全 文 ：中国烹饪研究 19 99 ( 3) :4 1一 7 1 C h in已犯 C u s i in eR e, 芝 u℃ h
黑桑堪抗氧化保健功效研究
施洪飞 杨立坤 曹 晖 陆广念 陈 健 (扬州大学旅游烹饪学院 扬州 2 50 1)
摘 要 以黑桑格水提液予老龄 B AL BC/ 小鼠灌胃 45 d 后测 定与杭氧化延缓
衰老有关的生化指标 。 实验结果表明 , 黑桑格能使超氧化物歧化酶 ( S OD )比活
性显著增强 ( P < 0 . 05 或 0 . 01 ) ;谷耽甘肤过氧化物酶 ( GS H 一 P x) 活性和过氧化
氢酶 ( CA T )活力显著提高 ( P < 0 . 01 ) ; 心肌脂褐素明显减少 ( P < 0 . 0 5 ) ; 过氧化
脂质 ( L P O )含量显著降低 。 可见黑桑格具有较明显的杭氧化延缓衰老的作用和
润肤美容的功效 。
关键词 黑桑格 杭氧化 营养保健
“ 黑桑堪 ” 为桑科植物桑 (M o usr al ha L
.
)的干燥果穗 , 既是常用补益肝肾的中药 , 又是
人们常用的果品 。 为了探索其补肾益精抗衰延年的保健效果 ,我们用其水提液饲灌老龄
BA L B C/ 小鼠 , 观察与抗氧化延缓衰老及美容的有关 7 种生化指标 。
1 材料及方法
1
.
1 黑桑堪配方 于扬州市医药采购供应站购黑桑堪 50 9 , 采用常规煎中药方法 , 首煎
SOm in 取汁 ,第 2 、 第 3 煎各 巧m in 取汁 , 3 次煎液合并后浓缩至 10 0 0m l 成黑桑根提取液
备用 。
1
.
2 动物分组及饲养 于扬州大学农学院实验动物中心购 12 月龄雄性 B A上B C/ 小鼠
10 0 只 (体重 2 5一 2 8 9 ) , 适应性饲养一周后 , 按体重分为五组 (经 t 检验 , 组间体重差异无
显著性 ) 。 分组及灌胃情况见表 1。 各组小鼠置于扬州大学农学院清洁级动物房饲养 ,垫
料为高温消毒过的木屑 , 各组小鼠自由进食饮水 , 室温为 18 一 2 5℃ , 相对湿度为 4 0 一
5 0
。 。 饲养 4 5 d 后取肝 、 脑 、 `肾、 肇丸及脾脏测定相关生化指标 。
表 1 动物分组及灌胃情况
组别
对照组
阳性对照组
低剂量组
灌胃情况
1司 白水 / 日
1耐 生脉饮 / 日
0
.
s iln 黑桑格提取液 / 日
组别
中剂量组
高剂量组
2 O
2 0
灌胃情况
1
.
0时 黑桑堪提取液 / 日
2
.
o iln 黑桑堪提取液 / 日
n一20
1
.
3 组织匀浆液制备 将各组织置 4℃生理盐水中 , 洗去表面残血 , 滤纸吸干 , 取一定量
组织 ( 0 . 4 9 肝 、 0 . 5 只脑 、 1 只肇丸 、 1 只肾脏及 1 只脾 ) , 置组织于研磨器中 , 制备 7 . 5 % 、
2%
、
2%
、
2 %
、
2
.
5 % 的组织匀浆液 , 3 0 00 r m/ in ,离心 15 而 n ,取上清液备用 。
1
.
4 实验器材 T G L 一 16 型高速台式离心机 (上海医用分析仪器厂出品 ) , BE C K侧A[ N
一 D U 型生化自动分析仪 , 754 型分光光度计 (上海医用分析仪器厂出品 ) , 荧光分光光度
一 1 4 一
1N 9 9 9o
.
