全 文 ：中国兽医科技 19 9 1年 第 2 1卷 第 8期一一 ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~一一羊 美 丽 马 醉 木 中 毒 的 毒 理 学 研 究— 美丽马醉木的毒性董 亮 张尔亮 陈安亨 官米佳 (四川省西昌农业专科学校 )阿都阿且 隶木达 欧其拉一 (美姑县畜牧局 )摘要 本试验结果表明 , 美丽 马醉木小 白鼠 L D S 。 为 119 。 18 m g / k g 干叶量 。 试验动物 出现 了与自然发病相 同的在状 。 中毒动物在临床上的主要表现为 : 剧烈 、 须繁的呕吐 , 严重 的 呼 气性
呼吸困难 , 后 月支麻痹 , 心脏衰弱等在状 。 在病理 变化上 以 全身各组织器官 出血 , 实质器官变性或
部分坏死 , 肺严重淤血 , 部分肺叶气肿 ; 林 巴结和脾脏生 发中心明显 ; 胰岛区 变小 , 腺泡细胞胞
浆呈 网状 ; 小 脑浦金野 氏细胞部分溶解为特点 。
关键 词 : 美丽 马醉木 中毒 羊
四川省的凉山州 、 美姑县历年来 , 羊采食美丽
马醉木发生中毒死亡。 仅炳途乡每年因美丽马醉木
中毒死羊 30余头 。 当美丽马醉木生发新枝和开花季
节 ( 4 一 6 月 ) 最易发生中毒 。 家畜中绵羊最易发
生中毒 , 山羊次之 , 黄牛、 马很少发生中毒 。
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上1二
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材料与方法
( 一 ) 毒草形态特征及鉴定 由植物学讲师李
翔 、 副教授刘明岗帮助鉴定 。
( 二 ) 试验用美丽马醉木 1 9 9 0年 5 月 9 日采
于美姑县炳 途 乡 红 井 、 特 口 两 地 的 盛 花 期 叶
片。
( 三 ) 试验动物 山羊 6 只 ( 4 母 、 2 公 ) ,
平均体重 2 8 . 1 7 士 2 . 3 6 k g , 兔 6 只 ( 1 母 , 5 公 )
平均体重 1 . 8 士。 . 26 k g , 购于 自由市场 , 用于致毒
实验 。 小白鼠 5。只 , 公母各半 , 平均体 重 35 . 27 士
4
.
51 9
, 来源于本校小动物室 , 用于 L D S 。的测定 。
致毒前 , 试验动物进行临床健康检查 。 山羊还进行
了实验室检查 。
( 四 ) 致毒方法及荆且 ①山羊 : 随机分为二
组 。 一组 口服鲜叶 , 剂 量分别为 : 1 0 0 、 3 0 0 、 50 0
g ; 一组用干叶热水浸出液肌肉注射 。 注射量相当
于干叶 8 、 9 、 1 0 9 。 ② 兔 : 用干 叶热 水浸出液皮
下注射染毒 , 剂量 为 : 2 50 m g / k g干叶量 。 ③小白
鼠 : 热水浸出液皮下注射染毒 。
( 五 ) 临床症状现察 采食毒叶后 , 详细观察
临床反应 。
( 六 ) 实验宣检查
1
. 血液学检查 : ①血常规 ; ②红细胞压积容
量测定 ; ③胆红素定性试验 , ④血清谷草转氮酶测
定 ; ⑥血清谷丙转氨酶测定 ; ⑥血液非蛋白氮测定 多
2
. 尿液检 查 : ①尿蛋 白检 查 ; ②尿 潜血检
查 ; ⑧尿有机沉渣检查 ;
3
. 病理学检查 : ①病理解剖学检查 ; ②病理
组织学检查 : 死后立即剖解 , 采取心 、 肝 、 脾 、 肺 、
肾、 淋巴结 、胰脏 、脑等组 织器官 , 石蜡切片 , H . E
染色 。
试验结果
( 一 ) 毒草形态特征及鉴定 该毒草为常绿灌
木 , 主要分布在海拨 2。。 0一 2 6 0 0m 的山坡地 , 阴 、
阳面均有生长 。 平均株高30 ~ 50 。 m , 呈丛状生长 。
