全 文 ：2( X )9 年 l 月 第 n 卷 第1 期 中国现代中药 M o de m Chi ne se M汕 ci ne Jn a. 2( X珍 V ol. 1 1 N o
大孔吸附树脂提取纯化通光散
中总幽昔的工艺研究
余敬谋 ` ,2 , 石慧` , 崔炯漠 ` , 赵余庆 , ’
( 1
. 延边大学药学院 , 吉林 延吉 13 0 ;0 2 . 宜春学院药学系 , 江 西 宜春 336 00 ;
3
. 沈阳药科大学 , 辽宁 沈阳 n 0 16 )
【摘要」目的 : 优选通光散乙醇提取液经树脂纯化的最佳工艺条件。 方法 : 用正交试验法进行优选 , 以二氢肉
珊瑚昔元为指标测定总幽昔含量。 结果 : 吸附工艺的最佳条件为 A 3 B Z C Z D 3 , 即药液浓度为 4 gm · m L一 , , 温度为 45 ℃ ,
流速为 2 . OBv. h 一 ’ , 径高比川。 , 解吸附工艺白勿最佳条件为 A Z B 3 C Z , 即洗脱剂用量 S Bv 、 洗脱剂温度 65 ℃ 、 洗脱流
速 ZBV · h 一 ’ 。 结论 : 通光散的乙醇提取物经大孔树脂吸附纯化后总街昔含量明显增加 , 本研究为通光散中总街昔的
制备工艺提供依据 。
【关键词 1通光散 ; 总幽昔 ; 大孔吸附树脂纯化 ; 正交试验
通光散系萝孽科牛奶菜属植物通关藤 aM sr de in a
et
anC is iam ( Rox b
.
) 的干燥茎 、 根 、 叶 , 分布于贵
州 、 云南等地 , 具有清热解毒 , 止咳平喘 , 通乳 ,
抗癌的功用川 。 本课题组通过通光散不同提取部位
的抗肿瘤活性筛选研究中发现 , 通光散的大孔吸附
树脂 7 0% 乙醇洗脱液有明显的抗癌作用 , 并且预试
验发现其有效成分中含有大量的街昔 。 本试验根据
活性筛选结果 , 采用大孔吸附树脂法 , 从吸附和解
吸附两个方面确定通光散中的总幽昔含量 , 为进一
步开发利用通光散药用资源提供依据和参考 。
1 材料与方法
1
.
1 材料
H P lD o 型大孔吸附树脂 (沧州宝恩化工有限
公司 ) , 二氢肉珊瑚昔元 ( d ih yd or sa cr os it n , 自制 ,
含量为 98 . 5% ) ; 通光散干燥藤 、 茎 , 云南产 , 经
辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定 。
1
.
2 仪器与试剂
紫外分光光度计 UV 265 一 F w ( 日本岛津 ) , SH z -
8 2 恒温振荡器 ( 国华企业 ) , 分析天平 (上海天平
仪器厂 ) , 恒温箱 (沈阳医疗器械厂 ) , 超声波发生
器 UJ 61 06 (上海杰恩普超声设备有限公司 ) , 甲
醇 、 乙醇 、 冰醋酸 、 高氯酸 、 香草醛购于沈阳化学
试剂厂 , 分析纯 。
1
.
3 试验方法
1
.
3
.
1 最大吸收波长的确定 精密称取二氢肉珊瑚昔
元对照品 4 . 83 m g , 甲醇溶解 , 定容于 25 m L 容量瓶
中 , 摇匀 , 吸取 0 . 2 , 0 . 4 , 0 . 6m L 置比色管中 , 挥尽
溶剂 。 用紫外分光光度仪在 2田 一 65 0n m 处扫描确定
其最大吸收波长 , 其测定结果为 ( 528 士 1) n m , 选
用 528 n m 为最大吸收波长 。
1
.
3
.
