全 文 ：毛榛叶化学成分检测及分离
吴莉莉，宗希明，白术杰
（佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯１５４００７）
摘要：目的：通过对毛榛叶有效成分的检测，探索提取分离毛榛叶中黄酮的方法。方法：采用水、醇、石油醚提取有效成分，
并通过纸色谱法、试管试验法、薄层色谱法进行检测。以工业乙醇为溶剂对毛榛叶进行超声波提取，提取物回收溶剂后进行
梯度萃取，将乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析分离。结果：毛榛叶中含有氨基酸、蛋白质、黄酮、糖苷、皂苷、鞣质、多酚等成分，
并得到２个黄酮化合物。结论：毛榛叶是一种含有多种药用成分的可持续利用资源。
关键词：毛榛叶；化学成分；黄酮
中图分类号：Ｒ２８５．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－０１０４（２０１４）０６－００２４－０２
　　毛榛（Ｃｏｒｙｌｕｓ　ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ　Ｍａｘｉｍ）是桦木科（Ｂｅｔｕｌａｃｅ－
ａｅ）榛属（Ｃｏｒｙｌｕｓ）植物，别名胡榛，为落叶灌木，广泛分布于
我国的１３个省分。黑龙江省山区毛榛处于野生状态，资源
广阔，具有耐阴和较高的抗寒性，并有出仁率高的特点［１］。
毛榛叶的再生能力强。毛榛的果可药用，有助于肝脏、肾脏
功能的恢复，还能预防胃癌［２］，但是毛榛叶化学成分的研究
未见报道。王立等对毛榛同属植物榛（Ｃｏｒｙｌｕｓ　ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｕｓ
Ｆｉｓｃｈ）叶中的有效成分进行研究，并得到多种鞣质单体化合
物［３］。薛健飞从榛叶中分离得到２个黄酮单体［４］。李明从
榛叶中分离出多酚，并证明该多酚可显著提高皮肤中胶原蛋
白的含量，具有延缓皮肤衰老的作用［５］。蔡英兰等研究榛花
可降低实验性糖尿病小鼠的血糖水平［６］。对毛榛叶进行研
究检测其化学成分，为深度开发利用毛榛叶这可持续资源提
供依据。
１　材料与仪器
１．１　试验材料
样品采自黑龙江省汤原县山区，由佳木斯大学药学院宗
希明老师鉴定为毛榛叶。
１．２　仪器与试剂
ＵＶ－７５７ＣＲＴ型紫外可见分光光度剂（上海精科学仪
器有限公司），ＲＥ－５２Ａ型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器
厂），ＳＨＢ－Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限
公司），ＵＶ－１型三用紫外分析仪（上海市安亭电子仪器
厂），ＫＱ　５２００型超声波清洗器（江苏昆山仪器厂），１０１－Ⅲ
型电热鼓风恒温干燥箱（江苏大地自动化仪器厂），Ｘ－６型
显微熔点测定仪（北京泰克仪器有限公司），８０－Ｚ型离心机
（上海手术器械厂）。硅胶Ｇ和２００－３００目硅胶均为青岛海
洋化工集团公司生产，所用９５％乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙
酯、甲酸乙酯、冰醋酸、正丁醇、浓硫酸甲醇、丙酮、甲苯、苯、
盐酸、苯胺等试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　毛榛叶中化学成分检测
２．１．１　有效成分提取
称取毛榛叶干品５０ｇ加入适量水室温浸泡过夜，滤出部
分溶液浓缩定为检液Ｉ；剩下溶液及残渣在６０℃水浴中加热
３０ｍｉｎ，抽滤，浓缩定为检液Ⅱ。称取毛榛叶干品５０ｇ加入
适量９５％乙醇浸泡３０ｍｉｎ，４０℃超声提取２０ｍｉｎ，趁热抽滤，
浓缩定为检液Ⅲ。称取毛榛叶干品３０ｇ加入适量石油醚浸
泡３０ｍｉｎ，３０℃超声提取１５ｍｉｎ，趁热抽滤，浓缩定为检液
ＩＶ。
２．１．２　 化学成分检测
分别对４种检测液进行纸色谱分析、试管实验法和薄层
色谱法检测其中的化学成分。
２．１．２．１　 纸色谱法
点样采用八片法，各滤纸瓣分别点不同的检液。展开剂
