全 文 ：川桑中桑皮素、桑呋喃 A和总黄酮的测定
郭伟强1， 王 硕1， 李 军1， 白雪梅1， 倪 刚2， 于德泉2， 甄 攀1*
(1． 河北北方学院，河北 张家口 075000;2． 中国医学科学院药物研究所，北京 100050)
收稿日期:2015-11-25
基金项目:国家自然科学基金 (21132009) ;国家“重大新药创制”科技重大专项 (2012ZX09301002001003) ;河北省高等学校科学研
究计划重点项目 (ZD2016016) ;河北北方学院应用化学创新团队项目 (CXTD1306)
作者简介:郭伟强 (1991—) ，男，硕士生，研究方向为药物化学。E-mail:g． 325@ 163． com
* 通信作者:甄 攀 (1965—) ，女，教授，硕士生导师，研究方向为药物化学。E-mail:zhenpan8051226@ 126． com
摘要:目的 建立 HPLC法同时测定川桑 Morus notabilis Schneid． 中桑皮素和桑呋喃 A含有量，分光光度法测定总黄
酮含有量。方法 桑皮素和桑呋喃 A的分析采用 YMC-Pack ODS-A色谱柱 (5 μm，4. 6 mm × 250 mm) ;流动相甲醇-水
(80 ∶ 20) ;体积流量 1 mL /min;柱温 25 ℃;检测波长 210 nm。以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂，桑皮素为对
照品，测定总黄酮含有量。结果 无水乙醇对桑皮素和桑呋喃 A 的提取效率最高，两者分别在 4. 88 ～ 234. 00 μg /mL
和 4. 16 ～ 199. 88 μg /mL范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为 99. 5%和 95. 0%，ＲSD (n = 6)分别为 7. 5%
和 7. 6%。总黄酮在 7. 987 2 ～ 199. 68 μg /mL范围内线性关系良好，吸光度 ＲSD (n = 5)为 2. 72%。两批样品中 3 者
含有量均有显著差异。结论 该方法灵敏稳定，重复性好，可用于川桑的质量控制。
关键词:川桑;桑皮素;桑呋喃 A;总黄酮;HPLC;分光光度
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2016)11-2506-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 11. 044
川桑 Morus notabilis Schneid． 又名圆叶桑，属于桑科桑
属植物，主要分布在四川和云南［1-2］，但有关其化学成分的
研究仅有 2 篇文献［3-4］。本课题组前期利用柱色谱、薄层
色谱、制备型 HPLC色谱等分离手段，从川桑枝 95%乙醇
提取物中分离得到多种成分，发现有 2 种含有量较高，经
鉴定为桑皮素和桑呋喃 A［5］，都是生物活性较强的天然成
分，尤其是前者具有广泛的药理作用，如降血糖［6-7］、降血
脂［8］、降血压［9］、抗肿瘤［10-11］、抗氧化［12］、抗炎［13］、抗
菌［14］、免疫调节［15］等。本实验采用 HPLC法同时测定两者
含有量，并以桑皮素为对照品测定总黄酮含有量，为深入
开发该药材的药用价值提供实验依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪 (美国 Agilent 公
司) ;YMC-Pack ODS-A色谱柱，配置 HP HPLC 3D 化学工
作站 (日本 YMC 公司) ;UV-6100S 紫外-可见分光光度计
(上海美谱达仪器有限公司) ;WD-9415 型超声震荡清洗仪
(天津六一仪器厂)。
1. 2 材料 川桑 1 于 2014 年 3 月采自云南省金平县，由
中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定为川桑 Morus
notabilis Schneid． 的树枝;川桑 2 于 2015 年 8 月采自同一
地方，由河北北方学院赵恒成实验师鉴定为正品。桑皮素
和桑呋喃 A从川桑中分离制备，含有量均大于 98%。甲醇
为色谱纯 (赛默飞世尔科技中国有限公司) ;环己烷、石
油醚、丙酮、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、无水乙醇等均
