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中南药学 2016年 7月 第 14卷 第 7期　Central South Pharmacy. July 2016, Vol. 14 No.7
高效液相色谱波长切换法测定万通炎康片中异嗪皮啶、
迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A和苦玄参苷Ⅰ B的含量
唐德智（广西南宁食品药品检验所，南宁 530021）
摘要：目的　建立 HPLC波长切换法测定万通炎康片中异嗪皮啶、迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A和苦玄参
苷Ⅰ B含量的方法。方法　色谱柱为 Agilent TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-
0.2%磷酸水溶液（B）系统，梯度洗脱，流速为 1.0 mL·min－ 1，柱温：30℃，波长切换时间序列采
样：0～ 20 min为 342 nm；20～ 40 min为 264 nm。结果　异嗪皮啶线性范围为 0.025～ 0.451 μg（r＝
0.9998，n＝ 6），平均回收率均＞ 99.0%，RSD均＜ 2.0%（n＝ 3）；迷迭香酸线性范围为 0.039～ 0.704
μg（r＝ 0.9997，n＝ 6），平均回收率均＞ 99.0%，RSD均＜ 2.0%（n＝ 3）；苦玄参苷Ⅰ A线性范围为
0.223～ 4.016 μg（r＝ 0.9997，n＝ 6），平均回收率均＞ 99.0%，RSD均＜ 3.0%（n＝ 3）；苦玄参苷
Ⅰ B线性范围为 0.195～ 3.514 μg（r＝ 0.9999，n＝ 6），平均回收率均＞ 99.0%，RSD均＜ 2.0%（n＝
3）。结论　该方法准确、快捷、可靠，可更好地用于万通炎康片中异嗪皮啶、迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A
和苦玄参苷Ⅰ B的质量控制。
关键词：万通炎康片；异嗪皮啶；迷迭香酸；苦玄参苷Ⅰ A；苦玄参苷Ⅰ B；高效液相色谱波长切换法
中图分类号：R917　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1672-2981(2016)07-0763-05
doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2016.07.021
Simultaneous determination of isofraxidin, rosmarinic acid, picfeltarraenin
Ⅰ A and picfeltarraeninⅠ B in Wantong Yankang tablets by HPLC wavelength
switching method
TANG De-zhi (Guangxi Nanning Institute for Food and Drug Control, Nanning 530021)
Abstract: Objective　To establish an HPLC wavelength switching method to simultaneously determine iso-
fraxidin, rosmarinic acid, picfeltarraeninⅠ A and picfeltarraeninⅠ B in Wantong Yankang tablets. Methods　
Agilent TC-C18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm) column was used. The mobile phase was acetonitrile-water containing
0.2% phosphoric acid with gradient elution mode at the flow rate of 1.0 mL·min－ 1; the detection wavelength
was 342 nm (0－ 20 min) for isofraxidin, rosmarinic acid, and 264 nm (20－ 40 min) for picfeltarraeninⅠ A,
picfeltarraeninⅠ B. Results　Isofraxidin had a good linearity at 0.025 － 0.451 μg, and the average recov-
ery were more than 99.0% with RSD were less than 2.0% (n＝ 3). Rosmarinic acid had a good linearity at
0.039 － 0.704 μg, and the average recovery were more than 99.0% with RSD were less than 2.0% (n＝ 3).
PicfeltarraeninⅠ A had a good linearity at 0.223－ 4.016 μg, and the average recovery were more than 99.0%
with RSD were less than 3.0% (n＝ 3). PicfeltarraeninⅠ B had a good linearity at 0.195－ 3.514 μg, the aver-
age recovery were more than 99.0% with RSD were less than 2.0% (n＝ 3). Conclusion　The method is sim-
ple, accurate and reproducible. It can be used to determine isofraxidin, rosmarinic acid, picfeltarraeninⅠ A and
picfeltarraenin Ⅰ B simultaneously in Wantong Yankang tablets with the same chromatogram condition.
