全 文 ：收稿日期:2009-03-31;　修订日期:2009-07-13
基金项目:科技部西部开发科技行动资助项目(No.2002BA901A14-C)
作者简介:陈　勇(1961-),男(汉族),江西南昌人 ,现任广西中医学院药学
院教授 ,学士学位,主要从事中药及其制剂的质量分析教学与研究工作.
苦玄参药材有效成分含量积累动态的研究
陈　勇1 , 刘　婧 2 , 李　兵1 , 李　立 1 , 李耀华1
(1.广西中医学院药学院 ,广西 南宁　530001;　2.广西民族医药研究所 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 测定不同月份生育期的苦玄参中苦玄参苷Ⅰ A的含量 , 为苦玄参药材规范化种植提供实验依据。 方法 采用
高效液相色谱法测定同一种植地采集实验样品中苦玄参苷 Ⅰ A的含量 ,以 C18ODS2柱为固定相 , 乙腈 -0.3%磷酸溶液
(36∶64)为流动相 , 检测波长为 264nm。结果 苦玄参中苦玄参苷 Ⅰ A的平均含量从当年 6月份到次年 1月份分别为
0.25%, 0.36%, 0.36%, 0.22%, 0.16%, 0.16%, 0.07%, 0.05%, 以 7、8月份含量较高。结论 所建立的含量测定方法灵
敏度高 , 专属性强 ,重复性好 , 以药材中苦玄参苷Ⅰ A的含量高低为标准 , 苦玄参最佳采收时间应为当年 7、8月份。
关键词:苦玄参;　苦玄参苷 IA;　高效液相色谱法;　积累动态
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)02-0371-02
　　苦玄参 , 又名苦草 、蛇总管 , 为玄参科植物苦玄参 Picriafel-
tarraeLour的干燥全草 , 产于我国广西 、广东 、云南和贵州等地 ,
该药已收载于《广西中药材标准》 1990年版。苦玄参为一年生草
本植物 , 在广西民间作为药用已有很长的历史 , 其性寒味苦 ,主治
风热感冒 、咽喉肿痛 、痄腮 、疖肿 、泄泻痢疾 、痔疮 、湿疹 , 毒蛇咬
伤 、跌打损伤等 , 具有清热解毒 , 凉血消肿之功效 [ 1] 。本实验研
究将为确定广西苦玄参药材的最佳采收期 , 深入研究该药材质
量 , 制定和提高该药材的质量标准 , 提高相应中成药产品质量和
市场竞争能力 , 规范化种植该药材提供实验依据。
1　材料与仪器
1.1　材料 苦玄参药材分别于 2005-06 ～ 2006-01采收 , 每月采收
1次 , 批号依次 为 200506, 200507, 200508, 200509, 200510,
200511, 200512, 200601。样品均采自广西中医学院药用植物园
并经药学院刘寿养副教授鉴定为玄参科植物苦玄参 Picriafel-
tarraeLour的干燥全草;苦玄参苷Ⅰ A对照品由广西桂林植物研
究所植化室梁小燕老师提供 ,经 HPLC归一化法检测 , 含量达到
98.0%以上。
1.2　试剂 甲醇 、乙腈(色谱纯), 其他试剂均为分析纯。
1.3　仪器 Agilent1100高效液相色谱仪 , 含在线真空脱气机(G
-1322A), 高压四元梯度泵(G-1311A), 标准自动进样器(G-
1313A), 智能化柱温箱(G-1316A), 可变波长检测器(G-
1314A), 二极管阵列检测器 , Agilent1100series色谱工作站(美国
安捷伦科技公司;CG-16W高速微量离心机(北京医用离心机
厂);SB3200-T超声波提取器(上海必能信超声有限公司);Mil-
liporeSimplicity-185超纯水器(美国密里博公司);BP211D电子
分析天平(德国赛多利斯)。
2　方法
2.1　分析测定方法学研究
2.1.1　色谱条件 色谱柱为 C
18
ODS2柱(4.6 mm×250 mm, 5
μm,大连依利特公司);检测波长 264 nm;流动相为乙腈 -0.3%
磷酸溶液(36∶64);流速 1 ml/min;柱温 30℃;进样量 10 μl;理
论塔板数以苦玄参苷 IA峰计应不低于 3 000。
2.1.2　对照品溶液制备 精密称取苦玄参苷 Ⅰ A对照品适量
(22.12 mg), 置 10 ml量瓶中 ,用适量甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 , 即得浓度为 2.212 mg/ml的对照品溶液。
2.1.3　供试品溶液制备 取苦玄参药材干燥粗粉约 2 g, 精密称
定 , 置 100 ml具塞锥形瓶中 , 精密加入 75%甲醇 25 ml, 称定重
量 , 超声处理 30 min,放冷 , 用 75%甲醇补足损失的重量 , 滤过 ,
滤液备用。取上述滤液 1.5 ml置微型离心管中 , 以 10 000 r/min
速度离心 10 min,取上清液备用 , 即得。
2.1.4　标准曲线制备 分别精密吸取上述苦玄参苷 Ⅰ A对照品
溶液(2.212 mg/ml)0.1, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6和 2.0 ml置 10 ml量
瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 备用。 分别取上述稀释溶液各
10 μl,注入液相色谱仪 , 按上述色谱条件测定色谱峰面积值 。以
峰面积为纵坐标 ,对照品进样量(μg)为横坐标 , 绘制标准曲线 ,
并求出回归方程为:Y=814.25X+1.25, r=0.999 9。结果表明