2 标准曲线的绘制 精密称取二氢肉珊瑚昔元
对照品 2 . 39 m g , 用甲醇溶解 , 超声提取 or m in , 定
容于 25 m L 容量瓶中 , 摇匀 。 精密吸取对照品溶液
0
.
1
,
0
.
2
,
0
.
3
,
0
.
4
,
0
.
5
,
0
.
6
,
0
.
7 m L 置 比色管
中 , 挥尽溶剂 , 随行空白对照 , 分别精密加人 5%
香草醛一冰醋酸溶液 0 . 4 m L 和高氯酸 1. 6m L , 置 70 ℃
水浴上 , 不断振摇 , 保温 20 m in , 迅速冷却 , 加 s m L
冰醋酸 , 摇匀 , 在 5 2 8 n m 处测定吸收度 。 以进样量
为横坐标 , 吸收度为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 回归
方程为 : Y 二 1 1 . 9 3 5 8 9X 一 0 . 0() 9 14 , r 二 0 . 9 99 4 ,
二氢肉珊瑚昔元在 9 . 56 一 6 . 92 卜g 线性关系良好 。
1
.
3
.
3 M A R H P lD o 吸附工艺正交试验
1
.
3
.
3
.
1 试验设计 从大孔吸附树脂吸附和解吸附 2
个方面进行正交试验设计 , 根据单因素试验结果 ,
吸附试验对药液浓度 ( A , m g · m L 一 ’ ) , 药液温度
( B
, ℃ ) , 吸附流速 ( C , BV · h 一 ’ ) , 柱径高比 ( D )
4 个因素进行工艺考察 ; 解吸附试验对洗脱剂用量
( A
, 柱床体积 B V ) , 洗脱剂温度 ( B , ℃ ) , 洗脱流
速 ( C , B V · h 一 ’ ) 3 个因素进行考察 , 采用因素水
平表安排试验 , 见表 1 一 2 。
[通讯作者 ] ` 赵余庆 , E 一 m ia l : z y砂 885@ 126 · e o m
DOI : 10. 13313 /j . i ssn. 1673 -4890. 2009. 01. 011
20 9 年 1月 第 1卷 第 l期 中国现代中药 Mo dem Ch in s e e M汕 e in eJL x aZ (洲为 Vo l .N 1 1o .l
表 1吸附试验因素水平表 表5 解吸附试验测定结果
编号 尤 /% % Y /
7 1 1 1 18
.
6 18
.
7
452
.
0
3 46 5 4
.
0 1: 10
8 1
.
2 2 1
.
6
8 4
.
52 3
.
0
表2 解吸附试验因素水平表8 8 .6 2 2 .5
9 1
.
2 2 3
.
1
2 5
.
8
45
3]6 2 5 4
1
.
3
.
3
.
2 供试品溶液的准备 [圳 将通光散药材破
碎 , 精密称取 5 9 , 加 70 % 乙醇提取 2 次 , 合并提取
液 , 回收乙醇 , 蒸馏水稀释至 or m L , 精密分成等量
的 3 份 , 分别加人不同量的蒸馏水配成 1 , 2 , 4 m g’
m L
一 ’ 的药液 , 按 L , (3 4 ) 正交试验表装人处理过的
大孔吸附树脂柱进行试验 , 过柱液减压回收乙醇 ,
干燥 , 精密称取提取物一定量 , 置 10 m L 容量瓶中 ,
加人甲醇溶解 , 定容备用 。
2 结果与分析
2
.
1 试验结果
吸附试验以 M A R 吸附量 ( m g · g 一 ’ ) 为指标 ,
进行 直观分析和方差分析 , 结果见表 3 一 4 。 解吸附
试验以解吸的相对百分量为横坐标并以总幽昔的百
分含量为纵坐标 , 进行直观分析和方差分析 , 结果
见表 5 一 6 。
表 3 吸附试验测定结果
编号 A B C D 吸附量 / m g’ g 一 ’
1 1 1 1 1 4 4
.
