全 文 :地蚕不同药用部位的比较研究
杨中林 ,唐登峰 ,程启厚 ,胡永美
(中国药科大学 ,江苏 南京 210009)
摘 要:目的:为了扩大药源 ,为以地蚕的全草入药代替以地蚕的根茎入药提供实验依据 ,对地蚕的地上部分和地下部分
分别进行了金丝桃苷的含量测定。方法:采用 HPLC 法 , 色谱柱:Hypersil ODS C18柱(5μm , 4.6mm×150mm), 流动相:A 为
0.1%三氟乙酸 , B 为乙腈 ,洗脱梯度为 0 ~ 11min 时 ,流动相 A比流动相 B的百分浓度由 5%梯度增至 45%,检测波长为
350nm。结果:金丝桃苷在0.26~ 1.29μg的范围内呈良好线性关系。地蚕地上部位药材中金丝桃苷的含量为 0.296%, 地
下根茎部位药材中金丝桃苷的含量为 0.036%。结论:该方法准确可靠。以金丝桃苷含量为指标 , 可以认为以全草代替
根茎直接入药具有合理性。
关键词:地蚕;金丝桃苷;HPLC法;用药部位
中图分类号:R282.710.5 文献标识码:A 文章编号:1002-2406(2003)04-0024-01
作者简介:杨中林(1950-),女 ,教授 ,从事中药炮制教学 、科研工作。研
究方向:中药炮制化学和新药研制。
收稿日期:2003-03-12
地蚕(Stachys geobombycis C.Y.Wu var.geobombycis)为唇形科水
苏属植物 ,俗称土冬虫草, 白虫草 ,肺痨草,主要产于浙江、江西、福
建等地。该药味淡 ,微甘 ,性平 ,归肺、肾经 ,具有益肾润肺, 滋阴补
血,清热除烦等功能 ,用于治疗咳嗽、哮喘、肾虚气喘、吐血 、盗汗、贫
血、小儿疳积[1] ,也用于治疗跌打 、疮毒 、去风毒。该药在民间一直
作为止咳药使用,但多数文献记载它以根茎入药[2] ,仅有部分文献
记载它以全草入药[3] 。为了解决能否以全草代替入药问题,笔者对
地蚕进行了较为系统的化学成分研究 ,结果表明金丝桃苷是地蚕
中的主要成分之一。文献中也有关于金丝桃苷具有止咳作用的报
道[4] 。故采用HPLC 法测定地蚕地上部分和根茎中的金丝桃苷的
含量 ,并进行比较,以便扩大药源 ,为以地蚕全草入药代替仅以根茎
入药提供一定的实验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 HP 1050D型高效液相色谱仪(惠普公司生产)。
1.2 试药 地蚕药材(采自浙江省平阳 , 经王铁僧研究员鉴定
为唇形科水苏属植物 Stachys geobombycis C.Y.Wu var.geobomby-
cis);金丝桃苷对照品(本实验室自制 , 并经光谱鉴定 , 其纯度为
98.94%);甲醇 ,乙醇 , 乙酸乙酯等(均为AR , 南京化学试剂一厂
生产)。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS C18柱(5μm , 4.6mm ×
150mm), 流动相:A为 0.1%三氟乙酸 , B 为乙腈 , 洗脱梯度为 0
~ 11min 时 ,流动相 A比流动相 B 的百分浓度由 5%梯度增至
45%,检测波长为 350nm ,流速 1ml·min-1 ,柱温 40℃。
2.2 对照品溶液的配制 精密称取经 P2O5 干燥至恒重的金丝
桃苷对照品适量 ,置棕色量瓶中 , 用甲醇配制成浓度为 2.5mg·
min-1的溶液作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的配制 称取地蚕干燥的地上部分药材 20g ,
以80%乙醇提取 3 次 ,每次加乙醇 200ml ,提取 1h , 过滤 , 合并滤
液 ,减压回收乙醇至无醇后 , 加水成混悬液 , 用乙酸乙酯萃取完
全 ,回收乙醇乙酯 , 浓缩物以甲醇溶解 ,过滤 , 转移至 100ml容量
瓶 , 并以甲醇定容至刻度 ,作为地蚕地上部分的供试品溶液 , 称
为供试品溶液Ⅰ 。
称取地蚕干燥的根茎 20g ,同上法制成根茎的提取物 ,转移
至 10ml容量瓶 ,并以甲醇定容至刻度 , 作为地蚕根茎部分的供
试品溶液 , 称为供试品溶液Ⅱ 。
2.4 标准曲线的绘制 精密称取对照品溶液 0.5 , 1.0 , 1.5 ,
2.0 , 2.5ml于 10ml容量瓶中 , 甲醇定容至刻度。按上述色谱条
件进样 2μl , 进行测定。以各峰面积值为纵坐标 , 以金丝桃苷对
照品进样量为横坐标画图 , 得一通过原点的直线 , 回归方程为:
Y=1365.2X-15.76 , r=0.9999 , 线性范围为 0.26~ 1.29μg·ml -1。
结果见表 1。
表 1 金丝桃苷进样量与峰面积的关系
编号 对照品进样量(μg) 测得峰面积值
1 0.257 326.8
2 0.514 674.5
3 0.772 1038.4
4 1.030 1379.5
5 1.296 1754.0
2.5 精密度试验 取供试品溶液Ⅰ , 进样 2μl , 连续进样 5 次 ,
