全 文 ：收稿日期: 2013-01-29; 修订日期: 2013-06-13
基金项目:江西省教育厅资助项目( 赣教技字［12750］)
作者简介:周 斌( 1970-) ，男( 汉族) ，江苏淮安人，现任江西科技师范大
学药学院副教授，博士学位，主要从事中药活性成分研究工作．
山蜡梅颗粒剂中 4 种有效成分含量的
反相高效液相色谱法同时测定
周 斌，崔小弟，程 丹，李 洁，王 平，郑鹏武
( 江西科技师范大学药学院，江西 南昌 330013)
摘要:目的 建立反法同时测定山蜡梅颗粒剂中 4 种有效成分的含量。方法 采用 Elite hypersil ODS2 ( 4． 6 mm × 250
mm，5 μm) 色谱柱，流动相为乙腈 －水，梯度洗脱，流速 1． 0 ml / min，检测波长 344 nm，柱温为 40℃。结果 东莨菪内酯在
5． 665 ～ 56． 65 μg / ml浓度范围内线性关系良好，r = 0． 999 9，平均回收率为 94． 77%，ＲSD为 1． 27% ( n = 6) ;异嗪皮啶在
2． 4312 ～ 24． 312 μg / ml范围线性关系良好，r = 0． 999 9，平均回收率为 102． 86%，ＲSD 为 0． 93% ( n = 6) ; 滨蒿内酯在
2． 444 ～ 24． 44 μg /ml范围线性良好，r = 0． 999 9，平均回收率为 102． 18%，ＲSD为 1． 81% ( n = 6) ，芦丁在 9． 012 ～ 90． 12
μg /ml范围线性良好，r = 0． 999 2，平均回收率为 104． 44%，ＲSD为 4． 2% ( n = 6) 。结论 该方法操作简便，结果准确，重复
性好，可用来控制山蜡梅颗粒剂的质量。
关键词:山蜡梅; 东莨菪内酯; 异嗪皮啶; 芦丁; 高效液相色谱
DOI标识: doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 11． 032
中图分类号: Ｒ284． 2 文献标识码: A 文章编号: 1008-0805( 2013) 11-2653-02
Simultaneous determination of the content of four active compounds in Shanlamei Gran-
ules by ＲP －HPLC
ZHOU Bin，CUI Xiao － di，CHENG Dan，LI Jie，WANG Ping，ZHENG Peng － wu
( School of Pharmacy，Jiangxi Science and Technology Normal University，Nanchang，330013，China)
Abstract: Objective To set up the method for simultaneous determination the content of four active compounds in Shanlamei
Granules by HPLC．Methods The chromatography separation was performed on the Elite hypersil ODS2( 4． 6 mm × 250 mm，5
μm) with gradient elution． The mixture of acetonitrile and water as the mobile phases at a flow rate of 1． 0 ml·min －1 was used，
the detective wavelength was 344 nm and the column temperature was 40 ℃ ． Ｒesults The calibration curve was linear in the range
of 5． 665 ～ 56． 65 μg /ml for scopoletin ( r = 0． 9999) ，the average recovery was 94． 77% and ＲSD was 1． 27% ． The calibration
curve was linear in the range of 2． 4312 ～ 24． 312 μg /ml for isofraxidin ( r = 0． 999 9) ，the average recovery was 102． 86% and
ＲSD% was 0． 93% ． The standard curve presented a linear range from 2． 444 ～ 24． 44 μg /ml for scoparone ( r = 0． 9999) ，the av-
erage recovery was 102． 18% and ＲSD was 1． 81% ． The standard curve presented a linear range from 9． 012 ～ 90． 12 μg /ml for
rutin ( r = 0． 9992) ，the average recovery was 104． 44% and ＲSD was 4． 2% ． Conclusion The method was available with a good
reproducibility，sensitive and simple and could be used to control the quality of Shanlamei Granules．
Key words: Chimonanthus nitens; Scopoletin; Isofraxidin; Ｒutin; HPLC
