全 文 ：·药物研究·
　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０２５３－９９２６．２０１６．０３．０３６
基金项目：广西中药质量标准研究重点实验室资助项目
（桂中重系２０１２１１）。
作者单位：５３００２２南宁，广西壮族自治区中医药研究院
化学所（何春欢、张赟赟、张颖、姜平川）；广西中药质量标准
研究重点实验室（李嘉）
红药不同溶剂提取物抗氧化活性研究
何春欢　李　嘉　张赟赟　张　颖　姜平川
　　合成抗氧化剂在食品工业中广泛应用，但它们
的安全性能已备受人们的质疑，人们已将抗氧化剂
研究的重点转向了天然、低毒、高效的天然抗氧化
剂，中草药活性成分成为了研究热点之一。红药是
苦苣苔科唇柱苣苔属植物红药的全草，为壮医常用
药材，具有温补养血、消肿止痛、活血补血等功效，
临床用于月经不调、身体虚弱、贫血及跌打骨折［１］。
红药主产于广西西南部，化学成分主要包括苯乙醇
苷类、芳香羧酸类、脂肪烷及酸类、甾醇类化合物、
蒽醌类、黄酮碳苷类、α－Ｄｕｎｎｉｏｎｅ类、β－萘甲酸类、
木脂素类和三萜类化合物［２，３］。药理研究表明红药
对小鼠具有镇痛作用和免疫功能调节作用［４］。但
未见文献系统研究报道其抗氧化活性。
鉴于红药的药用价值，本研究分别采用水、乙
醇、乙酸乙酯和氯仿等溶剂提取红药得到４种提取
物，利用自由基清除能力、还原能力、总抗氧化活性
和总酚总黄酮含量等分析方法对其抗氧化活性进
行了系统研究，为红药资源的开发利用提供一定的
理论参考。
１　材料与方法
１．１　材料与试剂
红药药材购自南宁市药市，广西中医药研究院
中药室鉴定为唇柱苣苔属植物红药的干燥全草，干
燥后粉碎备用；Ｆｏｌｉｎ－酚试剂和二苯代苦味酰基自
由基（ＤＰＰＨ）购于Ｓｉｇｍａ公司；其余试剂均为国产
分析纯。
１．２　仪器与设备
ＵＶ２５５０紫外可见分光光度计，日本岛津公
司；ＸＳ－２０５电子天平，梅特勒托利多仪器有限公
司；ＲＥ－５２ＡＡ旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；
ＤＦＹ－５００粉碎机，温岭市林大机械有限公司。
１．３　实验方法
１．３．１　红药样品的制备：红药药材粉末１０ｇ，用
９５％乙醇５０ｍＬ回流提取２ｈ，过滤，同法操作两
次，合并滤液，减压浓缩，干燥得到红药乙醇提取物
（ＥＥ）０．５１ｇ。其他溶剂同法操作，得到红药水提
取物（ＷＥ）０．４４ｇ、红药乙酸乙酯提取物（ＥＡＥ）
０．３７ｇ和红药氯仿提取物（ＣＥ）０．２７ｇ，得率分别
为４．４％，３．７％，２．７％。
１．３．２　ＤＰＰＨ 自由基清除能力测定［５］：将不同浓
度提 取 物 乙 醇 溶 液 ０．１ ｍＬ 分 别 和 ３．９ ｍＬ
０．００４％ ＤＰＰＨ乙醇溶液混合后，在２８℃水浴中
恒温３０ｍｉｎ，在５１５ｎｍ下测其吸光度 Ａ样品，同
时测定不含提取物的空白样品吸光度Ａ空白，以合
成抗氧化剂ＢＨＴ为对照，按公式ＳＣ％＝（１－Ａ样
品／Ａ空白）×１００％计算清除率ＳＣ％值。
１．３．３　还原能力测试［６］：在２．５ｍＬ　ｐＨ　６．６的磷
酸缓冲溶液中加１ｍＬ样品液（０．２ｍｇ／ｍＬ，０．４
ｍｇ／ｍＬ，０．６ｍｇ／ｍＬ，０．８ｍｇ／ｍＬ，１．０ｍｇ／ｍＬ）、
２．５ｍＬ　１％铁氰化钾溶液，混合均匀后在５０℃恒
温加热２０ｍｉｎ，冷却后加２．５ｍＬ　１０％三氯乙酸溶
液，３　０００ｒ／ｍｉｎ离心分离，取上层清液１．０ｍＬ，加
２．５ｍＬ水，再加０．５ｍＬ　０．１％ＦｅＣｌ３ 溶液，混合均
匀，静置１０ｍｉｎ后在波长７００ｎｍ下测吸光度，测
定３次取平均值。
１．３．４　总抗氧化性的测定［７］：在１０ｍＬ具塞刻度试
管中分别加入１ｍＬ　０．６ｍｇ／ｍＬ提取物，１．０ｍＬ　０．６