分别测定每次的峰面积值 , 其平均值为 1598.0 , RSD=0.33%。
2.6 加样回收率试验 精密量取供试品溶液 Ⅰ 、Ⅱ各 5 份 , 加
入一定量的金丝桃苷的对照品 , 按上法测定其金丝桃苷的含
量 ,计算回收率。 结果表明 , 供试品 Ⅰ平均回收率为 98.21%,
RSD 为1.06%;供试品 Ⅱ平均回收率为98.25%, RSD为 1.16%。
2.7 样品的含量测定 分别量取供试品溶液Ⅰ、Ⅱ,进样 2μl ,按上述
方法测定,并计算出各自的金丝桃苷百分含量,结果见表2。
表 2 样品中金丝桃苷含量
供试样品 平均峰面积 测定值(μg μl) 相当于 100g 生药中含量
Ⅰ(地上部分) 1598.1 1.182 2 0.296g 100g
Ⅱ(根茎) 468.9 0.355 0.5 0.036g 100g
3 讨论
3.1 结果表明 ,在该色谱条件下进行测定 ,金丝桃苷的峰得到
很好的分离 , 其他成分没有干扰 ,显示以 HPLC 法对地蚕药材中
金丝桃苷的含量进行测定 , 方法简单 ,测定结果准确。
3.2 实验结果显示 ,地蚕中金丝桃苷的地上部分的含量为其根
茎的 8.2 倍左右 ,如果以金丝桃苷的含量为判断指标 ,可以认为
以全草代替根茎直接入药具有可行性。 由于大多数文献记载
·24· ITCM.July , 2003 , Vol.20 , NO.4
地蚕以根茎入药 , 而笔者倡导以全草代替根茎入药 , 并提供了
初步的实验依据 , 在扩大药用资源方面具有较大的经济意义。
在以全草代替根茎入药方面 , 笔者仅做了一定的初步研究 , 将
在今后的研究中进一步探讨其药用部位选择的合理性的依据。
参考文献:
[ 1] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编[ M] .北京:人民卫生
出版社 , 1996.229.
[ 2] 《中药辞海》编审委员会.中药辞海[M] .北京:中国医药科技出版
社 , 1993.1948.
[ 3] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(第 7册)[ M] .上
海:上海科学技术出版社 , 1999.221.
[ 4] 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[ M] .北
京:人民卫生出版社 , 1995.597.
君子兰总生物碱对大鼠肝脏
及肾脏的慢性毒性作用
杨绍娟1 ,崔亚男1 ,卜丽莎1 ,曹霞2
(1.吉林大学中日联谊医院中心研究室 ,吉林 长春 130031;
2.吉林大学药学院药理教研室 ,吉林长春 130021)
摘 要:目的:探讨君子兰总生物碱(TACM)对大鼠肝脏 、肾脏的慢性毒性作用及对尿糖的影响 ,用以评价药物的安全性。
方法:经灌胃给予大鼠不同剂量的 TACM 4个月 , 测定尿糖含量 、尿蛋白水平及血清谷丙转氨酶(ALT)活性 ,并取其肝脏 、
肾脏做病理组织学检查。结果:与对照组比较各组尿糖 、尿蛋白 、ALT均在正常范围内 ,病理检查未见异常。结论:TACM
对大鼠肝脏 、肾脏未表现出慢性毒性作用。
关键词:君子兰总生物碱;病理学;慢性毒性
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1002-2406(2003)04-0025-01
作者简介:杨绍娟(1964-),女,主管技师 ,从事生物化学与分子生物学研究。
收稿日期:2003-03-15
君子兰是吉林省特有的观赏类植物 , 其生长条件要求不
高 ,易于栽培 、适合大面积种植。君子兰不仅是重要的观赏性
植物 ,从中提取的君子兰总生物碱也具有重要的药用价值。笔
者研究发现君子兰总生物碱对肝癌小鼠实体瘤的生长具有抑
制作用[ 1] 。为进一步证实君子兰总生物碱临床应用的安全性 ,
利用大鼠观察君子兰总生物碱对其肝脏 、肾脏的慢性毒性作用
以及对尿糖的影响 ,为其临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物与药品 6 周龄Wistar大鼠 , 购于吉林大学实验动物
部 ,雌雄各半。TACM(纯度>90%)为白色粉末 , 以生理盐水配
成所需浓度。
1.2 实验分组[ 2] 将 160 只大鼠随机分为 4 组 , 每组 40 只 , 饲
养1 周后进行实验。根据君子兰总生物碱的 LD50(3.4g kg)计算
给药剂量:取其 1 100 为低剂量组 、1 30 为中剂量组 、1 10 为高
剂量组。溶于生理盐水 ,每天同一时间灌胃 1次 , 对照组按此法
给予同体积生理盐水 ,连续给药 4 个月。
1.3 实验方法 给药 4 个月后 , 收集尿液测定尿蛋白及尿糖 ,
同时经腹主动脉取血 ,分离血清测定 ALT。实验结束后 , 取大鼠
的肝脏 、肾脏 , 经 10%甲醛固定 , 石蜡包埋 , 常规切片 HE 染色 ,
