全 文 ：收稿日期:2005 10 21
作者简介:韩莹(1981 ), 女(汉族),内蒙古赤峰人 , 硕士研究生;李发美(1947 ), 女(汉族), 江西兴国人 , 教授 ,博士
生导师 , 主要从事药物分析学研究 , Tel.024 23986289 , E mail fameili@163.com。
文章编号:1006 2858(2006)09 0573 04
HPLC法同时测定无梗五加果中东莨菪内酯和
异嗪皮啶的含量
韩　莹 , 李遇伯 , 崔兰冲 , 裴　客 , 李发美
(沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立同时测定无梗五加(Acanthopanax sessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.)果中东莨
菪内酯和异嗪皮啶含量的 HPLC 法。方法 采用 Zirchrom Kromasil ODS C18(4.6 mm ×200 mm ,
5 μm)色谱柱 ,流动相为乙腈 甲醇 水 冰醋酸(体积比为 13∶1∶86∶1),流速为 1.0 mL·min-1 , 柱温
为室温 ,检测波长为 344 nm。结果 东莨菪内酯和异嗪皮啶分别在 0.975～ 7.80 mg·L-1和 0.360 ～
2.88 mg·L-1内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系 , 回归方程分别为 A =2.150 ×104 ρ-
2.964×102(r =0.999 1)和 A =1.776×104ρ-1.947×103(r =0.999 7), 平均回收率分别为
101.2%和 98.8%,测得样品中东莨菪内酯和异嗪皮啶的含量分别为 30.5 μg·g -1(RSD=1.7%)
和 7.90 μg·g-1(RSD=2.4%)。结论 方法准确 、可靠 , 可为无梗五加果的质量控制提供参考依据。
关键词:高效液相色谱法;无梗五加;东莨菪内酯;异嗪皮啶
中图分类号:R 284.1;R 283　　　文献标识码:A
　　无梗五加又称短梗五加(Acanthopanax ses-
si li f lorus(Rupr.et M axim.)Seem.)为五加科五加
属的一种灌木或小乔木植物 ,广泛分布于我国东
北 、河北等地区 。《中华本草》记载 ,无梗五加的根
茎具有祛风湿 、补肝肾 、强筋骨 、活血脉的作用。
主治风寒湿痹 、腰膝疼痛 、筋骨痿软 、小儿迟行等
症[ 1] 。国内王广树等对无梗五加叶的化学成分
进行了研究[ 2] ,吴立军等对无梗五加茎叶的化学
成分进行了研究[ 3] 。本课题组对无梗五加果的
化学成分进行了初步的研究 ,发现无梗五加果含
有香豆素类成分 ,对其进行了分离纯化 ,鉴定其中
2种成分分别为东莨菪内酯与异嗪皮啶(结构式
见图 1)。
Fig.1　Structures of seopoletin(A)and isofraxidin(B)
为了解无梗五加果中香豆素类物质的含量 ,
更全面 、综合地评价这一药用植物 ,挖掘传统中药
材的潜力 ,作者对无梗五加果中东莨菪内酯与异
嗪皮啶的含量进行了测定 ,该方法准确 、可靠 、快
速 ,为进一步开发无梗五加果这一药用资源提供
参考 。
1　仪器与试药
LC 10ATvp高效液相色谱仪 、SPD 10Avp检
测器 、Easy3000色谱工作站(日本岛津公司)。
东莨菪内酯对照品(北京丰特斯公司),异嗪
皮啶(中国药品生物制品检定所 , 批号 0837
9902),乙腈和甲醇(色谱纯 ,山东禹王实业有限公
司禹城化工厂),水为重蒸馏水 ,冰醋酸(分析纯 ,
天津市百世化工有限公司)。
无梗五加果由丹东农业科学院提供 ,经沈阳
药科大学药用植物研究室孙启时教授鉴定为五加
属植物无梗 五加(Acanthopanax sessi li f lorus
(Rupr.et M axim.)Seem.)的成熟干燥果实。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备