山蜡梅 Chimonanthus nitens Oliv． 为我国特有的蜡梅科蜡梅
属植物，药用部位为其干燥的叶，主要分布于江西德兴、婺源和安
徽徽州一带山区，又名香风茶、毛山茶、岩马桑等，当地民间习惯
用其叶泡茶治疗感冒。药理研究表明，山蜡梅叶具有清凉排毒、
防抗感冒、防暑解暑、消脂降压、预防心脑血管等疾病的作用［1］，
其化学成分主要有挥发油、生物碱、黄酮类［2］、香豆素类等［3］。
目前对山蜡梅及其制剂的质量控制研究报道很少［4］。为了更好
地控制山蜡梅药材及其制剂的质量，本文在前期研究的基础
上［5］，建立 ＲP － HPLC同时测定山蜡梅颗粒剂中 4 种有效成分
含量的方法。
1 仪器、试药
1． 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪，在线脱气机 ( G －
1332A) ，高压二元泵 ( G － 1312A) ，二极管阵列检测器，Agilent
1100 series 色谱工作站( 美国安捷伦科技公司) ，自动进样器( G
－1313A) ，智能化柱温箱 ( G － 1316A) ，KQ － 200VDE 型超声波
清洗仪( 昆山市超声仪器有限公司) ，XS205 电子分析天平( Mett-
ler Toledo 0． 01mg) 。
1． 2 试药 东莨菪内酯对照品( 批号 20110801) 、异嗪皮啶对照
品( 批号 20111024) 购自上海源叶生物科技公司，滨蒿内酯对照
品( 批号 11511 － 201102) 购自中国食品药品检定研究院，芦丁对
照品( 批号 100080 － 200707) 购自中国药品生物制品检定所，山
蜡梅药材采自江西婺源地区，山蜡梅颗粒剂为江西科技师范大学
药学院自制，乙腈和甲醇为色谱纯，购自天津市大茂化学试剂厂，
水为超纯水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱为 Elite hypersil ODS2 ( 4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ，流动相为乙腈 ( A) － 水 ( B) ，梯度洗脱 ( A: 0 ～ 26
min，12 % ; 26 ～ 28 min，12% ～13． 5% ; 28 ～ 40 min，13． 5 % ; 40 ～
45 min，13． 5 % ～ 12 % ; 45 ～ 60 min，12 % ) ;柱温 40℃，检测波长
为 344 nm。流速 1． 0 ml /min。对照品和颗粒剂样品的色谱图见
图 1。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 11 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 11 期
1．东莨菪内酯 2．异嗪皮啶 3．芦丁 4．滨蒿内酯
图 1 对照品( A)和颗粒剂样品( B)的色谱图
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液 精密称取东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯
和芦丁各 11． 33，10． 13，12． 22，15． 02 mg分别置 10 ml容量瓶中，
用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为高浓度贮备液。依次量取
以上贮备液 2． 5，1． 2，1，3 ml置 50 ml同一容量瓶中，用甲醇溶解
并稀释至刻度，摇匀即得低浓度混合对照品溶液。
2． 2． 2 供试品溶液 取山蜡梅颗粒剂样品适量，置研钵中研细，
取约 1． 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25． 00 ml，
称定重量，超声 ( 100 W，45 Hz) 提取 1 h，放冷，再称定重量，用
甲醇补足减失的量，摇匀，0． 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液作为
供试品溶液。
2． 3 线性关系考察 精密量取低浓度混合对照品溶液 1． 0，2． 0，
4． 0，6． 0，10． 0 ml分别置 10 ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻
度，摇匀，作为标准系列溶液。取上述溶液各 10 μl注入色谱仪，
以对照品浓度 C( μg /ml) 为横坐标，色谱峰面积( A) 为纵坐标，求
得回归方程，东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁分别为: A
= 21． 111 C － 5． 20 ( r = 0． 9999 ) ，A = 16． 375 C － 0． 4160
( r = 0． 999 9) ，A = 20． 218 C － 0． 328 0 ( r = 0． 999 9) ，A = 3． 2261C
－ 14． 052( r = 0． 999 2) ，表明东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和
芦丁的进样浓度分别在 5． 665 ～ 56． 65，2． 4312 ～ 24． 312，2． 444
～ 24． 44，9． 012 ～ 90． 12 μg /ml范围内线性关系良好。
2． 4 精密度试验 精密量取混合对照品溶液 10 μl，注入液相色