观察组织形态学的改变。
1.4 统计学处理 采用组间 t 检验及 x2 检验。
2 结果
2.1 君子兰总生物碱对尿蛋白的影响(见表 1), 与对照组比
较 ,各给药组无显著差别(P >0.05)。
与对照组比较 ①P <0.05 , ②P<0.01
2.2 君子兰总生物碱对尿糖的影响(见表 2), 与对照组比较 ,
各给药组无显著差别(P >0.05)。
表 1 君子兰总生物碱对尿蛋白的影响
- ± + ++对照组 34 4 2 0小剂量组 35 4 1 0中剂量组 34 4 2 0大剂量组 33 5 2 0
表 2 君子兰总生物碱对尿糖的影响
- ± + ++对照组 34 5 1 0小剂量组 36 4 0 0中剂量组 35 4 1 0大剂量组 36 4 0 0
与对照组比较 ①P<0.05 , ②P<0.01
2.3 君子兰总生物碱对 ALT 的影响(见图 1), 与对照组比较 ,
各给药组无显著差异(P >0.05)。
2.4 君子兰总生物碱对肝脏 、肾脏组织形态学的影响(见表
3)。各剂量组不同程度地存在肝间质炎症 ,但与对照组大鼠比
较无明显差异 , 说明肝脏间质性 、炎症性改变属于慢性非特异
性炎症 , 并非 TACM 作用所致。 中剂量组和大剂量组各有 1 例
出现肝细胞变性或肝脏小坏死灶 ,肾脏炎症和肾浊肿在实验组
和对照组之间无明显差别(P >0.05)。
·25·中医药信息 2003 年第 20卷第 4 期
ABSTRACTS FROM ORIGINAL ARTICLES
Chinese Massage and Evidence-based Medicine(EBM)
LIAO Hai-tao
Abstract:The evidence-based medicine is a new subject in clinical
practice ,which emphasize the Medicine decision making based on the
science and advocate that the clinical decision must be based on the in-
dividual experience and objective evidence.To apply a new clinical thi-
nking mode the research medthod of evidence-based medicine to the
teaching and clinic of Chinese massage.It is important that the method
improve the academic , the clinical diagnosis and therapeutics and techn-
ological research of Chinese massage , promote opening to the overseas of
CHinese massage.
Author s address:Chengdu university of Traditional Chinese Medi-
cine , Chengdu 610072 , China
Key words:Chinese Massage;Evidence-based Medicine(Original article on Page 4)
Study development of helicobacter pylori correlation Gastropathy
treated with Traditional Chinese Medicine(TCM)
GAO Bing
Abstract:To discuss the method and effect of TCM on helicobacter py-
lori.Methods:The article summed up the six years literature and mate-
rial from 1997 to 2002.Conclution:In helicobacter pylori correlation
Gastropathy treated with Traditional Chinese Medicine(TCM), to use the
compound prescription , the simply prescription and Traditional Chinese
Medicine matching western medicine , the treatment effect is significant ,
the recurrence rate is low and the ill effect is few , while , long term ap-
plication hadn t tolerance.