为正丁醇、冰醋酸、水体积比４：１：５的混合液径向展开，各滤
纸瓣喷不同的显色剂，观察颜色变化，有颜色变化的结果见
表１。
２．１．２．２　 试管试验法
分别进行了双缩脲反应、α－萘酚试验、ｐＨ试验、三氯化
铁试验、氯仿浓硫酸反应、盐酸－镁粉试验、碱性试验、异羟
肟酸铁试验、碘化铋钾反应、三氯化铁－冰醋酸试验反应、亚
硝酰铁氰化钠试剂［７］、荧光反应、泡沫试验、醋酸－浓硫酸试
验反应、氯仿－浓硫酸试验、碱性酒石酸铜反应、明胶试验、
香草醛－浓硫酸试验、蒸馏试验，观察实验现象。
２．１．２．３　 薄层色谱法
分别采用活化硅胶板和非活化硅胶板对不同的检液进
行点样，选用不同的展开剂放入层析缸中展开，喷不同的显
色剂，观察斑点颜色。
２．２　毛榛叶中黄酮的提取分离
２．２．１　提取
取干燥毛榛叶粗粉０．５ｋｇ，用１０倍量的工业酒精浸泡
１ｈ，超声提取提取２次，时间为３０ｍｉｎ，温度为４０℃，合并提
取液，过滤，滤液回收乙醇并浓缩为墨绿色浸膏。将浸膏加
水体积比为１：１．５分散后分别用石油醚、氯仿、乙酸乙脂、正
丁醇进行梯度萃取。分别回收溶剂得到提取物，并对乙酸乙
酯提取物进行分离。
２．２．２　分离
对乙酸乙酯提取物经过多次薄层色谱分析，确定柱层析
条件及流动相比例，反复硅胶柱层析，重结晶，薄层制备色谱
提纯等方法进行分离，得到２个单体化合物，并对这２个化
合物（化合物Ⅰ、化合物Ⅱ）进行检测。具体色谱条件如下：
Ａ石油醚－丙酮（５０～１：１）Ｂ氯仿－甲醇（５０：１～１：１）
Ｆ乙酸乙脂－丙酮（８：１）Ｇ乙酸乙脂－丙酮（３：１）Ｈ乙酸乙
脂－丙酮（２：１）Ｋ苯－甲醇（９：１）Ｚ甲苯－乙酸乙脂－甲酸
（５：４：１）Ｎ氯仿－甲醇（５：１）
硅胶柱色谱：柱层析硅胶２００－３００目，湿法上柱，洗脱
剂为Ａ、Ｂ。制备薄层色谱：硅胶Ｇ，展开剂为Ｆ、Ｇ、Ｈ。
薄层色谱：硅胶 Ｇ，展开剂为Ｚ、Ｋ、Ｎ，显色剂为１０％
ＡｌＣｌ３ 乙醇溶液、５％浓硫酸乙醇溶液。
２．３　结果
２．３．１　毛榛叶化学成分检测结果
纸色谱及试管试验结果中，除蒸馏试验、氯仿浓硫酸反
应、异羟肟酸铁试验无现象，醋酸－浓硫酸试验反应现象不
明显外，其它实验均为正反应，正反应结果见表１。薄层色谱
实验结果见表２。
２．３．２　毛榛叶中单体化合物鉴定结果
２．３．２．１　化合物Ⅰ
橙黄色粉末，ｍ．ｐ．１３３～１３６℃（ＭｅＯＨ），盐酸－镁粉反
应显阳性，柠檬酸反应阳性，氢氧化钠水溶液反应阳性，示为
黄酮类化合物；α－萘酚反应阴性证明该化合物为黄酮的苷
元。薄层色谱在３６５ｎｍ紫外灯下呈一个黄绿色荧光点，紫外
·４２·　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　黑龙江医药科学　２０１４年１２月第３７卷第６期
光谱在２４９ｎｍ、２８０ｎｍ处有最大吸收，且ＩＩ吸收峰强、Ｉ吸收
峰弱表明为异黄酮。分别用展开剂Ｚ、Ｋ、Ｍ 进行展开，用
５％的浓硫酸乙醇溶液显色后１０５℃烘板出现一个黄色斑点，
确定为单体化合物。
表１　纸色谱法和试管试验法检测结果
　检测项目 　试验名称 　现象 检测结果
氨基酸（检液Ⅰ） 茚三酮试验 浅紫色斑点 ＋
蛋白质（检液Ⅱ） 双缩脲试验 浅紫色 ＋
糖、苷类 邻苯二甲酸苯胺试验 黄色斑点 ＋
（检液Ⅱ） α－萘酚试验 界面有紫色环 ＋
苷类验证 碱性酒石酸铜反应 红棕色沉淀 ＋
酚性物（检液Ⅲ） 三氯化铁－铁氰化钾溶液 蓝色斑点 ＋
三氯化铁试验 蓝绿色 ＋
黄酮（检液Ⅲ） 三氯化铝乙醇溶液显色 黄绿色荧光（紫外） ＋
盐酸－镁粉反应 樱红色 ＋
生物碱（检液Ⅲ） 改良的碘化铋钾溶液显色 橙红色斑点 ＋
碘化铋钾试验 黄棕色沉淀 ＋
皂苷（检液Ⅲ） 泡沫试验 大量泡沫 ＋
三萜皂苷 醋酸－浓硫酸反应 由紫红变为蓝 ＋
鞣质（检液Ⅲ） 明胶试验 有混浊现象 ＋
叶绿色（检液Ⅳ） 紫外灯观察 红色荧光 ＋
表２　 薄层色谱法检测结果
检测项目 　　展开剂 　　显色剂 　现象 检测结果
多糖 正丁醇、冰醋酸、水（３：１：１） 邻苯二甲酸苯胺试液 棕色斑点 ＋
皂苷 氯仿、甲醇（４０：３） 磷钼酸试液 蓝色斑点 ＋
