黄微球菌(Micrococcus luteus)
粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)
滤纸片法抑
菌圈直径(mm) 抑菌效果
-
-
-
-
-
-
-
-
-
0
0
0
6.8
7.8
0
0
0
6.8
对照抑菌
圈直径(mm)
0
0
0
6.5
7.5
0
0
0
6.5
注:*表中抑菌圈直径为6个平行样的平均值;“-”表示无抑制
1.1.2 丁香罗勒醇提物制备:20 g丁香罗勒鲜叶+200 mL 50%
乙醇,超声提取25 min( HS 10260 D超声清洗仪,功率260w, 频
率40Hz),过滤,滤液浓缩至干,用20 ml 50%的无菌乙醇溶液溶
解后,作为供试药液。
1.3 供试菌:大肠杆菌(Escherichia coli);枯草芽孢杆菌(Bacil-
lus subtilis); 蜡样芽孢杆菌 (Bacillus cereus); 普通变形杆菌
(Proteus vulgaris);金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus);表皮
葡萄球菌 (Staphylococcusepidermidis); 粪肠球菌 (Enterococcus
faecalis);藤黄微球菌(Micrococcus luteus);粘质沙雷氏菌(Serra-
tia marcescens);
1.3.1 供试菌液准备:用接种环从培养24小时的供试菌斜面培
养基上挑取菌落一环, 接种到5 ml营养肉汤培养基内,24 ℃培
养28~24小时后,稀释至10-3,10-4,10-5,备用。
1.4 方法
1.4.1 滤纸片法:(1)含药滤纸片准备:用打孔器将定性滤纸打
成直径为5 mm的小圆片,高压灭菌后,将4层滤纸片叠放在一
起,置无菌培养皿内,每叠滤纸片滴加稀释的供试药液20μl,阴
性对照滴加20μl 10%的无菌吐温80-生理盐水稀释液或50%无
菌乙醇溶液, 阳性对照滴加20 μl卡那霉素生理盐水溶液(10
mg/ml),备用。(2)接种:①用移液器吸取100 μl稀释菌液滴在直
径为9 cm的营养琼脂平皿中央,用玻璃刮铲将菌液均匀地涂布
于整个平板上。于培养箱内倒置培养10~15分钟至培养基表面干
燥。②分别将含药滤纸片均匀地放置在接种了不同供试菌的培
养基表面,每皿放3叠含药滤纸片,呈三角形,中央放置阴性对
照或阳性对照,各叠滤纸片间距相等,距培养皿边缘约2 cm,稍
加按压使之紧贴培养基。37 ℃培养箱内培养24小时后,取出平
板,测量各纸片周围抑菌圈直径。③结果判断:抑菌圈直径>15
mm为高度抑制 ,10~15 mm为中度抑制 ,6~10为低度抑制 ,<
6mm为无抑制。
1.4.2 平板打孔法:100 μl稀释菌液与15 ml的营养琼脂培养基
混合后,静置冷凝。用无菌打孔器在琼脂平板上打上直径为6 mm
的孔5个,挑出孔内琼脂培养基,将不同浓度的供试精油稀释液
滴入孔内(每孔20 μl),阴性对照滴加20 μl 10%的吐温-80生
理盐水稀释液,阳性对照滴加20 μl卡那霉素生理盐水溶液(10
mg/ml)。置培养箱内37 ℃培养24小时后,取出平板,测量各孔抑
菌圈直径。
2 结果与分析
2.1 丁香罗勒油抑菌试验:由表1可见,丁香罗勒精油对枯草
芽孢杆菌等革兰氏阳性菌有明显的抑制作用,其中,对蜡样芽
孢杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的抑制最强,对其它革
兰氏阳性菌有一定程度的抑制,而对革兰阴性菌(大肠杆菌、普
通变形杆菌)则没有抑制作用。
2.2 丁香罗勒醇提物抑菌试验见表2。从表2可见,本试验中的
丁香罗勒醇提物仅对普通变形杆菌、 金黄色葡萄球菌和粘质沙
雷氏菌形成了微弱的抑菌圈,但与对照(50%乙醇)形成的抑菌
圈相近,可见,该提取物对所有供试菌都没有抑制作用。
3 结论
本试验参照文献 [8]方法,采用了平板打孔法和滤纸片法对
丁香罗勒精油进行抑菌试验,结果相差较大。丁香罗勒精油的
主要成分是丁香酚,即2-甲氧基-4-烯丙基苯酚,其结构中有芳
香环而且芳香环上有极性基团,本试验按生物药品检验的方法
用吐温80做乳化剂进行乳化、稀释时,乳化效果不佳,精油稀释
液放置一段时间后出现了分成,对抑菌试验结果有一定影响,而
在滤纸片中的扩散速度可能较快,因此,滤纸片法的抑菌圈直径
较打孔法的大,本试验的抑菌效果综合了两种方法的抑菌结果。
本试验提示了丁香罗勒精油可用于天然抗菌日用品的开发。
本试验结果显示了丁香罗勒醇提物对9种供试菌没有抑制
作用,其原因可能是该醇提取物的浓度较低(1g鲜重/mL),也可
能是醇提物中的成分(黄酮类、多糖等)均无抑菌作用,需要进
一步研究。
参考文献:
[1] Nakamura CV,Nakamura TU Bando E,Melo AFN.Antibacterial Ac-
tivity of Ocimum gratisimum L.Essential oil,mem Inst[J].Oswaldo
Cruz,Riode Janeiro,1999,94(5):675.
[2] Lemos JA,Passos XS,Fernandes OFL,et al. Antifungal activity from
Ocimum gratissimum L.towards Cryptococcus neoformans.Mem Inst[J].
Oswaldo Cruz,Rio de Janeiro,2005,100(1):55.
[3] Holetzl FB,Nakamura Tu,filho BPD,et al. Effect of Essential oil of
Ocimum. Herpetomonas Samuelpessoai[J].Acta Protozoal,2003,42:269.
[4] Gill LS.EthnoMedical uses of plants in Nigeria Uniben Press[J]. Uni-
versity of Benin, Benin City Edo State,1992.176.
[5] 吴 涛.丁香罗勒乳膏治疗128例疥疮疗效观察[J].中国麻风皮肤
病杂志,2002,18(3):273.
[6] 姜燕生.丁香罗勒乳膏治疗寻常型银屑病51例疗效观察[J].中国麻
风皮肤病杂志,2003,19(3):291.
[7] 李玲玲,赖东美,叶飞云.丁香罗勒油的气相色谱分析[J].中国中药
杂志,2000,25(4):229.
[8] 马绪荣,苏德模. 药品微生物学检验手册 [M]. 北京:科学出版社,
2001.1.
收稿日期:2009-04-03
2463