称取东莨菪内酯对照品6.5 mg ,置于 50 mL
量瓶中 ,加入甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,作为
东莨菪内酯对照品溶液 。精密吸取 4 mL 东莨菪
内酯对照品溶液置 100 mL 量瓶中 ,用甲醇溶解
并稀释至刻度 ,作为东莨菪内酯低质量浓度对照
品溶液。
第 23 卷 第 9 期
2 0 0 6 年 9 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.23 　No.9
Sep.2006 p.573
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2006.09.007
称取异嗪皮啶对照品7.2 mg ,置于 50 mL 量
瓶中 ,加入甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,作为异
嗪皮啶对照品溶液。精密吸取 1 mL 异嗪皮啶对
照品溶液置 100 mL 量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释
至刻度 ,作为异嗪皮啶低浓度对照品溶液。
2.2　供试品溶液的制备
精密称取无梗五加果药材粉末 2.0 g , 置
100 mL 圆底烧瓶中 ,精密加入甲醇30 mL ,加热
回流提取 3次 ,每次 1 h。抽滤 ,滤液减压蒸干 ,残
渣用 30 mL 水溶解后用等倍量氯仿萃取 3 次。
回收溶剂后残渣用少量甲醇溶解并定容于 10 mL
量瓶中 ,取少量经 0.45 μm 微孔滤膜滤过 ,取续
滤液备用 。
2.3　色谱条件
色谱柱:Zirchrom Kromasil ODS C18柱(4.6 mm×
200 mm ,5 μm);流动相:乙腈 甲醇 水 冰醋酸
(体积比为 13∶1∶86∶1);流速:1.0 mL· min-1;柱
温:室温;检测波长:344 nm 。在上述色谱条件
下 ,东莨菪内酯和异嗪皮啶分离良好 ,且不受药材
中其他组分的干扰 ,理论塔板数以东莨菪内酯和
异嗪皮啶计算均不小于 3 000。色谱图见图 2。
1—Seopoletin;2— Isofrax idin
Fig.2　HPLC chromatograms of seopoletin, isofraxidin(A)and Acanthopanax sessilif lorus(Rupr.et Maxim.)Seem.sample(B)
2.4　线性关系考察
分别精密吸取东莨菪内酯对照品溶液 0.75 、
1.5 、3.0 、4.5 、6.0 mL 和异嗪皮啶对照品溶液
0.25 、0.5 、 1.0 、1.5 、2.0 mL 分别置于同一
100 mL 量瓶中 ,用甲醇溶解 ,定容至刻度 ,摇匀 ,
作为系列对照品混和溶液。精密吸取各溶液
20μL 分别进行分析 ,以东莨菪内酯和异嗪皮啶
的峰面积(A)为纵坐标 ,质量浓度(ρ)为横标进行
线性回归。得回归方程:东莨菪内酯为 A =
2.150×104ρ-2.964×102(r=0.999 1);异嗪皮
啶为 A=1.776×104ρ-1.947×103(r=0.999 7)。
东莨菪内酯和异嗪皮啶的质量浓度(ρ)分别在
0.975 ～ 7.80 mg·L-1和 0.360 ～ 2.88 mg·L-1内
与峰面积(A)呈良好线性关系。
2.5　精密度试验
吸取“2.4”条下的对照品混合溶液(东莨菪内
酯 、异嗪皮啶质量浓度分别为 0.975 m g·L-1和
0.360 mg·L-1)20 μL 注入液相色谱仪 ,在“2.3”
条色谱条件下连续进样 5次 ,测定峰面积 ,东莨菪
内酯 RSD 为 0.70%,异嗪皮啶 RSD 为 0.80%,
表明仪器精密度良好 。
2.6　重复性试验
按“ 2.2”条方法制备 5 份供试品溶液 , 按
“2.3”条色谱条件进行测定 ,东莨菪内酯的 RSD
为 1.7%,异嗪皮啶的 RSD为 2.4%,表明方法重