为分析纯 (天津市风船化学试剂科技有限公司) ;水为娃
哈哈纯净水 (杭州娃哈哈集团有限公司)。
2 实验方法
2. 1 桑皮素和桑呋喃 A含有量测定
2. 1. 1 色谱条件 YMC-Pack ODS-A 色谱柱 (5 μm，
4. 6 mm × 250 mm) ;流动相甲醇-水 (80 ∶ 20) ;检测波长
210 nm;柱温 25 ℃;体积流量 1 mL /min。
2. 1. 2 提取液制备 取川桑 1 和川桑 2 适量，干燥，粉
碎，前者精密称取 0. 50 g，后者精密称取 1. 0 g，10 mL 无
水乙醇浸泡 2 h，40 ℃下超声 30 min，转移上清液，残渣
重复提取 2 次，合并提取液，55 ℃下挥干乙醇，3 mL无水
乙醇溶解，0. 45 μm微孔滤膜过滤。
2. 2 总黄酮含有量测定
2. 2. 1 提取液制备 取川桑 1 和川桑 2 适量，干燥，粉
碎，精密称取 0. 5 g，10 mL无水乙醇浸泡 2 h，40 ℃下超
声 30 min，转移上清液，残渣重复提取 2 次，合并提取液，
无水乙醇定容至 25 mL。
2. 2. 2 方法 精密吸取提取液适量，置于 25 mL 量瓶中，
加入 1. 0 mL 5% NaNO2，摇匀，放置 6 min，加入1. 0 mL
10% Al(NO3)3，摇匀，放置 6 min，加入 10. 0 mL 4%
NaOH，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，放置 15 min，510 nm
波长下测定吸光度。并制作平行空白。
3 实验结果
3. 1 桑皮素和桑呋喃 A
3. 1. 1 紫外吸收光谱 取对照品桑皮素和桑呋喃 A 适量，
色谱纯甲醇溶解，紫外-可见分光光度计在 200 ～ 400 nm 波
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长处扫描，以甲醇为空白，光谱图见图 1。
1． 桑皮素 2． 桑呋喃 A
图 1 紫外吸收光谱
3. 1. 2 系统适用性考察 在“2. 1. 1”项色谱条件下检测，
桑皮素保留时间为 14. 9 min，桑呋喃 A 为 17. 8 min。以桑
皮素计算，理论塔板数为 5 999，对称因子为 0. 90，与其前
一组分分离度为 3. 20，后一组分为 3. 65;以桑呋喃 A 计
算，理论塔板数为 7 288，对称因子为 0. 93，与其前一组分
分离度为 3. 65，后一组分为 1. 89。具体见图 2 和图 3。
1． 桑皮素 2． 桑呋喃 A
图 2 对照品 HPLC色谱图
1． 桑皮素 2． 桑呋喃 A
图 3 样品 HPLC色谱图
3. 1. 3 工作曲线 精密称取对照品桑皮素 62. 4 mg、桑呋喃
A 53. 3 mg，1 mL甲醇溶解，倍比稀释后进样。以质量浓度
为横坐标 (x) ，峰面积为纵坐标 (y)绘制工作曲线，得回
归方程分别为桑皮素 y =81. 781x +471. 30 (r = 0. 999 6) ，线
性范围 4. 88 ～ 234. 00 μg /mL;桑呋喃 A y = 131. 02x +
390. 82 (r = 0. 999 4) ，线性范围 4. 16 ～ 199. 88 μg /mL。
3. 1. 4 精密度试验 将桑皮素和桑呋喃 A混合后重复进样
3次，每次 20 μL，测得桑皮素和桑呋喃 A 峰面积 ＲSD 分
别为 1. 53%和 2. 37%，表明仪器精密度良好。
3. 1. 5 重复性试验 精密称取 0. 5 g 川桑 1，共 5 份，按
“2. 1”项下方法处理，每份进样 3 次，每次进样 20 μL，
测得桑皮素和桑呋喃 A 峰面积 ＲSD 分别为 5. 13% 和
5. 91%，表明该方法重复性良好。
3. 1. 6 加样回收率试验 精密称取 0. 5 g 川桑 2，共 6 份，
向 1、2 号样品中加入 40 μg /mL 桑皮素对照品溶液
0. 50 mL、20 μg /mL 桑呋喃 A 对照品溶液 0. 50 mL;向 3、
4号样品中加入桑皮素 1. 0 mL、桑呋喃 A 1. 0 mL;向 5、6
号样品中加入桑皮素 2. 0 mL、桑呋喃 A 2. 0 mL。按“2. 1”
项下方法处理，计算回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果 (n =6)
桑皮素 桑呋喃 A