3 Ch in 砚犯 CU i i sn eR e弘组比ch V ol . 16 S 创m N 0 . 5 4
计 (上海医用分析仪器厂出品 ), 可调定量加液器 (上海求精玻璃仪器厂出品 ) , B E C K M A N
一 I n 型高精确稀释器 , 75 ~ 型组织研磨器
, 低速离心机 (常州 国华 电器有 限公 司出
品 ) , 电子台称等 。
1
.
5 实验试剂 SO D 活力测定试剂盒 、 G S H 一 P x 活力测定试剂盒 、 T 一 A O C 测定试剂
盒 、 MD A 测定试剂盒 、 C百T 活力测定试剂盒 (批号 551 0 ) 。 微量蛋 白测定试剂盒 (批号
57 60 )
。 以上试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供 。
1
.
6 指标测定方法 肝 、脑 、 皋丸 、 肾的 S O D 活力测定 : 采用黄嗓吟氧化酶法 〔` , 2〕。 规定
反应液中 S O D 抑制率达 50 % 时所对应的 S OD 量为一个亚硝酸盐单位 ( n u m/ l) 。 全血 、肝脏 G S H 一 P x 活力测定 : 采用 D T N B 直接法 〔` , ” 〕 , 规定每毫升全血在 l m in 内 , 使 1 9 [ G SH ]
降低 1 为一个酶的活力单位 (扣除非酶反应的 19 【G S H」降低 ) 。 规定每毫克蛋 白质每分
钟扣除非酶反应 ,使 G SH 浓度降低 l um o l几作为一个酶活力单位 。 脾脏 C A T 活力测定 :
组织中过氧化物酶在一定条件下能直接分解其底物过氧化氢 ,使其在反应液中浓度逐渐
降低 , 相应的吸光度也逐渐降低 。 规定每毫克组织蛋白质中 C A I 、 每分钟分解底物过氧化
氢的相对量为一个 CA I , 的活力单位 。 心肌脂褐素含量测定 : 心肌脂褐素是一种存在在老
年动物心肌细胞内的带有棕色的有 自发荧光的不溶性颗粒堆积物质 。 用适当的方法将其
组织细胞 内提取出来检测其荧光强度 ,便可与已知浓度的荧光物质相比较而推算出紫褐
素的含量 。 按文献 〔` , 4〕进行测定 。 辜丸 、 脑 L p o 测定 :采用 T B A 比色法测定组织 中丙二
醛含量 〔` , 5] 。 以
~
l州。 A rn/ g p or 为单位计算 L p O 含量 。 脑 、 肾 T 一 oA c 能力测定 :机体
中的抗氧化物质能使三价铁还原为二价铁 ,后者与菲琳类物质形成稳固的络合物 , 通过比
色可测定其氧化能力高低 。 规定在 37 ℃时每毫克蛋 白样品能使反应体系的吸光度值每
增加 0 . 0 1 时 , 为一个抗氧化能力单位 。 组织匀浆的蛋白质浓度测定 :采用考马斯亮兰法 。
以上均严格按试剂盒说明进行测定 。
2 实验结果
表 2 黑桑棋振液对小鼠肝脏 、脑 、肾、辜丸超叙化物歧化酶活力的影响
组 别
叹 )D 活力 ( un m/ 即 )r ( X 士DS )
n— — 一 一 -肝 3 OD 活力 脑 SO D 活力 辜丸 S O D 活力 肾 3 OD 活力对照组阳性对照组低剂量组中剂量组高剂量组 2 67 . 73 士 40 . 9 33 36 . 44 士 22 . 32& &2 86 . 65 土 40 . 9 33 3 1 . 46 士 23 . 6 9 井 怪 怪3 40 . 44 士 36 . 40 赞 肠 份 105 . 78 土 17 . 49126 . 23 土 14 . 32&102 . 45 士 13 . 32114 . 39 士 12 . 36122 . 85 士 13 . 05 价 40 5 . 32 士5 6 . 2942 5 . 46 土2 4 . 76&4 10 . 60 士4 6 . 6542 0 . 15 士2 2 . 9242 6 . 32 士4 7 . 08 . 2 53 . 72 士 2 9 , 842 8 6 . 3 0 士2 3 . 33 怪2 62 . 4 0 士4 0 . 442 8 6 . 3 6 士 3 1 . 