谱仪，连续进样 6 次，东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁的
峰面积 ＲSD分别为 0． 26 %、0． 64 %、0． 33 %和 1． 48 %，结果表
明仪器精密度良好。
2． 5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10 和
24 h时进样 10 μl，东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁的峰
面积 ＲSD分别为 2． 60 %，1． 88 %，1． 65 %和 2． 66 %，结果表明，
样品溶液在 24 h内稳定性良好。
2． 6 重复性试验 称取同一山蜡梅颗粒剂样品粉末 6 份，按
“2． 2． 2”项下制备样品溶液，测定 4 种物质的含量，东莨菪内酯、
异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁的 ＲSD分别为 0． 86 %，0． 88 %，2． 21
%和 1． 53 %，表明本方法重现性很好。
2． 7 回收率试验 称取已知含量的山蜡梅颗粒剂样品粉末 6 份，
每份约 0． 5 g，精密称定，分别加入东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内
酯和芦丁对照品适量，按“2． 2． 2”项下方法操作，进样 10 μl进行
分析。东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨蒿内酯和芦丁的平均回收率分
别为 98． 27 %，100． 18 %，107． 28 %，96． 64 %，ＲSD 分别为
1． 77%，1． 29 %，1． 48 %，3． 62 %。
2． 8 样品测定 称取同一批次山蜡梅样品粉末 3 份，按“2． 2． 2”
项下方法操作，进样 10 μl进行分析。东莨菪内酯、异嗪皮啶、滨
蒿内酯和芦丁含量见表 1。
表 1 3 批样品中 4 种化学成分的含量 μg·g － 1
批号 东莨菪内酯 异嗪皮啶 滨蒿内酯 芦丁
20121001 132． 78 82． 28 44． 55 420． 21
20121002 130． 09 81． 74 43． 19 421． 07
20121003 131． 26 81． 09 42． 83 422． 68
平均值 131． 38 81． 71 43． 53 421． 32
n = 3
3 讨论
在进行色谱条件优化时，曾参考有关文献［6 ～ 8］，分别比较了
乙腈 －水、甲醇 －水、乙腈 － 0． 1 %冰醋酸、甲醇 － 0． 1 %冰醋酸
等，结果以乙腈 －水系统梯度洗脱为最佳，样品中 4 种化合物和
其他成分能达到基线分离，故选择乙睛 －水作为流动相。
在考察超声时间时，曾比较了超声提取 10，20，30，40，60
min，结果表明超声提取 30 min 和 40 min 时，各物质的含量基本
接近，故选择超声提取时间为 30 min，同时又考察了加 10，15，25
倍量的提取容积，结果表明加 25 倍量的甲醇提取效果较好。
黄酮和香豆素都是天然植物中具有明确药理作用的化合
物［9，10］，对其进行定性和定量分析具有重要意义。2010 版《中国
药典》还没有收载关于山蜡梅制剂的定量分析方法，本试验建立
高效液相色谱同时分析 3 个香豆素和 1 个黄酮化合物的含量方
法，重现性好，操作简单，结果准确，可以作为控制山蜡梅药材及
其制剂质量的方法。
参考文献:
［1］ 张尊敬，刘忠达．山腊梅的成分及药理作用研究近况［J］．浙江中医
杂志，2009，44 ( 11) : 849．
［2］ 胡文杰，杨书斌．山蜡梅化学成分及其药用研究进展［J］．江西林业
科技，2008，6: 60．
［3］ 潘心禾，史小娟，张新凤，等．柳叶蜡梅化学成分及其抗氧化活性研
究［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18 ( 1) : 99．
［4］ 李诒光，卢建中，陈 杰，等．江西道地药材山蜡梅叶质量标准的研
究［J］．中草药，2010，41 ( 5) : 836．
［5］ Zhou B，Tan M，Lu J F，et al． Simultaneous determination of five active
compounds in chimonanthus nitens by double － development HPTLC
and scanning densitometry［J］． Chem Cent J，2012，6( 1) : 46．
［6］ 韩 莹，李遇伯，崔兰冲，等． HPLC 法同时测定无梗五加果中东莨
菪内酯和异嗪皮啶的含量［J］．沈阳药科大学学报，2006 ，23 ( 9 ) :
573．
［7］ 孙卓然，李晓云，刘 圆，等． ＲP － HPLC 法测定不同品种石斛中滨
蒿内酯的含量［J］． 西南民族大学学报 ( 自然科学版 ) ，2008 ，34
( 6) : 1189．
［8］ 耿 旦，马雯芳，甄汉深，等． ＲP － HPLC 测定桑椹中芦丁的含量
［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17 ( 14) : 63．
［9］ 易文实．黄酮类化合物的生物活性研究进展［J］．广州化工，2012，
40( 2) : 47．
［10］ 孔令雷，胡金凤，陈乃宏．香豆素类化合物药理和毒理作用的研究
进展［J］．中国药理学通报，2012，28( 2) : 165．
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