全 文 ：2016年1月第22卷第1期 January.2016 Vol.22 No.1
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（收稿日期：2015-01-31 编辑：李海洋）
*基金项目：湖北省2011协同创新中心基金（编号：4）
通讯作者：李鹏，E-mail：dfyyyjs@126.com
利咽清火含片由我院中医科在消炎灵片 [1]的基础上，结
合多年的临床用药经验改进而来，由苦玄参、肿芎风、金银
花、毛冬青、甘草等5味药材组成。具有清热解毒，消肿止痛的
功效，用于治疗上呼吸道炎，支气管炎，鼻炎，咽喉炎，扁桃体
炎。目前该制剂标准中缺乏对制剂中药材的定量控制，无法
对制剂中君药进行品质管控，制剂工艺的科学性和制剂的稳
定性无有效的印证方法，更是无法控制成品的内在质量的均
一性，临床疗效得不到保障。为更好控制本制剂质量笔者以
方中君药苦玄参为控制药材，以苦玄参主要药效成分苦玄参
苷ⅠA为定量分析指标，建立了利咽清火含片的定量分析方
法。苦玄参苦玄参又名鱼胆草、苦草，其性味苦、寒，具有凉血
消肿，清热解毒之功效，可用于咽喉肿痛，风热感冒，痢疾、
淋巴结炎等 [2]。现代药理研究发现，苦玄参具有降血压、降血
糖、中枢抑制、解热的作用；还具有抗病原微生物及其毒素、
利咽清火含片中苦玄参苷ⅠA的含量测定*
瞿京红，李志浩，刘 菁，李 鹏
（湖北医药学院附属东风医院，湖北 十堰 442008）
[摘要] 目的：建立HPLC测定利咽清火含片中苦玄参苷ⅠA的方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为FOR－
TIS-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈：0.01％磷酸二氢钾溶液为流动相，采用梯度洗脱，流速为1.0 mL·
min-1，柱温为30 ℃，检测波长为263 nm。结果：苦玄参苷ⅠA在7.50～150.0 μg/mL浓度范围内有良好线性关系
（r=0.9999），平均加样回收率为98.4%，RSD%为1.38%。结论：本方法灵敏度高、准确、重复性好、专属性强，可作
为控制利咽清火含片质量的重要方法。
[关键词] 苦玄参苷ⅠA；利咽清火含片；高效液相色谱法
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2016）01-0048-03
Determination of PiefeltarraeninⅠA in Liyan Qinghuo Buccal
Tablets(利咽清火含片)
QU Jing-hong, LI Zhi-hao, LIU Jing, LI Peng
(Affiliated Dongfeng Hospital of Hubei University of Medicine, Shiyan Hubei 442008,China)
[Abstract] Objective：To establish a method for the determination of PiefeltarraeninⅠA in Liyan Qinghuo
buccal tablets. Methods: The HPLC system consisted of the FORTIS-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)column; the mo－
bile phase consisted of acetonitrile and 0.01% KH2PO4 gradient elution flow rate was 1.0 mL·min-1; the column
temperature was 30℃; The UV detector was set at 263nm. Results：The linear response range was 2.07-41.40μg/mL
(r=0.9999). The average recovery of PiefeltarraeninⅠA was 98.4% , and RSD was 1.38% . Conclusions: The
method high sensitivity, accurate, repeatable and high specificity. It can be an important method to control the
standard of Liyan Qinghuo buccal tablets.
[Key words] PiefeltarraeninⅠA；Liyan Qinghuo buccal tablets；HPLC
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2016.01.015
2016年1月第22卷第1期 January.2016 Vol.22 No.1
利胆和降低毛细血管通透性等作用 [3-4]。其主要成分为黄酮
类、三萜类、苯乙醇苷类等。其中苦玄参苷ⅠA为四环三萜类
成分是苦玄参主要的药理活性物质及其质量控制指标成分[5-6]。
采用HPLC法对不同批次利咽清火含片中苦玄参苷ⅠA的含
量进行分析，结果表明：本法灵敏度高、重复性好，结果准确。
1 仪器与试药
Dionex-U3000液相色谱仪（Dionex公司，Dionex Chemeleon
色谱工作站）；Mettler Toledo MS104S型电子天平（d=0.01mg，
瑞士Mettler Toledo）公司；KQ-500DB超声波清洗机（昆山分
析仪器有限公司）苦玄参苷ⅠA对照品（供含量测定用，中国
食品药品检定研究院，批号111745-200501）；利咽清火含片
及缺苦玄参的阴性对照样品（自制，规格：0.4g/片）乙腈（天津
大茂，色谱纯）；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验 采用以乙腈：0.01%磷酸
二氢钾溶液为流动相，采用梯度洗脱[7-10]，色谱柱为FORTIS-
C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，
检测波长为263 nm，进样量为10 μL，在此色谱条件下，苦玄参
苷ⅠA色谱峰理论板数不小于4000，分离度大于1.5。（见图1）
2.2 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥器中减
压干燥至恒重的苦玄参苷ⅠA对照品适量，精密称定，加甲醇
制成每1 mL含41.4 μg的溶液，即得。
2.3 供试品的制备 取本品20片，除去包衣，用研钵研细，称
取2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称