苦玄参苷 IA进样量在 0.221 ～ 4.424 μg间呈良好线性关系 。结
果见表 1。色谱图见图 1。
表 1　苦玄参苷 IA线性关系考察结果
序号 进样量 /μg 峰面积(A)
1 0.221 　 181.2
2 0.848 　 691.8
3 1.770 1 442.5
4 2.654 2 162.3
5 3.539 2 882.9
a-为苦玄参苷 IA
图 1　苦玄参苷 IA对照品色谱图
2.1.5　精密度实验 取同一批供试品溶液(200509)10 μl, 注入
液相色谱仪 ,重复进样 5次 , 测定苦玄参苷 IA峰面积值 , RSD=
0.11%。结果见表 2。
表 2　精密度实验结果
进样次数 峰面积(A) 平均峰面积(-A) RSD(%)
1 1 332.4
2 1 333.7
3 1 331.1 1 332.8 0.11
4 1 334.2
5 1 332.8
2.1.6　重复性实验 取同一批(200509)苦玄参药材干燥粗粉约
2 g,精密称定 , 共取 5份 , 按样品测定项下方法进行含量测定。
结果 RSD=1.3%。见表 3。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2 时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期
表 3　重复性实验结果 %
序号 含量 平均含量 RSD
1 0.222 9
2 0.220 1
3 0.218 8 0.219 8 1.3
4 0.218 1
5 0.219 3
2.1.7　稳定性实验 取同一批供试品溶液(200509)在制备后 0,
2, 4, 8, 12, 24 h分别进样 10 μl,测定苦玄参苷 IA峰面积值 , RSD=0.29%,表明供试品溶液在 24 h内稳定。结果见表 4。
表 4　稳定性实验结果
时间 /h 峰面积(A) 平均峰面积(-A) RSD(%)
0 1 338.4
2 1 331.7
4 1 337.6 1 334.3 0.29
8 1 329.4
12 1 333.8
24 1 334.7
2.1.8　加样回收率实验 取已测知苦玄参苷 Ⅰ A含量的供试品
(200509)干燥粗粉约 1 g,精密称定。分别精密加入一定量的苦
玄参苷Ⅰ A对照品溶液(1.06 mg/ml)2 ml, 按供试品溶液制备方
法制备待测溶液 , 按上述色谱条件测定 , 计算加样回收率。结果
见表 5。
2.2　样品测定与结果
2.2.1　样品测定 分别取不同月份的苦玄参干燥粉末约 2.0 g,
精密称定 , 按供试品溶液制备方法制备 , 注入液相色谱仪 ,测定峰
面积值。结果见表 6。色谱图见图 2。
表 5　加样回收率实验结果
序
号
原有量
m/mg
加入量
m/mg
测得量
m/mg
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
1 2.056 2.120 4.137 98.16
2 2.164 2.120 4.286 100.09
3 2.128 2.120 4.201 97.78 98.77 0.84
4 2.186 2.120 4.286 99.06
5 2.166 2.120 4.251 98.35
6 2.154 2.120 4.253 99.01
表 6　不同生长月份苦玄参中苦玄参苷 IA含量
批号 生长月份 平均含量(%) RSD(%)
200506 6 0.25 0.84
200507 7 0.36 0.20
200508 8 0.36 0.17
200509 9 0.22 0.19
200510 10 0.16 0.39
200511 11 0.16 0.26
200512 12 0.07 0.71
200601 1 0.05 0.52
a-为苦玄参苷 IA
图 2　 200506号样品HPLC
2.2.2　结果分析 本实验样品的收集从苦玄参种植当年 6月份
起至次年 1月 , 通过测定样品中苦玄参苷 IA的含量 , 发现苦玄参
苷 IA的含量随月份的变化而变化:6月至 7月含量增加很快 , 7
月和 8月含量达到最高。 9月份后含量开始下降 , 10、11月含量
继续下降但变化不大 , 12月至次年 1月含量陡然下降 , 苦玄参苷
IA含量不足 0.1%。含量曲线图见图 3。
图 3　不同采收期苦玄参苷 IA含量曲线图
3　讨论
本实验研究初步表明 , 苦玄参苷 IA的含量在 7、 8月份含量
最高 , 7、8月份气温较高植株生长较快。进入 10月份后 , 气温下
降其含量也随之下降。因此 ,可初步确定苦玄参的最佳采收期应
为 7、8月份;目前 ,广西苦玄参药材产区采收期也在 7、 8月份 , 实
验测定结果与实际生产相一致。
苦玄参为一年生草本植物 ,一般采用春播 , 桂南以 2月 ,桂北
以 3月间进行播种较为适宜。从播种期至苗期需历时一百多天 ,
由于苦玄参在苗期植株矮小 、产量少 , 不适宜进行采收 ,故本实验
研究所用的药材样品从栽种当年的 6月份开始采集 , 至次年的 1
月份结束 , 1月份后药材植株已枯死 , 因此项目研究的药材仅需
分析当年 6月至次年 1月采集的样品即可。
参考文献:
[ 1 ] 　广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准(1990年版)[ S] .南宁:
广西科学技术出版社 , 1992:225.
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2