402 9 0 . 8 8 士4 3 . 72 份nUù1l曰,山ZC,`白& P < 0 . 05 ,苦 P < 0 . 0 5 , & & P < 0 . 0 1 , & & & P < 0 . 00 1关 关 P ( 0 . 0 1 , 釜 苦 餐 P ( 0 . 00 1Co m Par 司 诚ht Co n tOr I~ p ar 曰 诚ht con t r o l (下表中 & 、 ` 、 P所指均与此表相同 , 略 )从表 2 可见 ,黑桑堪提取液能提高老龄小鼠的肝 、 脑 、 肇丸及肾脏 S O D 活力 , 所有的高剂量组与对照组 比有显著性差异 ,与阳性对照组接近 ( P < 0 . 05 , P < 0 . 001 ) 。从表 3 可见 ,桑格提取液能提高老龄小鼠全血和肝脏的 G S H 一 P x 活力 , 与对照组 比有显著性差异 ( P < 0 . 0 5 , P < 0 . 0 1 ) ;高剂量组过氧化氢酶活力有较大提高 ,对照组 比有显著性差异 ( P < 0 . 0 5 ) 。 与阳性对照组基本一致 。
1 9 99年 第 3 期 中国烹饪研究 第 16 卷 总第 4 5期
表 3 黑桑堪提取液对小鼠谷眯甘肤过氧化物酶活力和过氧化氢酶活力的影响
谷胧甘肤过氧化物酶活力 ( X士 SD)组 别 全血 ( u / 11 11)
14
.
92 土 3 . 3 5
2 8
.
2 4 士 4 . 42 & &
22
.
5 0士 4 . 3 5
2 5
.
9 7士 4 . 3 5赞
3 1
.
3 0士 3 . 3 8赞 釜
肝脏 ( u /m 9
.
p r )
脾脏过氧化氢酶活力
( X士 SD) (
u
/n
1 9
.
p r )
对照组
阳性对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
16
.
6 5士 2 . 7 7
2 2
.
36 土 2 . 46 & &
1 8
,
62 士 3 . 90
20
.
0 1 土 2 . 33 畏
23
.
40 士 3 . 64 . 苦
29
.
45 士 8 . 5 9
35
.
23 士 4 . 2 1&
28
.
0 4 士 7 . 32
29
.
57 土 4 . 82
34
.
66 士 6 . 0 5 铃
nUCon八曰,ú勺ù2,4
表 4 黑桑棋提取液对小鼠过氧化脂质和心肌脂揭素含量的影响 ( X 士DS )
过氧化脂质含量 ( n m o 1M D A n/ 堪 . rP )组 别 翠丸中含量 脑中含量
0八nUǎ1éO,一勺ZC乙件对照组
阳性对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
8
.
37 土 1 . 2 3
6
.
8 6士 1 . 21& &
7
.
8 6 土 1 . 03
6
,
92 土 1 . 82 “
6
.
88 士 1 . 24 赞 各
10
.
09 土 1 . 37
7
.
88 士 1 . 04 & &
9
.
70 士 1 . 28
8
.
76 士 1 . 25 关
7
.
8 9 土 1 . 09
心肌脂褐素含量
(
u g H泛厌 ) 4奄 『 h e r t )
4
.
8 8 土 1 . 02
2
.
56 士 1 . 12 & &
4
.
68 士 1 . 37
3
.
59 士 0 . 8 1 长
2
.
4 6 士 0 . 76 锌 赞
从表 4 可见 ,黑桑堪提取液能降低老龄小鼠的脑 、 翠丸的 L PO R 的含量 , 中高剂量组
与对照组比有显著性差异 ( P < 0 . 0 5 , P < 0 . 0 1 ) ;能降低心脏中心肌脂褐素的含量 , 中高剂
量组与对照组比有显著的差异 ( P < 0 . 0 4 , P < 0 . 01 ) 。 与阳性对照组接近 。
表 5 黑桑堪提取液对小鼠总抗氟化能力的影响
组 别 总抗氧化能力 (
u击 l g p r ) (X 士DS )
脑 总 抗 能 力
2
,
35 士 0 . 4 4
3
.
