全 文 ：浙 江 农 业 大
Aet a A gri e ult t i a re
学 学 报 , , ( 1 ) : 3 1一 3 9 , : 。。。
U n iv e r s i t a t i s Z h o j i
a n g e n s i s
聚合草枯萎烂根 ( 青枯病 ) 病原细菌鉴定 *
林 玉 松
( 浙江农业大学植物保护系
提 要
我们于 1 9 7 8~ 1 98 1年从浙江临安和杭州市郊等地聚合草枯萎烂根病株分离的细菌 . 将其培养性状 、 形 态 、 革
兰氏染色反应 、 生长适温 、 生理生化反应等性状 , 与番茄青枯病原细菌刘比 , 其结果相似 。 两者并可 交互接种 .
以聚合草枯萎烂根病原细菌和番茄青枯病原细菌为抗原 , 按常规 注射兔子 , 分别制得两个抗血 清 , 其效价均
在 1 2 80 ~ 2 56 0之间 。 为了进一步明确两菌的亲缘关系 , 将 两菌抗血清交互吸附后 , 再将 两苗调换 测定 , 都不能起
凝集反应 .
试验证明 引起聚合草枯萎烂根病的病原细菌与茄科 假单 胞 杆 菌 ( E巨旦竺`些里旦户旦鉴 回 q ii旦些旦旦丝卫 ( S m i ht )
S m i th 〕 青枯病细菌相同 .
我国于 1 97 2年从国外引进富含蛋自质的高产饲料作物聚合草 , 属 紫草科 ( B O r r a g i “ a 。
e a e )
, 聚合草属 ( s , m乡1夕r。拼 L . ) 。 聚合草 ( S y m p入y , u m o f f ic i: a l。 L . ) 原产苏联高加索 ,
性喜冷凉泽润 , 近年来经全国推广种植 , 但在长江以南各省 , 均遭受枯萎烂 根 病 的 严重为
害 。
聚合草枯萎烂根病是一种危害维管束的
细菌性病害 ,在江浙一带一般于 6一 9月发生 ,
在 7一 8月高温期病情剧发 。 发病初期仅于晌
午烈 日下 , 植株基部老叶呈现萎蔫 , 早 、 晚或
阴雨天可暂时恢复正常 。 此时 , 切检地上叶
柄基部维管束中 , 有污白色 菌 脓 溢 出 。 随
着病情进展 , 仁部叶片以至心 外卜也现青绿 色
枯萎 ; 根部外观有时完好 , 但其 维 管 束 变
褐 , 根段皮层脱落 , 心髓变褐腐烂 , 有时仅
留柔韧的皮层和维管束丝 。 重病株 , 母根和
侧根全部溃坏 , 最后整株枯死 , 呈典型的青
枯症状 ( 图 1 ) 。
图 1 1 9 7 8年 , 临安研 口 牧场 , 大田 发病中心
I了19 . 1 D i s e a s o d p l a n t s i n t h e f ie l d o f a p i g
f a r m
,
Y
a n k o u
,
L i n a n ( 1 9 7 5 )
青枯病原细 J萄 ( 尸s 。。“ o 。 , o n a : : o za , , a e e a , 。 m )侵害 3 3科 , 2 0 0余种寄主 ` 3 。 1 5 5 2年意大利
首次记录了此病菌侵 害番茄 。 世界各国对其所致植物病害的名称 日Ll法不一 , 如美国称之为 :
“ 南方细菌 l生萎蔫病 ” ( s o u t h e r n b a c t e r i a l w i l t )
兰维尔 ( G r a n v i l l e ) 萎蔫病 , , 等 。
“ 马铃薯褐色腐 败病 ” 和 “ 烟 草格
本义 于 1 0 8 4年 5 .月 2 4日收到。
芳 木文承葛起新教投 , }f阅 ; 临安县粮 食局词料公司楼 彭寿同志参加 19祀年 田 间调查工作 ; 弓校植保叮级邵剑松 、 于利
军同学 1 0 81 年参加空 内郊分鉴定 。 特此致谢 。