Key words: Wantong Yankang tablet; isofraxidin; rosmarinic acid; picfeltarraeninⅠ A; picfeltarraeninⅠ B;
HPLC wavelength switching method
作者简介：唐德智，男，副主任中药师，主要从事中药质量标准控制研究，Tel：（0771）3132340，E-mail：tangdz7497@163.com
　　万通炎康片是由肿节风和苦玄参 2味中药制成的
中药成方制剂，有疏风清热、解毒消肿的功效，收载于
中国药典 2010年版一部 [1]。临床用于外感风热所致的
咽部红肿、牙龈红肿、疮疡肿痛、急慢性咽炎、扁桃体
炎、牙龈炎、疮疖等。肿节风具有清热凉血、活血消斑、
祛风通络的功效，中国药典 2010年版一部将异嗪皮啶
和迷迭香酸作为肿节风药材的质量控制指标 [1]；苦玄
参具有清热解毒、消肿止痛的功效，中国药典 2010年
版一部将苦玄参苷Ⅰ A作为苦玄参药材的质量控制指
标 [1]。另有文献报道苦玄参中另一主要成分为苦玄参
苷Ⅰ B[2]，苦玄参苷Ⅰ A 和苦玄参苷Ⅰ B是苦玄参中
2个主要的苷类成分。现行质量标准为测定肿节风中
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异嗪皮啶的含量，而对于肿节风中具有抗菌消炎功效
的成分迷迭香酸和苦玄参均无定量控制，不能全面反
映其内在质量。本试验参照中国药典 2010年版一部
“中药质量标准分析方法验证指导原则”[1]，选择异嗪
皮啶、迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A和苦玄参苷Ⅰ B做为
万通炎康片的质量控制指标，采用高效液相色谱波长
切换法同时对异嗪皮啶、迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A和
苦玄参苷Ⅰ B等 4个成分进行定量测定。
1　仪器与试药
1.1　仪器
　　Agilent 1200液相色谱仪，配有 1200系统（四元
泵、自动进样器、柱温箱、可变波长紫外检测器），
Agilent色谱化学工作站（美国安捷伦科技有限公司）；
S180H型超声波清洗器（德国 Elma公司）；XS205DU
型电子分析天平（梅特勒 -托利多仪器有限公司，精
度：0.1/0.01 mg）；UV-2550型紫外 -可见分光光度计
（日本岛津公司）。
1.2　试药
　　异嗪皮啶对照品（批号：110837-201206，含量：
99.5%）、迷迭香酸对照品（批号：111871-201203，含
量：98.8%）、苦玄参苷Ⅰ A对照品（批号：111745-
200501，含量：100%）（中国食品药品检定研究院）；苦
玄参苷Ⅰ B对照品（武汉天植生物技术有限公司，批
号：CFS201402，含量：98%）；万通炎康片 [广西万通
制药有限公司，规格：薄膜衣片，每片重 0.35 g（大片），
批号：131015、140501、140615、140724、140912]；甲醇、
乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适用性试验
　　色谱柱：Agilent TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；
乙腈为流动相 A，0.2%磷酸水溶液为流动相 B，采
用梯度洗脱、双波长检测，程序见表 1；流速为 1.0
mL·min－ 1；柱温为 30℃；进样量：10 μL。
表 1　梯度洗脱色谱条件
Tab 1　Gradient elution condition
时间
（time）
/min
流动相 A
（mobile phase
A）/%
流动相 B
（mobile phase
B）/%
波长（detection
wavelength）
/nm
0 ～ 10 18 82 342
10～ 20 18→ 35 82→ 65 342
20～ 40 35 65 264
2.2　混合对照品储备溶液的制备
　　分别精密称取异嗪皮啶对照品、迷迭香酸对照品、
苦玄参苷Ⅰ A对照品和苦玄参苷Ⅰ B对照品适量，置
同一 50 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，
制成 1 mL含异嗪皮啶 75.2 μg、迷迭香酸 117.4 μg、
苦玄参苷Ⅰ A 669.4 μg、苦玄参苷Ⅰ B 585.6 μg的混
合对照品储备溶液。
2.3　供试品溶液的制备
　　取本品10片，除去包衣，研细，取1 g，精密称定，
置 25 mL棕色量瓶中，加入 50%甲醇约 20 mL，超声处
理（功率 300 W，频率 33 kHz）30 min，放冷，用 50%
甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4　专属性试验
　　按处方比例及制备方法分别制备不含肿节风和苦
玄参的阴性样品，按“2.3”项下方法制备及“2.1”项下
方法测定。取混合对照品、供试品及阴性样品进样测
定，结果表明阴性样品不干扰目标峰的测定，各成分
峰的理论板数均＞ 5000，且分离度均＞ 1.5。具体见