加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /% 加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
20. 0 18. 8 94. 0
20. 0 17. 9 89. 5
40. 0 41. 8 104. 5
40. 0 38. 3 95. 8
80. 0 84. 1 105. 1
80. 0 86. 6 108. 3
99. 5 7. 5
10. 0 8. 53 85. 3
10. 0 8. 83 88. 3
20. 0 20. 1 100. 5
20. 0 18. 9 94. 5
40. 0 41. 7 104. 3
40. 0 38. 8 97. 0
95. 0 7. 6
3. 1. 7 提取效率考察 精密称取 0. 5 g 川桑 1，共 6 份，
用不同溶剂按“2. 1”项下方法处理，考察提取效率，结
果见表 2。
3. 1. 8 含有量测定 精密称取川桑 1 和川桑 2 各 5 份，前
者每份 0. 5 g，后者每份 1. 0 g，按“2. 1”项下方法处理，
计算含有量，结果见表 3。
表 2 提取效率考察结果
溶剂 桑皮素 /(mg·g － 1) 桑呋喃 A /(mg·g － 1)
石油醚 0. 28 0. 037
丙酮 0. 42 0. 028
三氯甲烷 0. 48 0. 043
甲醇 0. 90 0. 17
乙酸乙酯 0. 93 0. 11
无水乙醇 1. 07 0. 18
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表 3 含有量测定结果 (n =5)
样品
桑皮素 桑呋喃 A
含有量 /(mg·g － 1) 平均值 /(mg·g － 1) ＲSD /% 含有量 /(mg·g － 1) 平均值 /(mg·g － 1) ＲSD /%
川桑 1 1. 128 1. 07 4. 8 0. 200 0. 18 6. 2
1. 086 0. 179
1. 026 0. 177
1. 005 0. 185
1. 100 0. 170
川桑 2 0. 142 0. 15 5. 7 0. 026 0. 025 6. 8
0. 141 0. 022
0. 162 0. 026
0. 152 0. 025
0. 148 0. 024
3. 2 总黄酮
3. 2. 1 工作曲线 精密称取桑皮素对照品适量，同法配制
对照品溶液，测定吸光度 A。结果，回归方程为 A =
0. 003 0x － 0. 018 4 (r = 0. 985 4) ，线性范围 7. 987 2 ～
199. 68 μg /mL。
3. 2. 2 精密度与稳定性试验 吸取川桑 1 提取液适量，同
法显色并测定吸光度，连续 5 次，测得精密度 ＲSD 为
0. 32%，表明仪器精密度良好;吸取川桑 1 提取液适量，
同法显色，每隔 5 min 测定，测得吸光度 ＲSD (n = 5)为
2. 72%，表明提取液在 25 min内稳定。
3. 2. 3 含有量测定 精密称取川桑 1 和川桑 2 各 0. 5 g，
按“2. 2”项下方法处理，计算含有量，结果见表 4。
表 4 含有量测定结果 (n =4，以桑皮素计)
样品 吸光度
总黄酮 /
(mg·g － 1)
平均值 /
(mg·g － 1)
ＲSD /%
川桑 1 0. 204 30. 32 31. 69 3. 6
0. 216 32. 69
0. 210 31. 17
0. 215 32. 59
川桑 2 0. 130 20. 42 20. 90 3. 7
0. 132 20. 81
0. 143 22. 02
0. 129 20. 35
3 讨论
川桑中桑皮素含有量较高，其具有多种生物活性，尤
其是抗肿瘤和降血糖，有重要的潜在应用价值，值得深入
研究。作为其含有量丰富的储备前体，川桑应受到重视。
本实验两种川桑枝中桑皮素、桑呋喃 A 以及总黄酮含有量
有显著差异，可能与其采收季节不同有关，有待作进一步
探讨。
紫外吸收光谱显示，桑皮素与桑呋喃 A 的吸收峰相差
较远。鉴于川桑中前者含有量较高，而后者较低，本实验
选择后者有最大吸收的 210 nm作为检测波长，可提高其检
测灵敏度，并且两者分离度良好。
不同溶剂对桑皮素的提取效率为石油醚 ＜丙酮 ＜三氯
甲烷 ＜甲醇 ＜ 乙酸乙酯 ＜ 无水乙醇，而对桑呋喃 A 为丙
酮 ＜石油醚 ＜三氯甲烷 ＜乙酸乙酯 ＜甲醇 ＜无水乙醇。由