枝多而密 , 叶为硬革质披针形 , 边缘有锯齿 。 网脉
上面明显凹入 , 下面隆起 。 圆锥花序 , 顶生 , 花白
色下垂 , 花尊 5 裂 , 花冠壶状 , 5 浅 裂 。 雄 蕊 10
个 , 花丝有毛 , 花药背面有 2 个反折的芒 , 花柱长
过雄蕊 , 茹果球形 。 经鉴 定为: 杜鹃花科 、 马醉木
属的美丽马醉木 ( P i e r i : f o r m o s a ) 。
( 二 ) 小白鼠 L D S 。的测定 详见表 1 ’。
表 1 小白鼠 LO 。 。的测定结果
剂 量
( m g / k g )
动物数 }死亡数 }死 亡率
( 拓 )
存活率
( 拓 . )
4 组
5 组
3 6 0
2 1 0
1 3 0
7 8
4 6
。
DOI : 10. 16656 /j . i ssn. 1673 -4696. 1991. 08. 001
中国兽 医科技 19 9 1年 第 2 1卷 第 8 期
通过直线回归法计 算 得 : LD 。 。为 9 1 1. 8 1m g /
k g
,
L D S 。的 9 5%可 信 限 为 1 0 4 . 7 9~ 1 3 5 . 5 4m g /
k g
。
( 三 ) 临床观察结果 山羊 : 采食组 一 般在采
食后 2一 选小时发病 , 注射组 在 染毒 后 5 一 10 分
钟发病 。 发病初期表现为唾液分泌增多 , 吞咽频繁
( 5 一24 次 /分 ) , 惊恐不安。 随后精神转为沉 郁 ,
目光呆滞 , 出现频繁而剧 烈的喷射状呕吐 。 腹壁起
伏明显 , “ 息劳沟 ” 显露 , 呼 吸频 率下 降 。 呼 吸
时 , 头颈平伸呈典型 的间断性呼气性呼吸困难。 肺
部听诊 , 呼吸音粗厉 , 有时有罗音 , 呼气时有明显
间断性呼气音 ( 每次呼气有 2 一 3 次间隙 ) 。 心跳
加快 、 强度增加 。 体躯摇晃 , 站立不稳 。 站立时 ,
四肢叉开或靠墙站立 , 后肢肌肉震颤 。 尿频 , 粪便
带有大量粘液 。 随病 情 进一 步发展 , 患畜极度虚
弱 、 出现嗜睡或昏迷 。 常磨牙 、 呻吟或尖叫 , 后躯
麻痹 , 肌肉松弛 , 卧 地不起 。 针刺后 肢 反 应 迟
钝 。 瞳孔对光反射消失 , 视力降低或消失 。 呕吐仍
不时出现 , 瘤胃蠕动消失 , 出现便血 , 体温轻度升
高 , 呼吸严重困难 , 患畜张 口呼 吸 , 心跳 急 速而
弱 , 第一心音增强 , 第二心音减弱或消失 , 脉弱或
不感手 , 最后挣扎死亡 。 死亡的时间因染毒量的尤
小和染毒方式的不同而异 。 注射染毒组一般在 3。一
60 分钟内死亡 , 口服组在 6 一 48 小时内死亡 。
兔及小白鼠 : 兔 及小 白鼠症状与山羊基本相
同 , 但兔 、 小白鼠只有呕吐动作 , 无胃内物呕 出 ;
四肢高度开张呈典型 的游泳状 ; 临死前有明显 的角
弓反张翻滚 、 跳跃 、 排尿等动作 , 小 自 鼠还 有 竖
尾 ,摆尾等动作 。 兔 、小白鼠死亡时间一般在 5 一 3 0
分钟内 , 染毒量大的可在儿分钟内死亡 。
( 四 ) 实验室检查结果
l
。 山羊血 液学检 查 : 详见表 2 。
表 2 山羊血液学检查
1 4 9 0
。
8 3 士 3 0 2 。 8 9
1 7 8 2 0
。
8 3 士 2 4 8 9 。 2 7
7
。
6 2 士 0 。 4 7
项 目 方 法 头数 染 毒 前 染毒后 t 检查
( n ) (又士 S ) (又士 S ) (P值 )
红细胞计数 (万 /卜 l) 试管稀释法 6 1 1 5 7 。 5 0 士 1 7 6 。 2 6 1 4 9 0 。 8 3 3 0 2 。 8 9 < O 。 0 5
白细胞计数 (千 /川 ) 试管稀释法 6 1 2 8 7 5 。 3 3 士 1 7 8 3 。 3 8 < 0 。 0 1