图 1。

A
B

C
D
图 1　万通炎康片 HPLC色谱图
Fig 1　HPLC chromatogram of Wantong Yankang tablets
A.混合对照品（mixed reference）；B.供试品（sample）；C.缺肿节
风阴性样品（sample without Sarcandrae herba）；D.缺苦玄参阴性样
品（sample without Picriae herba）；1.异嗪皮啶（isofraxidin）；2.迷
迭香酸（rosmarinic acid）；3.苦玄参苷Ⅰ B（picfeltarraeninⅠ B）；
4.苦玄参苷Ⅰ A（picfeltarraeninⅠ A）
2.5　线性关系的考察
　　精密吸取“2.2”项下混合对照品储备溶液 0.5、
1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分别置 15 mL棕色量瓶
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中，加甲醇至刻度，制备得 6个浓度的系列混合对照
品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。以对照品
的进样量为横坐标（x），以峰面积值为纵坐标（y）进
行线性回归，绘制标准曲线。异嗪皮啶回归方程：y＝
3.285×103x－ 24.33，r＝ 0.9998（n＝ 6）；迷迭香酸
回 归 方 程：y＝ 2.502×103x － 30.12，r＝ 0.9997（n
＝ 6）；苦玄参苷Ⅰ A回归方程：y＝ 864.9x－ 27.12，
r＝ 0.9997（n＝ 6）；苦玄参苷Ⅰ B回归方程：y＝
667.3x－ 34.57，r＝ 0.9999（n＝ 6）。结果表明，异
嗪皮啶在 0.025～ 0.451 μg、迷迭香酸在 0.039～ 0.704
μg、苦玄参苷Ⅰ A在 0.223～ 4.016 μg、苦玄参苷Ⅰ B
在 0.195～ 3.514 μg与峰面积呈现良好的线性关系。
2.6　精密度考察
　　取混合对照品溶液重复进样 6次，测定峰面积，
结果异嗪皮啶、迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A与苦玄参苷
Ⅰ B峰面积 RSD 分别为 0.80%、1.2%、0.90%、1.1%，
表明精密度良好。
2.7　稳定性考察
　　取同一供试品溶液，分别在放置 1、2、4、8、
12、24 h后注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件
测定，异嗪皮啶、迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A与苦玄
参苷Ⅰ B峰面积的 RSD分别为 1.5%、1.7%、1.3%和
1.4%，表明供试品溶液在 24 h内稳定性较好。
2.8　重复性考察
　　取同一批号万通炎康片（批号：140615），按
“2.3”项下方法平行制备 6份供试品溶液，按“2.1”
项下色谱条件测定，测得样品中异嗪皮啶平均含量为
0.62 mg·g－ 1，RSD为 1.5%；迷迭香酸平均含量为 0.97
mg·g－ 1，RSD为 1.3%；苦玄参苷Ⅰ A平均含量为 5.63
mg·g－ 1，RSD为 1.2%；苦玄参苷Ⅰ B平均含量为 4.86
mg·g－ 1，RSD为 1.3%。结果表明该方法重复性良好。
2.9　加样回收试验
　　精取称取已测定含量的万通炎康片（批号：
140615）0.5 g，共 9份，置 25 mL棕色量瓶中，分别
精密加入异嗪皮啶、迷迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A和苦玄
参苷Ⅰ B的混合对照品溶液（分别精密称取异嗪皮啶
对照品、迷迭香酸对照品、苦玄参苷Ⅰ A对照品和苦
玄参苷Ⅰ B对照品适量，置同一 50 mL棕色量瓶中，
加甲醇溶解并定容至刻度，制成含异嗪皮啶 0.0634
mg·mL－ 1，含迷迭香酸 0.0982 mg·mL－ 1，含苦玄
参苷Ⅰ A 0.5662 mg·mL－ 1，含苦玄参苷Ⅰ B 0.4898
mg·mL－ 1的混合对照品溶液）4.0、5.0和 6.0 mL，
按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定并计算回收
率，结果见表 2。
2.10　样品测定
　　取 5个批号的万通炎康片，每个批号各 3份，精
密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”
项下色谱条件测定 4种待测组分的峰面积，将峰面积
代入回归方程，计算样品中异嗪皮啶、迷迭香酸、苦
玄参苷Ⅰ A和苦玄参苷Ⅰ B的含量，结果见表 3。按
中国药典 2010年版一部万通炎康片含量测定项下的
规定，含肿节风以异嗪皮啶计，薄膜衣片大片不得少
于 120 μg，折算成质量，应不得少于 0.34 mg·g－ 1，
5批样品均符合要求。根据试验结果，考虑到实际生
产中药材的来源，以及制剂生产、储藏等因素，故暂
定本品每 1 g含异嗪皮啶不得少于 0.34 mg，含迷迭香