3 2 浙 江 农 业 大 学 学 报 1 1 卷
鉴于聚合草细菌性枯萎病为害的严重性 , 我们 自1 9了8年以来 , 对此病进行了调查研究 ,
现将其中有关病原鉴定方面的结果报告如下 :
一 、 材料与方法
( 一 ) 生理生化测定
用于鉴定的聚合草枯萎烂根病原细菌菌株两个 , 一是 1 9 8 0年 9月 1日从临安聚合草病株上
分离到的代号为 C 一 80 9 1 ; 另一是 1 9 8 1年 6月 1日从浙农大 田间刚发病的聚合草植株茎部维管
束中分离到的 , 代号为 C 一 8 1 6 1。
番茄青枯病原细菌两个菌株先后于 1 9 8 0年 10 月从杭州浙农大 田间发病的番茄植株茎部维
管束中和 1 9 81 年 5月 30 日 从杭州览桥公社青峰大队田间番茄青枯病株上 分 离 得 到 , 分别以
T一 5 0 1 0和 T 一 8 1 5 3 0表示 。
所有菌株经接种证明为致病菌 ( 图 2 ) 。
图 2 人工接种试验 , 无论有伤无伤均可 发病 , 而 以 有伤接种 发病最快 , 3一 5天 即可致死
F 19
.
2 A
r t i f i
e i a l i n o e u l a t i o n t e s t
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e e t e d m
o r e r a p i d l y
,
a n d d i
e d i n th r e e t o f iv e d a y s
测定方法根据方中达 「’ l 和 A . C . H a y w 。 : d 生’ ` ’进行 。
( 二 ) 血清鉴定
1
. 杭血清的制备
( 1 ) 杭原细菌来源 : 供试抗原为聚合草枯萎烂根病原细菌 C 一 8 1 6 1和番 茄 青枯病原细
菌 T 一 8 1 5 3 0 。
两菌形态 , 革兰氏染色反应 , 生长适温和培养性状等表现一致 ; 又经有 关 寄 主 交互接
种 , 均获成功 。
,1 期 林 玉松 聚 合草枯萎烂根 ( 青枯病 )病原细菌鉴定
( 2 ) 兔子准备 : 1 9 8 1年 5月 , 源 自余杭县乔司农场健康雌性家兔 , 经饲养到体重约三公
斤时进行免疫注射 , 注射前经测验免 子血清与两菌 ( 抗原 ) 无凝集反 应 发 生 , 并 将兔子编
号 , 剪毛为记 。
( 3 ) 杭原浓度计数— 用麦法 兰 ( M c f ar l a n d ) 云度计 : 为保 证注射和 凝集 反应测定用的抗原细菌悬浮液浓度能接近每毫升含 5 x 1 0 8~ 1 0。个细菌 , 以免 影 响抗血清 的效价和试
验精确性 。 以麦法兰云度计作为混浊度的比较标准 , 经几次顶备试验 , 以每毫升 15 ~ 25 亿的
悬浮液浓度为合适 。
( 4 ) 免疫注射 : ①将肉汁陈葡萄糖琼脂斜面基上培养 24 一 48 小时的细菌 , 加 0 . 8%生理
盐水配成每毫升约有 15 一 25 亿个细菌的悬浮液 ; ②把 5毫升的注射器 和 25 号 的注射针头各若
干 , 分别用纱布包裹煮沸 15 分钟 , 消毒待用 ; ③选定兔号 , 每次固定注射对号的抗原细菌 ; 第
一次皮下注射 0 . 5毫升 , 5天后 , 改从静脉注射 , 其后每次注射量 递 增 0 . 5 毫 升 ; ④注射 6次
后 , 先从静脉采血` 3一 4毫升试测其抗血清凝集效价 , 已达 1 2 5 0一 2 5 6 0进行全采血 。 免疫程序
见表 1 。
表 1 不 同抗原注射 兔子方案
T a b le 1 A n t ig e n s i n j
e e t e d i n t o r a b b i t s
1 9 8 1
.