3
2 1 2 2 2 4 9
.
3
3 1 3 3 3 4 6
.
1
4 2 1 2 3 5 9
. 】
5 2 2 3 1 5 6
.
1
6 2 3 1 2 5 5
.
2
7 3 1 3 2 6 1
.
1
8 3 2 】 3 6 1. 0
9 3 3 2 1 64
.
1
I K I 】3 9 . 7 0 164
.
5 0 16 0
.
50 164
.
50
I K Z 17 0
.
4 0 16
.
4 0 17 2 5 0 l 6 5
.
6()
1 K3 186
.
2 0 16 5
. 叨 16 3 . 3 0 16 6 . 20
I R 15
.
5 0 0
.
6 3 4
.
X() 0
.
5 7
9 3
.
0
9 2
.
1 16
.
5
9 5
.
6
9 7
.
5
17
.
0
19
.
6
24
.
30 2 6 7
.
2 0
27 2
.
79 2 6 6
.
3 1
20 2 6 7
.
80
0
.
2 0
0243
2.9385反
ù、ù6, I,`,二
J`,、ùn两-,`
6 3
.
30
7 1
.
4 0
5 3
.
10
6
.
10
5 7
.
7 0 6 1
.
5
6 1
.
7 0 63
.
7 0
6 8
.
40 6 2
.
5 0
3
.
5 7 0
.
7 3
23465798IKZ3IR22
表 6 解吸附试验方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 值 D值
2 9 3
.
20
4 1
.
2 4
4 24 9
.
3 0 P < 0
.
0 1
5 9 7
.
7 1 P < 0
.
0 1
的47巧o169241
6709243073 128
,乙
0
. 肠 9
CBA
ō3只éǎó目.且.勺盛且
,山`ZSA
ZSB
56
.
06
19
.
4 9 9
.
7 5
P < 0
.
0 5
P < 0
.
0 5
ZSC 0
.
8 1
注 : 0F . 05 ( 2 , 2 ) 二 19 . 0
2 0
.
4 1
; 0F
。 :
( 2
,
2 )
二 9 9
.
0
表 4 吸附试验方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 F 均方
I S A
I S B
1S C
I S D
3 7 2
.
7 1
0
.
60 2
2 6
.
2 8
0
.
5 0
7 5 1
.
4 3 P < 0
.
0 1
52
.
9 8
1
.
0
18 6
.
3 6
0
.
3 0
13
.
14
.0 2 5
尸 < 0 . 0 5
0F , ( 2
,
2 ) 二 19
.
0 ; 0F
。 1
( 2
,
2 )
二 9 9 . 0
结果表明 , 在吸附试验中 , 对 M A R 吸附量影
响程度从大到小的顺序是 A > C > B > D 。 方差分
析结果 , A 因素影响最大 , 其次是 B 因素 , 均有
显著性差异 , C 、 D 因素影响小 。 按 卜述数据综
合考虑 , A 因素以 A : 为佳 ; B 因素以 B Z 为佳 , c
因素以 C : 为佳 , D 因素影响最小 , 以 D 3 为佳 。
综上所述 , 优选的条件为 A 3 B Z C Z D 。 , 即药液浓度
为 4 m g · m L 一 ’ , 温度为 4 5 ℃ , 流速为 2 . o B v · h 一 ’ ,
径高比 l “ 10 。
在解吸附试验中 , 以解吸的相对百分量 ( X )
为指标进行直观和方差分析 , 对指标影响的程度
从大到小的顺序是 A > B > C 。 方差分析结果 , A
因素影 响最大 , 有显著性差异 ( p < 0 . 01 ) , 为
A 3 佳 。 B 因素影响大 , 有显著性异 ( 尸 < 0 . 01 ) ,
以 B 3 为佳 。 C 因素影响较小 , 考虑生产工艺选择
X 2 (为 年 1月 第 1卷 第 l期 中国现代中药 M记e mC i he ne s Me i di ce na J n.2侧V ) 9 OI .N 11o . l
C :较优 。 综上所述 , 优选的条件为 A 3 B 3 C Z 。 洗
脱剂用量 12 BV , 洗脱剂温度 65 ℃ , 洗脱流速
Z BV
·
h
一 ’ ; 以所含街昔的百分含量为指标进行直
观和方差分析 , 对指标影响的程度从大到小的顺
序是 A > B > C 。 方差分析结果 , A 因素影响最
大 , 其次是 B 因素 , 均有 显 著性 差 异 ( p <
0
.