此可知，无水乙醇对两者的提取效率都较高，故将其作为
提取溶剂。
川桑枝中含有大量黄酮类成分，大多具有重要的生物
活性［16-19］，值得深入研究。本课题组前期从中分离得到多
种黄酮类成分，其中桑皮素含有量最高，而且易于纯化，
故以自制桑皮素为对照品，测定总黄酮含有量。
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无梗五加果实提取物总多糖测定及单糖组成分析
管美玉， 刘玉强， 才 谦* ， 庞 雪， 刘小丹
(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)
收稿日期:2015-11-14
基金项目:辽宁省自然科学基金项目 (20102147)
作者简介:管美玉 (1989—) ，女，硕士生，从事中药化学研究。Tel:13478940902，E-mail:1806077448@ qq． com
* 通信作者:才 谦 (1972—) ，女，教授，从事中药化学和中药炮制学研究。Tel: (0411)85890125，E-mail:caiqianmail@ sina． com
摘要:目的 测定无梗五加 Acanthopanax sessiliflorus (Ｒupr． et Maxim)Seem． 果实提取物总多糖含有量，并分析其单
糖组成。方法 水提醇沉法与 Sevage法得到提取物，苯酚-硫酸比色法测定其中总多糖含有量，三氟乙酸水解，HPLC
法分析单糖组成。结果 总多糖含有量为 50. 5%，收率为 4. 39%，由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、半
乳糖组成，比例为 7. 70 ∶ 8. 30 ∶ 10. 0 ∶ 1. 60 ∶ 9. 70 ∶ 20. 2。结论 苯酚-硫酸比色法操作简便，显色稳定，重复性良
好，可用于无梗五加果实总多糖含有量的测定，而 HPLC法也适合分析其单糖组成。
关键词:无梗五加;果实;总多糖;单糖组成;苯酚-硫酸比色法;HPLC法
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2016)11-2509-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 11. 045
无梗五加 Acanthopanax sessiliflorus (Ｒupr． et Maxim)
Seem． 为五加科五加属一种重要的药用植物，主产于中国
东北和河北，以及朝鲜等地，其果实具有补肝肾、强筋骨
的功效，主治肝肾亏虚、小儿行迟、筋骨痿软等症，临床
上主要用其制剂治疗白细胞减少症［1］和脾肾阳虚型眩晕
症［2］。据报道，无梗五加果实多糖具有免疫调节［3］、抗肿
瘤［4］、抗缺氧［5］、抗疲劳［6］等生物活性。本实验通过水提
醇沉法与 Sevage法得到无梗五加果实提取物，苯酚-硫酸比
色法测定其总多糖含有量，HPLC 法分析其单糖组成。相
比柱前衍生 HPLC法［7］，本研究应用蒸发光检测器，不需
要进行衍生实验，操作简便，可为该类成分的深入开发奠
定基础。
1 仪器与材料
1. 1 试剂与试药 无梗五加果实购自辽宁省丹东农业科学
院，由辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为无
梗五加 Acanthopanax sessiliflorus (Ｒupr． et Maxim) Seem．
的干燥果实。
葡萄糖、果糖、半乳糖、鼠李糖、木糖购自大连美仑
生物医药有限公司;阿拉伯糖购自南京赛吉科技有限公司;
氯仿、正丁醇、苯酚、硫酸等均为分析纯。
1. 2 仪器 752 型紫外可见分光光度计 (北京瑞利分析仪
器有限公司) ;LGJ-10 压盖型冷冻干燥机 (北京博医康实
验仪器有限公司) ;ＲE-52C 型旋转蒸发仪 (巩义市予华仪
器有限责任公司) ;电子天平 (万分之一，上海越平科学
仪器有限公司) ;Waters1525 型高效液相色谱仪 (上海魁
元科学仪器有限公司) ;TGL-16 型低温冷冻离心机 (大连
松谱瑞特贸易公司) ;101 型电热鼓风干燥箱 (天津泰斯特
仪器有限公司)。
1. 3 提取物的制备［8］ 称取干燥无梗五加果实粉末 140 g，
置于圆底烧瓶中，加 8 倍量水回流提取 3 次，每次 2 h，滤
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