19 8 1
.
19 8 1
.
1 9 8 1
。
1 9 8 1
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1 9 8 1
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7
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了。 2 9
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13
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1 8
日一 ,介遍二_ _ _ _…_ __今花_ …_冬垄二_ _ _ _…_ _ · _ _ _ _一雀l黔 骂i卜 悬 , 198 、 月 2 4日放血
2
·
o毫升 (静 )
2
·
5毫升 (静 )
3
· 。毫升 (静 )
2
. 。毫升 (静 )
2
·
5毫升 (静 )
3
· 。毫升 (静 )
1 5一 2 0
1 5一 2 0
1 5一 2 5
( 5 ) 全 采血 : ①备烘干消毒大 口 1 6 0只 2 0毫米试管若干 , 并编号 ; ②把经注射抗原已产
生抗血清有效价的相应号兔 , 割破动脉 。 兔重 3公斤者 , 约可全采得血 1 0 毫升 。
( 6 ) 杭血清分离: ①将收集的血液 , 置室温下凝 固 , 后分离出 血 清 ; ②采得血液中血
清量少时 , 可将其置 37 ℃恒温箱内 1小时 , 再移至 4℃冰箱中一昼夜 , 促进 血 块 里 游离出血
清 ; ③抗血清应加防腐剂 ( 每 10 毫升血清中加 5%苯酚液 1毫升或 40 毫升血清中加 1 : 1 2 5 0的硝
酸苯求液 1毫升 ) 。 小瓶分装 , 并密封低温冷藏 。
2
. 凝集反应测定
( 1 ) 取小试管 ( 1 0 X 1 3一 15 毫米 ) 10 支 , 每管加 1 毫升生理盐水 ( 宜现配现用 , 搁置
有 日者 , , 临用前须经加热 , 除却其中 C O Z ) ;
( 2 ) 取抗血清 1毫升 , 加生理盐水 4毫升 , 稀释成 1 : 理的抗血清 ;
( 3 ) 用消毒干净的吸管吸取 1 : 4的抗血清 1毫升加入试管 1中 , 混合后 ,调换吸管自管 1吸
取 1毫升加入管 2中 , 依次稀释到管 9 , 每次都应更换一支吸管 。 第 9支试管中多余的 1毫升用
吸管吸出弃之 , 第 10 支试管作对照 , 不加抗血清 ;
( 4 ) 将经肉汁陈葡萄糖琼脂斜面墓上培养 2选~ 4 8小时的细菌 , 加 0 . 8%生理盐水配少戈每
江 农 业 大 学 学 、报 n 卷34 浙
毫升约有 15 一25 亿个细菌的悬浮液 ;
( 5 ) 每支试管中分别加入上法 配 备的
供测细菌悬浮液各1毫升 , 充分混合 以 后 ,
置 37 ℃恒温箱中 4小时后 , 移在室温 或 冰箱
中放一夜后记载 。
3
. 凝集素吸附反应
方法 : 基本同凝集反应测定 。
〔附 〕 凝集程度记载标准
竺 乡引
。
{
凝 集 程 度 {标 记
没有凝集 , 全部液体混浊 :
凝集很少 , 上部液体混浊 ,
部分凝集 , 上部液体仍浪浊 ;
明显有凝集 , 但上部液体稍有混浊 ,
完全凝集 . 上部液体完全澄清 .