血红蛋白测定 ( g % ) 6 6 。 7 士 0 。 4 7 ! 7 。 6 2 0 . 4 7 < 0 . 0 1红细胞压积容量 (% ) 萨利氏法 6 2 4 。 3 3 土 2 。 5 { 2 9 · 2 7 土 3 . 3。 0 。 0 5
温氏法
白 嗜酸性 瑞氏染色 6 1 。 3 3 士 0 。 8 2 0 < 0 . 0 1
细 嗜碱性 瑞氏染色 6 0 。 1 6 土 0 。 41 0 < 0 。 0 5
胞 瑞氏染色 6 1 。 3 3 土 1 。 6 2 2 5 。 6 7 土 9 。 5 6 < 0 。 0 1分 嗜 幼稚型 1 0 。 1 7 上 8 8 2 。 0 0 士 1 6 。 4 7 > 。 0 5
类 中 杆状型 瑞氏染色 6 3 3 。 1 7 士 3 。 1 3 9 。 5 士 7 。 1 4 < 0 。 0 1计 性 分叶型 瑞氏染色 6 5 2 。 5 0 士 9 。 1 4 4 1 。 6 7 士 1 8 。 2 9 > 0 。 0 5
数 瑞氏染色 6 l 。 3 3 士 1 。 0 3 0 。 3 3 土 0 。 5 2 < 0 。 0 5淋巴细胞 6 0 。 1 7 土 0 。 4 1 0 。 8 3 土 0 。 7 5 > 0 。 0 5
单核细胞
浆 细 胞
金氏法 6 4 1 。 2 8 士 2 。 3 0 61 。 4 7 士 1 1 。 3 9
金氏法 6 3 2 7 。 6 5 土 3 8 。 7 2 5 0 4 。 1 2 士 4 7 。 1 9
纳氏法 6 3 8 。 5 8 士 1 2 。 0 5 7 0 。 4 2 士 9 。 0 2
6
6
2
. 尿液检查 : 染毒前尿蛋白、 尿潜血试验都
是阴性 ; 染毒后均为阳性 。 染毒后尿沉渣有少量红
细胞 、 肾小管上皮细胞 、 膀胧上皮细胞 。
( 五 ) 病理学检查
1
. 病理解刹 : 病程较短的 , 一般无明显的眼
观变化 ; 病程较长的主要表现为 : 血液凝固不全 ,
体表淋巴结肿大 , 呈灰白色 , 切面外翻 , 多汁 , 内
脏淋巴结肿大 , 有明显的出血点和出血斑 。 内脏各
组织器官除前胃外 , 均有程度不同 的出血点或出血
斑 。 其中以真胃、 回肠 、 盲肠 、 胰脏、 胆囊、 膀胧
出血尤为严重 。 此外 , 肺严重淤血 , 体积增大 , 切
面外翻 , 流出大量泡沫状血样液体 , 部 份 肺 叶气
中国兽医科技 9 9 1 1年
肿 。 心脏柔软 , 心肌变薄 。 膀胧空虚 。
2
. 病理组织学变化 : 实质器官普 遍 有 出血
( 点状或斑状 ) 和变性 , 肺小静 脉 及毛 细 血管扩
张 , 其中充满大量红细胞 ; 肺泡高度扩张、 肺泡间
隙相对变薄 , 有些破裂 , 相互融合成较大的囊腔 。
肝小叶周边细胞颗粒变性明显 , 部分小叶细胞核碎
裂溶解成均质红染的团块 。 肾小球毛细血管球体积
增大 , 充满肾球囊 , 细胞核数增多 。 肾小管上皮细
胞肿胀 , 颗粒变性 , 管内充满大量均质红染的物质
和一些肾小管上皮细胞 。胰脏 、 胰岛区变小 , 腺泡细
胞浆呈 网状 , 细胞界线不清。 小脑浦金野氏细胞肿
胀 , 部分核溶解 ; 脑 白质 、 小胶质细胞增多 。 淋巴
结生发中心 明显 , 中心内散在有较多红细胞 。 脾窦
增大 , 内有许多红细胞 ; 脾小体增大 , 生发中心明
显 , 中心内有较多 网状细胞 。 其他组织器官无异常
发现 。
讨论与小结
( 一 ) 通过人工致毒试验 , 出现了与自然发病
相同的临床症状 , 从而证实美姑县历年来发生的羊
有毒植物中毒为美丽马醉木中毒 。 家畜美丽马醉木
中毒的研究在国内尚属首次 , 国外也很少有这方面
的报道 。