酸不得少于 0.34 mg，含苦玄参苷Ⅰ A不得少于 3.35
mg，含苦玄参苷Ⅰ B不得少于 3.35 mg。
3　讨论
3.1　分析物的确定
　　万通炎康片现行质量标准中只对肿节风中的异嗪
皮啶进行定量测定，不能全面地反映该药品的质量。
本试验采用高效液相色谱法，应用梯度洗脱、波长切
换检测的方法，同时对该药品有效成分异嗪皮啶、迷
迭香酸、苦玄参苷Ⅰ A和苦玄参苷Ⅰ B进行定量分
析，试验结果表明所用方法操作简便、专属性好、结
果准确，可用于该制剂的质量控制。
3.2　提取条件的确定
　　在试验过程中对供试品溶液的处理方法进行了考
察。采用甲醇索氏提取、加热回流及超声振荡提取，
结果表明，超声振荡提取效果较好，故采用超声振荡
法提取；再分别以乙醇、甲醇、30%甲醇、50%甲醇、
70%甲醇作为提取溶剂，采用超声振荡法对供试品进
行提取，并对超声振荡时间进行考察。结果表明，以
50%甲醇超声提取 30 min效果最好。提取溶剂量考察，
分别采用 50%甲醇 20、25、35 mL超声提取，测定结
果表明：采用 50%甲醇 25 mL已提取完全，故最终采
用 50%甲醇 25 mL超声提取 30min进行供试品溶液的
制备。
3.3　检测波长的选择
　　用紫外分光光度计分别对对照品溶液在
200～ 400 nm波长范围内进行扫描，异嗪皮啶、迷迭
香酸在 342 nm波长处有最大吸收，苦玄参苷Ⅰ A、苦
玄参苷Ⅰ B在 264 nm波长有最大吸收，与中国药典
肿节风、苦玄参 2味中药有效成分标注的检测波长一
致，由此确定了上述有效成分的吸收波长。为达到检
测灵敏度高、干扰小的目的，本试验利用 Agilent 1200
紫外检测器可变波长功能，建立 HPLC波长切换法同
时测定万通炎康片中 4个有效成分的含量，以保证各
成分在最大吸收波长处检测，获得最佳检测效果。
3.4　梯度洗脱条件的考察
　　参考药典及相关文献中异嗪皮啶、迷迭香酸、苦
玄参苷Ⅰ A和苦玄参苷Ⅰ B的含量测定方法 [3-13]，采
用等度洗脱法进行试验，分离结果均不理想，故考
虑梯度洗脱。试验中比较了甲醇 -1%冰醋酸水溶液、
甲醇 -0.2磷酸水溶液、乙腈 -1%冰醋酸水溶液和乙
腈 -0.2磷酸水溶液等 4种流动相系统，结果显示采用
乙腈 -0.2%磷酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱时，
待测组分出峰时间理想，分离效果和峰形均较好，适
于该药品上述组分的检测分析。
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表 3　样品测定结果 (mg·g－ 1，n＝ 3)
Tab 3　Content determination of the sample (mg·g－ 1，n＝ 3)
批号
（lot
No.）
异嗪皮啶
（isofraxidin）
迷迭香酸
（rosmarinic
acid）
苦玄参苷Ⅰ A
（picfeltarraenin
Ⅰ A）
苦玄参苷Ⅰ B
（picfeltarraenin
Ⅰ B）
131015 0.54 1.02 5.74 4.98
140501 0.59 0.98 5.42 4.67
140615 0.62 0.97 5.63 4.86
140724 0.68 0.91 5.69 4.91
140912 0.56 0.99 5.58 4.73
3.5　色谱柱的选择
　　本试验同时考察了 3种品牌色谱柱 Phenomenex
Gemini 110A C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）、Agilent
TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）、Diamonsil C18
（4.6 mm×150 mm，5 μm）的分离效果，在试验中
发现，色谱柱 Phenomenex Gemini 110A C18和色谱柱
Diamonsil C18对迷迭香酸峰分离效果不佳，不易与相
邻峰分离，且色谱峰峰形较差，易产生脱尾现象。而
采用色谱柱 Agilent TC-C18进行分析测定，各色谱峰
峰形较好、柱效高，与相邻峰的分离度均较好，根据
图谱的分离效果，最终选择峰形较好的色谱柱 Agilent
TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）作为试验用色谱柱。
表 2　加样回收试验结果 (n＝ 3)
Tab 2　Recovery (n＝ 3)
成分
（composition）
称样量（sample
weight）/g
样品含量（sample
content）/mg
加入量（added
amount）/mg
测得量（detected
amount）/mg
回收率
（recovery） /%
平均回收率（average
recovery）/%
RSD
/%
异嗪皮啶 0.5089 0.316 0.254 0.576 102.4 101.7 0.80
0.5026 0.312 0.254 0.571 102.0
0.5019 0.311 0.254 0.567 100.8
0.5013 0.311 0.317 0.626 99.4 99.5 1.5