复性良好 。
2.7　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,分别在 0 、4 、8 、12 、24 h
测定 ,东莨菪内酯含量的 RSD为 0.11%,异嗪皮
啶含量的 RSD 为 0.12%。均符合要求 ,表明供
试品溶液在 24 h内稳定。
2.8　回收率试验
精密称取已知含量(东莨菪内酯和异嗪皮啶
含量分别为 30.5 μg·g-1和 7.9 μg·g-1)的无梗
五加果药材粉末 6份 ,每份 1 g ,分别加入东莨菪
内酯低质量浓度对照品溶液(5.2 mg·L-1)和异
嗪皮啶低质量浓度对照品溶液(1.4 mg·L-1)各
4.5 、5.5 、6.5 mL ,每个质量浓度平行操作 2 份。
按“2.2”条方法制备所需溶液 ,按“2.3”条色谱条
件进行测定 ,回收率结果见表 1。
2.9　样品测定
按“ 2.2”条方法制备 5 份供试品溶液 , 按
“2.3”条色谱条件进行测定 ,东莨菪内酯和异嗪皮
啶平均含量分别为 30.5μg·g -1和7.90μg·g -1 。
574 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷
Table 1　Results of recovery test(n=6)
Component m sample/μg m added/μg m found/μg Average/ % RSD/ %
Seopoletin 29.6 24.4 54.2
28.6 30.5 59.6 101.2 1.9
27.8 36.6 65.0
I sofraxidin 7.9 6.3 14.4
7.9 7.9 15.5 98.8 2.2
7.9 9.5 17.2
3　讨论
3.1　提取方法的选择
在供试品溶液的制备中 ,作者考察了超声法 、
回流法 、索氏提取法 3种提取方法 ,发现回流法和
索氏提取法得到的东莨菪内酯和异嗪皮啶峰面积
明显大于超声法 ,而回流法与索氏提取法两者之
间差异不大 ,但因为索氏提取法较复杂 ,所需时间
较长 ,所以选择回流提取法。
3.2　提取时间及溶剂用量的选择
作者分别考察了提取 0.5 、1.0 、1.5 h的提取
率 ,结果表明 1.0 、1.5 h 的提取率高于 0.5 h ,但
二者之间差别不大 ,为节省时间 ,选择提取时间为
1.0 h。同时又考察了 12 、15 、18倍量的提取溶剂
的提取率 ,结果表明 15倍量与 18倍量提取效果
好于前者 ,且二者相差不大 ,因此选择 15 倍量的
溶剂进行提取。
3.3　样品处理方法的选择
东莨菪内酯与异嗪皮啶均易溶于氯仿和乙酸
乙酯中 ,实验中分别考察了不进行萃取以及乙酸
乙酯萃取 、氯仿萃取所得样品的液相色谱分析结
果 ,发现不萃取时样品呈深红色 ,黏度较大 ,杂质
非常多 ,为避免堵塞色谱柱 ,且萃取后东莨菪内酯
和异嗪皮啶的含量损失很小 ,所以选择进行萃取
后再进样的样品处理方法 。在比较了乙酸乙酯萃
取和氯仿萃取之后发现乙酸乙酯萃取易损失样
品 ,且易引入大量杂质 ,影响样品的分离度 ,所以
选择用氯仿萃取。
3.4　检测波长的选择
文献[ 4]报道东莨菪内酯的最大检测波长为
345 nm ,而经紫外扫描得知异嗪皮啶的最大检测
波长为 343 nm ,为使两者均有较好且相当的灵敏
度 ,选择 344 nm为检测波长 。
参考文献:
[ 1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草:第
15 卷 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 1997.760.
[ 2] 王广树 , 陈燕萍 ,徐景达 , 等.无梗五加叶化学成分的
研究 [ J] .中国药学杂志 , 1997 , 32(1):11-13.
[ 3] 吴立军 , 郭丽娜 ,江黎明 , 等.无梗五加茎叶化学成分
的研究 [ J] .沈阳药科大学学报 , 2002 , 19(3):180-
182.