( 二 ) 由于美丽马醉木小白鼠 L D S 。为 1 1 9 . 18
切 g / k g 干叶量 , 大于敌敌畏和敌百虫小 白鼠 L D 。 。
〔 ` ’ “ 〕 ; 所以 , 其 毒性是 相当 强 的 , 为 剧 毒 植
物 。
第 21 卷 第 8 期 S
( 三 ) 中毒家畜在临床上表现出的剧烈 、 频紧
的呕吐 , 严重的呼气性呼吸 困难 , 心 衰 , 后肢麻
痹 , 便血等症状 。 在病理学上表现的全身各组织器
官出血 , 实质器官变性或坏死 , 肺严重淤血 , 肺泡
高度气肿 , 脑浦金野 氏细胞部份溶解等变化 , 具有
一定的诊断意义。
( 四 ) 实验室检查结果提示家畜中毒后有较严
重的脱水、 炎症以及 心 脏 、 肝 脏 、 ’ {子脏 功 能 损
伤 。
( 五 ) 口服染毒与注射染毒在临床症状和病理
变化上基本相同 ; 但在发病时间 , 病程长短 , 以及
染毒剂量上有较 大差 异 。 这可能与山羊中毒后剧
烈频繁的呕吐和肠 道吸收功能严重障碍 有 密 切 关
系 。
( 六 ) 有关美丽马醉木有毒成分的分离鉴定 ,
以及中毒机理和防治方面的研究现 已基本完成 , 将
在以后详细报道 。
参 考 文 献
〔 1 〕王洪章等主编 : 《 家畜中毒学 》 , 农业出版
社 , 1 9 8 5 · 1 6一 1 8
〔 2 〕朱蓓蕾编著 : 《 动物毒理学 》 , 上海科学技
术出版社 , 1 9 8 9 . 3 8一 3 9
〔 3 〕 E 。 G . C , 克拉克等著 , ( 王建元等译 ) :
《 兽医毒物 学 》 , 陕 西科学 技术出版社 ,
1 9 8 4
。
8
( 1 9 9 0年 1 2月 2 0 日收稿 )
C o v疫苗毒在v e r 。细胞内包涵体形成规律的研究
金扩世 于永仁
( 解放军兽医大学军事兽医研究所 , 长春 )
采用V e r 。 细胞生产 C D V ( 犬瘟热 ) 弱毒疫苗
是 目前国内外生产 C D V 疫苗的主要方法 。 若提高
C D V 疫苗的效价 , 必 须掌握细胞株的选择 、 培养
方法 、 收毒时间 、 疫苗 的保存及疫苗的使用时机。
为 了把好疫苗的培养及收毒 时间 关 , 我们进行了
C D V 疫苗毒在V e r o 细胞内生长规律的试验 。 C D V
病毒可在细胞内产生包涵体 , 用 G和 H E 染色后 在
普通显微镜下即可进行 检 查 。 本 试验结果表明 ,
C D V疫苗毒在V er o 细胞中生长 , 从接毒后第 3 天
开始在细胞浆中出现包涵体 , 第 4 天在胞浆及胞核
中都出现包涵体 , 第 5 天时胞浆及胞核中仍有较多
包涵体 , 但此时细胞脱落数明显增加 。 因此 , 在接
种病毒后第 5 天收获 , 病毒颗粒多 , 效价高。 几年
来 , 我们采用这种培养方式生产了大量 C D V 疫苗 ,
经现场应用均取得了很好的免疫效果 。
材料与方法
( 一 ) C O V疫苗毒 为于永仁研究员 培 养 驯
化株 。
( 二 ) V er 。细胞 购于 中国兽药监察所 。
( 三 ) 培养方法
1
. 细胞培养 : 采用青霉素瓶 , 内装一小玻璃
片 , 将细胞培养物用消化液消化下来后 , 加入营养
液 ( M E M , 1 0 %胎牛血清 , 双抗 , p H 7 . 凌 ) 混匀 ,
移入青霉素瓶中 , 每瓶 加入 1 m l 细胞液 , 于 37 ℃
培养 , 待形成单层细胞后 接毒 。
2
. 接毒 方 法 : 先 将培养液倒出 , 用H a n l’s
液洗 2 遍 , 加入疫苗毒 l m l , 于 37 ℃ 吸附 1 . 5小时 ,
倒出病毒液 , 加入维持液 ( M E M和 L H各半 , 3 %
胎牛血清 , 双抗 , p H 7 . 4 ) I ln l , 于 37 ℃继续培养。