05 )
,
C 因素影响最小 。 按上述数据 , A 因素以 A Z
为佳 ; B 因素 B 3为佳 , C 因素以 C Z为佳 , 综上所述 ,
优选的条件为 A Z B 3 C : , 即洗脱剂用量 SBV 、 洗脱剂温
度 65 ℃ 、 洗脱流速 Z B .V h 一 ` 。 比较两个指标考察的结
果 , 结合工业生产节约溶剂等操作 , 溶剂用量选择
SBV
, 所以总的优选工艺为洗脱剂用 SBV 、 洗脱剂温
度 65℃ 、 洗脱流速 ZB v · h 一 ’ 。
2
.
2 正交试验验证
按上述最佳条件对 3 批乙醇提取物进行 M A R
吸附和解吸 附验证试 验 , 结果平均 吸附量 为
56
.
2 m g’ g 一 ’ , 总街昔平均含量为 2 2 . 8 % , 数据表
明与正交试验结果基本一致 , 条件稳定 、 方法选
择可靠 。
3 讨论
本试验从吸附和解吸附两个方面单独对 M A R
纯化工艺进行考察 , 结果表明 , 提取液经过 M A R
处理后 , 能够有效地对通光散中的有效成分进行
富集 , 使有效成分含量明显增加 , 总幽昔的含量
从 8 . 3 % 富集到 2 . 8% 。 最后确定其工艺 : ( l)
吸附工艺 , 即药液浓度为 4 m g’ m L 一 ’ , 温度为
4 5℃ , 流速为 2 . o B v · h 一 ’ , 径高比 l : 10 ; ( 2 ) 解
吸附工艺 , 洗脱剂用量 S B V 、 洗脱剂温度 65 ℃ 、
洗脱流速 Z B v · h 一 ’ 。
中药提取分离是中药新药的开发和中成药生产
过程中最关键的技术环节 , 也是 目前制约中药质量
和稳定性的关键问题 。 与传统的除杂方法和工艺相
比 , 采用大孔吸附树脂技术 [ ’ 〕对中药提取液进行除
杂精制 , 有以下优点 : 缩小临床给药剂量 , 提高中
药内在质量和制剂水平 ; 减小产品的吸潮性 ; 缩短
生产周期 , 所需设备简单 , 制备成本低 、 无污染 、
有效成分损失少等诸多优点 , 具有良好的应用前
景 。 吐皿l
参考文献
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「4」芦金清 , 刘尚桃 ,刘再刚 ,等 . 吸附树脂 法提取 纹股蓝皂
普【J l . 中成药 , 19 92 , 14 ( 4 ) : 2 一 3 .
( 收稿 日期 2X() 8刁3 一 17 )
P u ir n e s it o n a nd E
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l o g i e a l e o n d i t io n s o f d e s o rp t io n w e er a s fo l l o w e d : th e v o l u m n o f e l u ti n g er a ge n t w a s S B V
,
t h e te m P e ar t u er o f d e s o印 ti o n
w a s a t 6 5℃ , th e e l u t in g v e l o e i ty w a s a t ZB V · h 一 ’ . e o n c lus io n : I t w a s fe a s ib l e t o p u r ify t h e t o tal s te ` o s id e w i t h m a e or -
P o or u s a d s o rp t iv e er s i n s H P D 10 0
.
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