[ 4] 孙静芸 , 周羽琪 ,李洪玉 , 等.不同来源桑白皮东莨菪
内酯含量测定 [ J] .中草药 , 2003 , 34(3):266.
Determination of the contents of seopoletin and
isofraxidin in fruit of Acanthopanax sessilif lorus
(Rupr.et Maxim.)Seem.by HPLC
HAN Ying , LI Yu-bo , CUI Lan-chong , PEI Ke , LI Fa-mei
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceut ical Universi ty , Shenyang　110016 , China)
Abstract:Objective To develop a HPLC method for determination of the contents of seopoletin and
isof raxidin in f rui t of Acanthopanax sessi li f lorum(Rupr.et Maxim.)Seem.MethodsA Zirchrom Kromasil
575第 9 期 韩　莹等:HPLC 法同时测定无梗五加果中东莨菪内酯和异嗪皮啶的含量　　　
ODS C18 column(4.6 mm ×200 mm ,5μm)was used with a mobile phase of acetonit rile-methanol-water-
acetic acid(V∶V∶V∶V =13∶1∶86∶1)and f low rate of 1.0 mL·min-1.The UV detection w as set at
344 nm and the column temperature was at room temperature.Results The recoveries of seopoletin and
isof raxidin were 101.2% and 98.8%, respectively.The liner ranges were 0.975-7.80 mg·L-1 with a re-
g ression coefficient of 0.999 1 for seopoletin and 0.360-2.88 mg·L-1 with a reg ression coef ficient of
0.999 7 for isof raxidin.The contents of seopoletin and isofraxidin w ere 30.5 μg·g-1 and 7.90 μg·g -1 re-
spectively.Conclusions The method described in this paper is simple , accurate with a good reproducibility
and can be adopted fo r the quality cont rol of f rui t of Acanthopanax sessili f lorum(Rupr.et M axim.)Seem.
Key words:HPLC;Acanthopanax sessi li f lorum(Rupr.et M axim.)Seem.;seopoletin;isofraxidin
(上接第 564页)
Phytosterone constituents from Achyranthese biden-
tata Bl.
M ENG Da-li , HOU Bai-ling , WANG Yi , ZHANG Peng , LI Xian
(School of Tradi tional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical University , S henyang 　
110016 , China)
Abstract:Objective To isolate and elucidate the phy tosterone constituents f rom Achyranthes bidentata Bl.
MethodsMany kinds of chromatog raphy methods w ere used to isolate chemical constituents.Physico-chemi-
cal characters and spectroscopic analysis(NMR 、MS)were employed for st ructural identificat ion.Results
Five compounds were identified as:rhapontisterone B (1), stachysterone D(2), rubrosterone (3), β-si tos-
terol (4),daucosterol(5).Conclusions Compouds 1 and 2 are first isolated f rom Achyranthes bidentata Bl.
Key words:Achyranthes bidentata Bl.;phy tosterone constituents;rhapontisterone B;stachy sterone D
《亚洲传统医药》《亚洲药物制剂科学》《亚洲社会药学》创刊
为了推动传统医药学 、药剂学和社会药学的发展 ,为全球药学事业做出贡献 ,沈阳药科大学与中国
医药技术国际发展委员会联合创办了《亚洲传统医药》《亚洲药物制剂科学》《亚洲社会药学》3种刊物。
这 3种刊物于 2005年 10月获得批准 ,并于 2006年 3月出版了第 1期。
《亚洲传统医药》《亚洲药物制剂科学》为全英文双月刊 ,《亚洲社会药学》为中文季刊 ,国内外公开发
行。主编分别为吴春福教授 、崔福德教授和黄泰康教授 。这 3种刊物由沈阳药科大学负责组稿与编辑 ,
香港亚洲医药出版社负责出版与发行 ,编辑部设在沈阳药科大学 ,竭诚欢迎广大教师 、研究生 、医药科技
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576 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