15 士 0 . 34 & &
2
.
4 3 士 0 . 55
2
.
7 4 士 0 . 60 公
3
.
0 5 土 0 . 40 关 畏
肾 脏 总 抗 能 力
八曰n口l勺ù
2`,
自对照组
阳性对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
2
.
4 1 土 0 . 78
3
.
04 士 0 . 66& &
2
.
39 士 0 . 6 7
2
.
85 土 0 . 57 资
3
.
1 1土 0 . 6 5 关 关
从表 5 可见 , 黑桑堪提取液能提高老龄小 鼠的脑 、 肾脏总抗氧化能力 , 中高剂量组与
对照组比有显著性差异 , 与阳性对照组接近 ( P < 0 . 0 5 , P < 0 . 01 ) 。
3 讨论
3
.
1 对黑桑堪的有关认识 桑根性寒味甘 , 人肝肾经 , 能补肝 、 益肾 、 熄风 、 滋液 。 治肝肾
阴亏 、 消渴便秘 、 目暗耳鸣 、 凛病 、 关节不利 。 其化学成分有芦丁 ( R ut 一 i)n 、 胡萝 卜素 、珠 、
珠 1八谕 、 蛋 白质 、 糖 、 生物碱 、 强 心贰 、 花青素贰 、 脂类 ( 62 . 6% ) 、 游离酸 ( 26 . 8 % ) 、 醇类
( 1
.
6 % )
、挥发油 ( 1% ) 、 揉质及矢菊素等 。 构成其脂类的脂肪酸主要为亚油酸 ( 68 . 3% ) 、
油酸 ( 12 . 67 % )和棕桐酸 ( 1 1 . 85 % ) 、 以及少量的豆寇酸 ( 0 . 98 % ) 、 棕桐油酸 ( 0 . 18 % ) 、 硬
脂酸 ( 4 . 46 % )和亚麻 酸 ( 0 . 98 % )等 。 挥发油 的主要成分为按 叶素 ( 69 % )和 香叶醇
( 17
.
0 % )
。 药理作用表明 , 10 %桑堪煎液中有中度激发淋巴细胞转化作用 , 而桑根膏主
要用于血虚生风 、 _血痹风痹 、 老年肠枯便秘 、夜眠不安 、腰酸膝软和须发早白等 。 〔’ o〕
_
_
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9 99 1 No
.
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n 代祀
C us i i
n e R 欣记盯e V ho l . 15 6 1 111 No . 5 4
3
.
2 黑桑堪抗氧化延缓衰老作用 S D O是机体内唯一能直接特异性地淬灭超氧 自由基
的酶 ,研究表明 , 机体内 S O D 活力高低与年龄呈负相关 , 即随年龄增加而 5 0 1) 活力降低 。
从表 2 可见 , 中高剂量组黑桑根能显著地提高小鼠 S OD 活力 ( P < 0 . 05 或 0 . 01 ) 。 生物体
内的谷胧甘肤过氧化物酶 、 过氧化氢酶等也具有抗氧化 的作用 , 其活力也是随年龄下降
的 , 当这些酶的活性下降时 ,会使脂质过氧化产生过氧化脂质 , 继而形成脂褐素沉积在细
胞中而导致细胞功能发生障碍 。 因此 G S H 一 P x 、 C A I , 、 L P O 、 心肌脂褐素都可作为衰老指
标 [“ 〕。 从表 3 、 表 4 和表 5 可见 , 中高剂量组黑桑堪能显著提高 G SH 一 P x 的活力 ( P <
0
.
0 1 )
, 降低肝脏中的 LP O 的含量 ,显著降低心肌脂褐素的含量 ( P < 0
.
05 )
。
综上可见 ,本提取液具有抗氧化 、 延缓衰老 、 美容的保健功效 ,值得作为保健食品进行
研究和生产普及 。
参考文献
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E X P E R IM E N T A L S T U D Y O F S A N I T A R Y E F F I C A C Y O N
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(收稿 日期 : 19 9 9 一 0 2 一 18 ) (校对 : 王雪萍 潘 英 )
一 17 一