定重量，超声提取30 min（功率250 W，频率50 kHz），放冷，再
称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即
得。
2.4 阴性对照溶液的制备 取处方量肿芎风，金银花，毛冬
青，甘草，4味药材，加水煎煮2次，第1次2 h，第2次1.5 h，合并
煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15（80 ℃），加乙醇至含醇
量达65%，静置24 h，滤过，滤液减压回收乙醇，并浓缩成相对
密度为1.24～1.26的清膏，加入辅料适量，制成颗粒干燥，压制
成片，取20片，按“2.3供试品的制备”项下方法操作，即得。
表 1 梯度洗脱程序
时间(min) 乙腈（%） 0.01%磷酸二氢钾（%）
0~12 19 81
12~60 19→36 81→64
A-供试品
B-阴性对照品
C-对照品
图 1 测定利咽清火含片中苦玄参苷ⅠA的 HPLC图
2.5 标准曲线与线性范围 精密吸取对照品溶液0.5、1.0、
2.0、5.0、8.0、10.0 mL分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释并定
容至刻度，摇匀，得到浓度为2.07、4.14、8.28、20.70、33.12、
41.40 μg/mL的苦玄参苷ⅠA的对照品溶液。分别精密吸取
10 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以
浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得到回归方程为：Y=
0.8759X+0.04122，r=0.9999；结果表明苦玄参苷ⅠA在2.07～
41.40 μg/mL浓度范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 取苦玄参苷ⅠA对照品溶液，按照上述色
谱条件，进样分析，重复进样6次，结果色谱峰保留时间稳定，
计算6次色谱峰面积RSD%分别为1.80%。
2.7 稳定性试验 按供试品制备项下制备供试品溶液，室温
下分别在0、3、6、12、24 h进样测定，记录苦玄参苷ⅠA色谱峰
面积，计算其RSD%为1.39%，表明处理后的利咽清火含片供
试品溶液室温下24 h内稳定。
2.8 重现性试验 取同一批利咽清火含片（批号：20140702）
6份，精密称定，按上述方法制备供试品溶液，依法测定，结果
苦玄参苷ⅠA的平均含量为0.26mg/片，RSD%为1.47%。
2.9 加样回收率试验 称取重复性实验已测定含量的利咽
清火含片（批号：20130702）9份，每份1.0g，精密称定，分别加
入苦玄参苷ⅠA对照品溶液（浓度41.40μg/mL）12.0、15.0、18.0 mL
（3种不同水平，各3份），按上述方法同法制备供试品溶液，进
样10 μL。按外标两点法计算苦玄参苷ⅠA含量。（见表1）
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表 1 加样回收率试验结果
编号 水平 取样量(g)原有量 加入量 测得量 回收率(%) 平均回收率 RSD(%)
1 低 0.9915 0.6445 0.4968 1.1353 98.79
2 0.9927 0.6452 0.4968 1.1382 99.23
3 1.0046 0.6530 0.4968 1.1291 95.84
4 中 0.9992 0.6495 0.6210 1.2712 100.11
5 0.9998 0.6499 0.6210 1.2619 98.56 98.4% 1.38%
6 0.8999 0.5849 0.6210 1.2020 99.37
7 高 0.9991 0.6494 0.7452 1.3769 97.62
8 1.0016 0.6510 0.7452 1.3726 96.83
9 1.0038 0.6525 0.7452 1.3900 98.97
2.10 样品测定 按上述色谱条件对5批样品进行含量测定，
结果见表2。
表 2 样品测定结果 （n=3）
批号 苦玄参苷ⅠA（mg/片）
20130702 0.26
20130809 0.51
20130913 0.47
20130926 0.34
20131027 0.48
3 讨 论
3.1 流动相的选择 苦玄参苷ⅠA为四环三萜苷类化合物，
由于含有较多羟基和糖链，其极性较大，使用HPLC法分析强
极性化合物时，其保留时间很短或者根本不保留，需离子对
试剂，将目标化合物上的电荷进行结合，形成能保留的化合
物。但其种类和浓度对色谱分析及色谱仪都有影响。苦玄参
苷ⅠA为弱酸性，色谱分析时不易保留，且分析效果不佳。笔
者选用0.01%磷酸二氢钾调节流动相获得了较好分离。曾比
较不同色谱系统，综合保留时间及分离度，确定乙腈-0.01%
磷酸二氢钾（14：86）为流动相，FORTIS-C18柱为色谱柱，柱温
为30℃可较好分离苦玄参苷ⅠA。
3.2 检测波长的选择 对苦玄参苷ⅠA对照品光谱扫描，发
现苦玄参苷ⅠA在263 nm波长处有最大吸收。选择263 nm作
为为检测波长。
3.3 提取方法的选择 在供试品制备时曾比较不同提取方
法和提取溶剂，结果，索氏提取和加热回流提取因加热时间
长，易造成苦玄参苷ⅠA受热，导致含量测定结果不稳定。超
声提取时温度控制在40，避免了高温加热对成分的影响，另
外超声提取能使溶剂快速地进入固体物质中，将其所含的有
机成分尽可能完全地溶于溶剂之中，所得样品测定时，成分
含量高，结果稳定。因此最后选择超声提取。根据测定的结
果，高效液相色谱法可分离苦玄参苷ⅠA的主成分峰和杂质
峰，能反映样品的真实含量，方法具有灵敏、准确、重复性好
等优点，有利于药品质量的控制。
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湖南省中医药管理局对长沙市中医医院开展巡查
11月24日至27日，湖南省中医药管理局组织专家对长沙市中医医院进行为期4天的巡查工作。本次专家组由8位
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查阅资料、现场查看、座谈会、个别访谈、统计资料分析等方法，分别从反腐倡廉建设、坚持公立医院公益性、发挥中医
药特色优势、医院管理及医院服务等方面，对医院进行了一次深入细致的“把脉”。
专家对长沙市中医医院在建立健全惩治和预防腐败体系，履行社会职能，探索中医药一体化诊疗模式，急诊急救
应急能力，中医特色护理等方面给予了肯定，对医院纪检监察部门执纪监督主业不突出，中医为主的办院方向不明
确，科研管理措施不力，医疗质量管理有待加强等方面提出了整改建议。
[来源：湖南中医药管理局官网 日期：2015-12-02]
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