ｍｏｌ／Ｌ　Ｈ２ＳＯ４ 溶液，１．０ｍＬ　０．０２８ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ３ＰＯ４ 溶
液，１．０ｍＬ　０．００４ｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）６ＭＯ７Ｏ２４溶液，加入
蒸馏水定容至５．０ｍＬ，摇匀，置９５℃水浴中加热反
应，每３０ｍｉｎ取出冷至室温，以不加抗氧化剂体系为
空白对照，测定６９５ｎｍ波长下的吸光度，与ＢＨＴ进
行对比。
１．３．５　总酚含量的测定：根据文献［８］的方法，稍
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作修改。分别在１０ｍＬ容量瓶中加入０．５ｍＬ不
同浓度邻苯二酚，加０．５ｍＬ　Ｆｏｌｉｎ－酚试剂，混合均
匀后静置 ３ ｍｉｎ 后，再加入 １ ｍＬ　１．９ ｍｏｌ／Ｌ
Ｎａ２ＣＯ３ 溶液，加水定容后混合并避光放置２ｈ，期
间间歇振荡。设置空白调零管，在７６５ｎｍ下测其
吸光度，制作邻苯二酚总酚含量标准曲线。取０．５
ｍＬ　１．０ｍｇ／ｍＬ红药不同提取物溶液，同上操作测
定吸光度，多次测量求平均值。
１．３．６　总黄酮含量的测定［９］：将１ｍＬ不同浓度芦
丁乙醇溶液分别置于１０ｍＬ具塞刻度试管中，分别
加入５ｍＬ水、０．３０ｍＬ　５％ ＮａＮＯ２ 溶液，混合均
匀，５ｍｉｎ后再分别加人０．６０ｍＬ　１０％ ＡｌＣｌ３ 溶
液，摇匀放置５ｍｉｎ后，分别加入２ｍＬ　４％氢氧化
钠水溶液，用水定容至刻度，摇匀，静置１５ｍｉｎ，以
试剂为空白，在５１０ｎｍ处测定不同浓度下芦丁溶
液吸光值。以吸光值 Ａ为横坐标，芦丁浓度为纵
坐标绘制芦丁标准曲线。取１ｍＬ　０．４ｍｇ／ｍＬ提
取物溶液，同上操作测定吸光度，多次测量求平均
值，根据标准曲线计算出提取物总黄酮含量。
１．４　统计学处理
采用ＳＰＳＳ　１７．０统计分析软件的单因素方差
分析方法对实验数据进行差异显著性检验分析，以
Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２　结　　果
２．１　ＤＰＰＨ 自由基清除能力：对红药清除ＤＰＰＨ
自由基的能力进行研究可知，ＥＥ，ＥＡＥ，ＷＥ和ＣＥ
对ＤＰＰＨ自由基具有较强的清除作用，清除能力
强弱顺序为：ＥＥ＞ＥＡＥ＞ＷＥ＞ＣＥ。在实验浓度
范围内，红药各部位和ＢＨＴ对ＤＰＰＨ自由基的清
除率均与提取物浓度呈正量效关系，即随着浓度的
增加，对ＤＰＰＨ 自由基的清除率也增大。在相同
浓度条件下，ＥＥ、ＥＡＥ和 ＷＥ的清除作用远优于
ＣＥ。以最终浓度２５μｇ／ｍＬ为例，在３０ｍｉｎ时，
ＥＥ，ＥＡＥ，ＷＥ 和 ＣＥ 的自由基清除率分别为
８６．０１％，８５．５９％，７１．９１％，４３．３２％，可见 ＥＥ 和
ＥＡＥ具有很好的清除活性，ＷＥ有良好的活性，而
ＣＥ的活性则较弱，前三者的清除效果均比对照
ＢＨＴ（６１．１０％）要好。
２．２　还原能力：通过显色反应测定抗氧化物质将
铁氰化钾的Ｆｅ３＋ 还原成Ｆｅ２＋（亚铁氰化钾）的能
力，亚铁氰化钾与ＦｅＣｌ３ 反应生成在７００ｎｍ处有
最大吸光度的普鲁士蓝（Ｆｅ４［Ｆｅ（ＣＮ）６］３），吸光度
值越大，说明物质的还原能力越强。样品的还原能
力实验结果显示：在浓度为０．２～１．０ｍｇ／ｍＬ时，
红药提取物随着浓度的增加，样品的吸光度越大，
还原能力越强。样品的活性顺序与ＤＰＰＨ自由基
清除法的相同，均为ＥＥ＞ＥＡＥ＞ＷＥ＞ＣＥ。当样
品质量浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ时，ＥＥ，ＥＡＥ，ＷＥ和
ＣＥ的吸光度分别为１．５７４、１．５６６、１．０９２和０．３７４，
在相同的浓度条件下，对照 ＢＨＴ 的吸光度为