0.5029 0.312 0.317 0.632 101.0
0.5037 0.312 0.317 0.623 98.1
0.5075 0.315 0.380 0.694 99.7 100.5 1.0
0.5024 0.311 0.380 0.692 100.3
0.5022 0.311 0.380 0.697 101.6
迷迭香酸 0.5089 0.494 0.393 0.886 99.7 99.5 0.90
0.5026 0.488 0.393 0.875 98.5
0.5019 0.487 0.393 0.881 100.3
0.5013 0.486 0.491 0.975 99.6 99.7 1.2
0.5029 0.488 0.491 0.984 101.0
0.5037 0.489 0.491 0.973 98.6
0.5075 0.492 0.589 1.071 98.3 100.0 1.6
0.5024 0.487 0.589 1.084 101.4
0.5022 0.487 0.589 1.078 100.3
苦玄参苷Ⅰ A 0.5089 2.865 2.265 5.171 101.8 99.7 2.2
0.5026 2.830 2.265 5.091 99.8
0.5019 2.826 2.265 5.033 97.4
0.5013 2.822 2.831 5.667 100.5 99.4 1.3
0.5029 2.831 2.831 5.606 98.0
0.5037 2.836 2.831 5.656 99.6
0.5075 2.857 3.397 6.167 97.4 98.4 1.1
0.5024 2.829 3.397 6.209 99.5
0.5022 2.827 3.397 6.166 98.3
苦玄参苷Ⅰ B 0.5089 2.473 1.959 4.429 99.9 98.9 1.3
0.5026 2.443 1.959 4.388 99.3
0.5019 2.439 1.959 4.348 97.4
0.5013 2.436 2.449 4.897 100.5 100.0 1.6
0.5029 2.444 2.449 4.925 101.3
0.5037 2.448 2.449 4.854 98.2
0.5075 2.466 2.939 5.406 100.0 99.0 0.90
0.5024 2.442 2.939 5.343 98.7
0.5022 2.441 2.939 5.329 98.3
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中南药学 2016年 7月 第 14卷 第 7期　Central South Pharmacy. July 2016, Vol. 14 No.7
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（收稿日期：2015-12-25；修回日期：2016-02-20）
2016年中药注射剂质量体系研究及临床应用安全性专题
学术研讨会征文通知
中药注射剂是中医药现代化的产物，因其独特功效及特点，被广泛应用于临床疾病治疗；近年来，有关中药注
射剂安全性问题成为制约中医药可持续发展的瓶颈，越来越多有关中药注射剂不良反应或事件的文献被报道，从而
导致少数人对中药注射剂的全盘否定。为此，由湖南省药学会和中南药学杂志社主办的 2016年“中药注射剂质量
体系研究及临床应用安全性专题”学术会议，拟定于 2016年 10月在长沙召开，为我国传统医药的发掘和提高提供
一个学术交流平台。现向全国药学各专业人员征文，有关内容通知如下：
一、征文内容
1. 中药注射剂的研究、开发、生产、临床使用的现状；
2. 中药注射剂质量标准研究的现状与进展；
3. 中药注射剂制备新工艺、新技术研究；
4. 中药注射剂的药代动力学研究；
5. 中药注射剂的临床及临床前安全性评价；
6. 指纹图谱研究在中药注射剂质量控制中的应用；
7. 组学研究在中药注射剂评价中的应用；
8.中药制剂药材的质量的控制。
二、征文要求
文章要求为近期研究成果或综述，具有科学性、先进性和创新性。论文书写格式按《中南药学》杂志 2016年稿
约；请通过中南药学投稿平台进行投稿（http://znyx.cbpt.cnki.net，请在标题或文内注明“会议征文”字样）。符合
要求的文章一旦录取，将录入本次会议论文集，在《中南药学》“中药注射剂质量体系研究及临床应用安全性专题”
专刊（正刊）刊出，并选取部分优秀论文在大会上进行交流。论文投稿截止日期：2016年 9月 30日。
三、联系人与联系方式
联系人：李科；本刊通讯地址：长沙市人民中路 139号中南大学湘雅二医院药学楼 4楼《中南药学》编辑部；
Tel：0731-82258487，0731-84895602；Fax：0731-82258487；E-mail：znyxzz2003@vip.163.com
四、会议地点和时间
会议具体时间和地址见会议通知：请关注湖南省药学会网站（http://www.hnpa.org.cn/index.shtml）、中南药学杂
志官网（http://znyx.cbpt.cnki.net）查阅。