Author s address:Wuchang City People Hospital of Heilongjing Prov-
ince ,Wuchang 150200 , China
Key words:Helicobacter pylori;Chronic gastritis;Treatment with TCM(Original article on Page 9)
The compared study of Hyeroside in the aerial part and its re-
hizome of stachys geobombycis C.Y.Wu var.geobombycis
YANG Zhong-lin , TANGDeng-feng , CHENGQi-hou , et al
Abstract:Objective:to enlarge the herb resource &To determine the
content of hyperoside in the arerial part and the rehizome Stachys
geobombycis C.Y.Wu var.geobombycis.Methods:Separation was
achieved on a Hypersil C 18 colum , the mobile phase was 0.1%
TFACH3 Cnwith gradient elution.the wavelength of the UV detector
350nm.Results:Linear range of hyperoside was 0.26 ~ 1.29μg , the
content of hyperoside in the arerial part was 0.296%, while the re-
hizome part 0.036%.Conclusions:the methods were accurate & reli-
able.Refering to the content of hyperoside , it is reasonable possible for
the total part to substitute for the rehizome only.
Author s address:China Pharmaceutical University , Nanjing 210009 ,
China
Key words:Stachys geobombycis C.Y.Wu var.geobombycis;Hypero-
side;HPLC (Original article on Page 24)
Clinical Observation of Metabolism Disturbance Syndrome treated
with Huaicao Jiangya Diluent
XV J ing-yv1 , CHEN J ing2 , YV Zhong-xue1
Abstract:To apply Huaicao Jiangya Diluent to the clinical treatment of
Metabolism Disturbance Syndrome , the change of blood pressure(BP)
and blood fat was observed.In clinical trial , the divided group was the
following:the 30 cases of the treatment group , the 22 cases of the west-
ern medicine group and the 17 cases of the healthy group.The results
showed that:the trearment group and the the western medicine was high-
er than the healthy group in the blood fat.The results illustrated that the
patients with high blood pressure had the disturbance of the fat me-
tabolism.The total effective rate of the treatment was 80%.The differ-
ence was not significant between the treatment group and the controlled
group.In the decreasing of blood fat , the treatment group was better
than the controlled group.The result showed that Huaicao Jiangya Dilu-
ent can decrease the blood pressure and regulate the blood fat.
Author s address:1.Heilongjiang university of Traditional Chinese
Medicine affiliated the first hospital , Harbin 150040 , China;2.Hei-
longjiang university of Traditional Chinese Medicine , Harbin 150040 ,
China
Key words:Huaicao Jiangya Diluent;Metabclism Disturbance Syn-
drome;Blood pressure;Blood fat (Original article on Page 43)
The effect of Xiongbitong Capsule on hemorheology in rats with
myocardial ischemia
TANGKe-qing1 , TANGKe-xin2 , WANG Jin-guang3 , et al
Abstract:Objective:To observe the effect of hemorheology in rats treat-
ed with Xiongbitong Capsule.Method:30 wistar rats were divided ran-
domly into the drug trial group and the Saline controlled group.After
one week , whole blood viscosity , collecting exponent of red blood cell(A), deformation exponent of red blood cell(IF) and blood plsma fi-
brinogen(Fg)were observed.Restlts:To compare with the Saline con-
trolled group , the drug trial group can improve significantly the whole
blood viscosity(P<0.01 , P<0.05)inhibit significantly the collecting
exponent of red blood cell(P <0.05)and decrease deformation:Decre-
acing the blood viscosity and improving the hemotheology are one of the
mechanism which Xiongbitong Capsule treats myocardial ischemia.
Author s address:1.Weifang Traditional Chinese Medicine Hospital ,
Weifang 261041 , China;2.Weifang Medicine college ,Weifang 261041 ,
China;3.Weifang college ,Weifang 261041 , China
Key words:Xiongbitong Capsule;Hemorbeology;Myocardial ischemia(Original article on Page 52)
Experimental Research on the antisenility of“KangAn”Granule
DONGMei , LI Meng , LIU Zhi-qiang
Abstract:Objective:Reserch on the antisenility of “ KangAn” granule.
Method:Adopting hyperlipemia mouse , young and old mouse as model ,
experimental research on “KangAn” granule for aging metabolin and its
correlation enzymatic activity , totalcholesterol and trigly ceride cholesterol
concent.Conclusion:It is shown from the experimental research that“KangAn”granule obviously decreased the effect on peroxide s “MDA”
content of young and old mouse , inbibited the effect of “MAO-B” activity
of mouse s brain and liver and raised “ SOD” activity of brain and liver(P<0.01)with the promotion of protein synthesis and bormone ac-
tion , compared with the same aged comparison group.The drug obvious-
ly reduses the content of total cholesterol triglyceride cholesterol and low
density lipoprotein(LDL)and it can promote the content of high density
lipoprotein(HDL).
Author s address:The Third Hospital Affiliated to Harbin Medical
University ,Harbin 150040
Key words:“KangAn”Granule;Antisenility;Experimental Research(Original article on Page 54)