氨基酸 正丁醇、乙酸、水（６５：１５：２０） 茚三酮试液 紫色斑点 ＋
黄酮 苯：甲醇：乙酸（３５：５：５） ３％氢氧化铝醇溶液 黄绿荧光（紫外） ＋
鞣质 甲苯、甲酸乙脂、甲酸（１：５：１） １％三氯化铁溶液 蓝色斑点（紫外） ＋
２．３．２．２　化合物Ⅱ
Ⅱ为深黄色粉末 ｍ．ｐ．２１２～２１４℃（ＭｅＯＨ），易溶于甲
醇，盐酸－镁粉反应显阳性，氢氧化钠水溶液反应阳性，示为
黄酮类化合物；α－萘酚反应阳性证明该化合物为黄酮苷。
薄层色谱分别用展开剂Ｚ、Ｋ、Ｍ进行展开后，在３６５ｎｍ紫外
灯下呈１个棕色斑点，喷 ＡｌＣｌ３ 醇溶液后为黄色荧光点。紫
外光谱在２７０ｎｍ和３３０ｎｍ处有最大吸收，为黄酮化合物的
特征峰。
３　结论
通过纸色谱、试管试验和薄层色谱均检测出毛榛叶中含
有氨基酸、蛋白质、糖苷类、黄酮、皂苷、鞣质、多酚等药用成
分，并分离得到２个化合物均为黄酮。黑龙江省山区毛榛分
布广泛，处于野生状态，自然条件优越，研究毛榛叶中的多种
药用成分为开发新药提供依据。
参考文献：
［１］赵娣．小兴安岭榛子种质资源调查及利用前景［Ｊ］．中国农学通
报，２０１２，２８（２８）：８７－９４
［２］蔡英兰，金香子，金美善．榛花对四氧嘧啶性糖尿病小鼠胰岛β细
胞再生修复的影响［Ｊ］．延边大学学报，２００５，２８（３）：１７７－１７９
［３］王立，金哲雄．榛子叶鞣质类化学成分研究（Ⅱ）［Ｊ］．中草药，
２００４，３５（６）：６０６－６０８
［４］薛健飞，王春宇，李平亚．榛子叶化学成分研究［Ｊ］．特产研究，
２００８，３０（４）：５４－５５
［５］李明，金哲雄．榛子叶多酚对小鼠皮肤胶原蛋白含量影响的研究
［Ｊ］．黑龙江医药，２００６，１９（１）：４０－４１
［６］蔡英兰，金政，金香．榛花对糖尿病小鼠降糖作用及对肝脏和胰岛
病理学影响［Ｊ］．辽宁中医药杂志，２００５，３２（１２）：１３２４－１３２６
［７］吴立军，吴继洲．天然药物化学［Ｍ］．第４版，北京：人民卫生出版
社，２００４，２６６－３２６
（收稿日期：２０１４－０５－２８）
作者简介：吴莉莉（１９７６～）女，黑龙江佳木斯人，医学硕士，实验师，从事天然药物化学成分的研究。
通讯作者：白术杰（１９７３～）女，黑龙江集贤人，医学硕士，副教授。Ｅ－ｍａｉｌ：ｂａｉｓｈｕｊｉｅ＿１１２４＠１６３．ｃｏｍ。
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ
ｏｆ　Ｃｏｒｙｌｕｓ　Ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ　Ｍａｘｉｍ
ＷＵ　Ｌｉ－ｌｉ，ＺＯＮＧ　Ｘｉ－ｍｉｎｇ，ＢＡＩ　Ｓｈｕ－ｊｉｅ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙｉｎ　Ｊｉａｍｕｓｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｍｕｓｉ　１５４００７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔ：Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ
ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃｏｒｙｌｕｓ　Ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ　Ｍａｘｉｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ
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·５２·ＨＥＩＬＯＮＧＪＩＡＮＧ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＰＨＡＲＭＡＣＹ　Ｄｅｃ．２０１４，Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．６