１．９７５，表明ＥＥ和ＥＡＥ提取物具有较强的还原能
力，其还原效果与ＢＨＴ比较接近，ＷＥ和ＣＥ则远
不如ＢＨＴ。
２．３　总抗氧化能力：本研究显示，红药高极性有机
溶剂提取物的总抗氧化能力优于低极性的，而且随
着时间的改变 ＥＥ和 ＥＡＥ的效果越来越好，１５０
ｍｉｎ时达到极值，吸光度分别为０．６１８，０．６０１；而
ＷＥ，ＣＥ的效果相对差一些，１５０ｍｉｎ时最大值分
别为０．４３０，０．３９１。红药提取物测定结果与前面
ＤＰＰＨ自由基清除能力顺序较为一致。对照ＢＨＴ
的作用效果则比较缓慢，变化范围仅为０．１５５～
０．３４０，效果均不如红药四种提取物，可能是因为
ＢＨＴ的抗氧化作用机制与红药提取物的有所不
同。
２．４　总多酚和总黄酮含量：按照１．３．５和１．３．６实
验方法，绘制总多酚和总黄酮含量测定标准曲线，以
吸光度（Ｙ）对邻苯二酚浓度（Ｘ，μｇ／ｍＬ）作图，得到邻
苯二酚标准曲线Ｙ＝０．１０２　１＋０．１６１　９Ｘ（Ｒ２＝０．９９７
６）；以吸光度（Ｙ）对芦丁浓度（Ｘ，μｇ／ｍＬ）作图，得
到芦丁标准曲线Ｙ＝０．０４０　０＋０．００９　５　Ｘ（Ｒ２＝
０．９９９　８），以此来计算红药各部位总多酚和总黄酮
的含量，结果见表１。
表１　红药提取物总多酚和总黄酮含量 （珚ｘ±ｓ）
样品
总多酚含量
（μｇ邻苯二酚／ｍｇ提取物）
总黄酮含量
（μｇ芦丁／ｍｇ提取物）
ＥＥ　 ６２．８±０．９　 １１１．８±１．６
ＥＡＥ　 ５１．８±０．６　 １１５．３±１．２
ＷＥ　 ３７．８±０．４　 ６９．６±０．８
ＣＥ　 １２．４±０．３　 ３５．５±０．５
　　由表１可知，红药提取物尤其是ＥＥ和ＥＡＥ
含有较丰富的多酚类和黄酮类物质，１ｍｇ红药提
取物 ＥＥ、ＥＡＥ的总多酚含量分别相当于６２．８、
５１．８μｇ邻苯二酚，１ｍｇ红药提取物ＥＥ、ＥＡＥ的
总黄酮含量分别相当于１１１．８、１１５．３μｇ芦丁。
ＥＥ，ＥＡＥ良好的自由基清除能力和比较好的抗氧
化活性可能与两者较高含量的酚类物质及其衍生
物、黄酮类物质有重要关联，具体的作用机制尚未
·３３３１·山西医药杂志２０１６年６月第４５卷第１１期　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｊｕｎｅ　２０１６，Ｖｏｌ．４５，Ｎｏ．１１
清楚，需要进一步的分离和识别。
３　讨　　论
红药中含有较丰富的酚类和黄酮类物质，具有
较强的自由基清除能力和抗氧化能力，活性高低顺
序为：ＣＥ＜ＷＥ＜ＥＡＥ＜ＥＥ。整体而言，随着有机
溶剂极性的增大，相应的红药提取物的抗氧化性能
也越强。红药乙醇和乙酸乙酯提取物具有较好的
抗氧化能力，抗氧化活性成分可能集中存在于这两
个部位，可将其作为天然抗氧化剂的来源对待，具
有开发天然抗氧化剂的潜力，这为进一步开发利用
红药资源提供了参考价值。红药较强抗氧化活性
可能与其含有的多酚类、黄酮类物质有关，具体是
那些物质在起作用、哪些物质主要构成抗氧化系统
等问题，有待下一步的深入研究。
参 考 文 献
［１］ 王满元，樊媛洁，张静，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ同时测定民族药红药
中苯乙醇苷类化合物ｐｌａｎｔａｉｎｏｓｉｄｅ　Ｄ和毛蕊花糖苷［Ｊ］．中国
中药杂志，２０１０，３５（２３）：３１８８－３１９１．
［２］王满元，杨岚，屠呦呦．红药苯乙醇苷类化学成分的研究［Ｊ］．
中国中药杂志，２００５，３０（２４）：１９２１－１９２３．
［３］王满元，杨岚，屠呦呦．红药化学成分的研究［Ｊ］．中国中药
杂志，２００６，３１（４）：３０７－３０８．
［４］覃筱燕，唐丽，云妙英，等．红药提取物对小鼠镇痛作用的研
究［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００８，２８（１３）：１０５１－１０５２．
［５］Ｐａｎ　ＹＭ，Ｚｈｕ　ＺＲ，Ｈｕａｎｇ　ＺＬ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｒｅｅ
ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｒｅｄ　ｐｉｇｍｅｎｔ　ｆｒｏｍ　Ｏｓｍａｎ－
ｔｈｕｓ　ｆｒａｇｒａｎｓ′ｓｅｅｄｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２００９，１１２（４）：９０９－９１３．
［６］Ｈｅ　ＣＨ，Ｊｉ　ＸＷ，Ｐａｎ　ＹＭ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｌｃｏ－
ｈｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｍｏｎｉａ　ｐｉｌｏｓａ　Ｌｅｄｅｂ［Ｊ］．Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　Ｒｅｓ，
２０１０，１９（５）：４４８－４６１．
［７］Ｐｒｉｅｔｏ　Ｐ，Ｐｉｎｅｄａ　Ｍ，Ａｇｕｉｌａｒ　Ｍ．Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｑｕａｎｔｉｔａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｈｏｓ－
ｐｈｏｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ　ｃｏｍｐｌｅｘ：ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉ－
ｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｅ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９９，２６９（２）：３３７－
３４１．
［８］Ｓｐａｔａｆｏｒａ　Ｇ，Ｂａｒｂａｇａｌｏ　Ｅ，Ａｍｉｃｏ　Ｖ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｒａｐｅ　ｓｔｅｍｓ　ｆｒｏｍ
Ｓｉｃｉｌｉａｎ　Ｖｉｔｉｓ　ｖｉｎｉｆｅｒａ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ａｓ　ａ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ－ｅｎ－
ｒｉｃｈｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＬＷＴ－
Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ　Ｔｅｃｈｎ，２０１３，５４（２）：５４２－５４８．
［９］Ｐａｎ　ＹＭ，Ｈｅ　ＣＨ，Ｗａｎｇ　ＨＳ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ
ｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍａｊｏｒ
ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２０１０，１２１（２）：４９７－５０２．
（收稿日期：２０１５－０９－１８）
·消　　息·
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