十
+ +
+ + +
+ + 十 十
步骤 : ①将抗血清稀释40 倍 ; ②加等容量细菌悬浮液混合后 , 置 50 一 56 ℃恒 温 箱中2小
时吸附 ; ③于 15 0 0一 2 0 0 0转 /分钟离心机离去细菌 , 取上面澄清 ( 1 : 80 ) 的 抗 血清 , 照常规
法稀释后测定凝集反应 。
二 、 试验结果和分析
( 一 ) 生理生化测定
1
. 形态和染色反应
细菌在肉汁陈琼脂培养基上培养 4 8小时后 ,
短杆状菌 , 有时两个菌体相 连 , 菌 体大 小
o
·
6一 0 · 7 X l · 3一 2 · 5微米 , 革兰氏染色反应
阴性 , 不形成荚膜及芽抱 。 鞭毛染色后观察
为单极鞭毛 1一 3根 , 以 1根为多 ( 图3 ) 。
2
. 培养性状
此菌生长速度快 , 在肉汁陈葡萄糖琼脂
培养基上接种 ( 平板划线法 ) 24 小时后形成
菌落 , 菌落直径 1一 3 毫米 , 菌 落 圆形 , 隆
起 , 菌落乳白色稍带浅黄色 , 表面润滑有光
泽 , 菌落边缘整齐 , 粘稠状 , 对光照菌落半
透明 , 其边缘及细菌生长而未形成菌落的地
方呈天蓝色乳光 。 随菌落的生长 , 菌落中间
先变为黄褐色 , 其边缘仍较透 明 , 二 、 三周
后 , 菌落变黄褐色 , 培养基逐渐 变 为棕 褐
j韭行结晶紫染色后观察 , 菌体为两头钝圆的
图 3 病原细 菌鞭毛染 色
鞭毛 1~ 3根
F i g
.
F l
a g e l lu m s t a in i n g o f p a th o g e n ie
b a e t e r ia
, 1一 3 f l a g e l la
色 。 在 P D A 培养基上培养的菌落乳白色 , 隆起 , 培养一周后 , 菌落变黄褐色 。 此菌生长的
最适温度 34 一 37 ℃ , p H 以 6 . 6一 7 . 0为最适 , p H S . 5一 9 .嘟 能生长 。
3
. 生理生化反应
( 1 ) 碳素化合物的矛.l用 : 本试验采用 12 种碳素化合物进行发酵试验。 以磷酸 按 组合培
养浪作基础培养基 , ( 成份 N H 4 H Z P O 、 1 . 0克 , 一 K CI 0 . 2克 , M g S O ` 7H Z O o . 2 克 , 蒸馏水
1 0 0 0毫升一 ) 。 基础培养基在加压蒸气 126 ℃下灭菌 30 分钟 ; 搪的灭菌 : 对较耐高 温 的糖类 ,
林 玉松 聚合草枯萎烂根 ( 青枯病 ) 病原细菌鉴定
用加压蒸气 1 15 ℃下灭菌15 分钟 ; 不耐高温高压的糖类用过滤法灭菌和加压蒸气 10 8 ℃下灭菌
3分钟 。 基础培养基中先加 1 %的糖或碳素化合物 , 再加 0 . 1%的澳百里兰指示剂 ( 1 . 6% 酒精
溶液 ) , 并用 40 % N a O H调节 p H到 7 . 0一 7 . 2 , 此时培养液成橄榄绿色 , 然 后分 别将其装入
大小为 10 x 1 50 毫米的试管 , 每管 5毫升 , 并加灭菌杜氏发酵小试管一只以测定气体的产生 。
接种后置 32 ℃恒温下培养 , 以不接种为对照 。 观察 3 0日 , 聚合草和番茄各菌株中 , 除聚合草
C 一 80 91 (老 ) , 对个别糖稍有差异外 , 其他反应均一致 。 它们不能利用山梨糖醇和乙醇 。 能
利用葡萄糖 、 蔗糖 、 甘露醇 、 半乳糖醇 、 阿拉伯糖 、 D ( 、 )纤维二糖 、 麦芽糖 、 乳 糖 、 甘油
和吐温 80 。 使葡萄糖 、 蔗糖 、 半乳糖醇 、 甘露醇和甘油产酸 , 但不产气 。 对照不接种的无变
化 ( 表 3 ) 。
表 2
G
r o w t h
细菌在培养基的不同 p H 中生长情况
T
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e o f t h
e b a e t e r i u m i n m e d io m s o f 丫 a r i o u s P H v a l u e s
6
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3 7
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生举鱿二一下万 }一下一{一 再 {下不一 )一不_ {一 j刀
`
+
” 表示 能生长 ; “ 十 + ’ 表示生长较好 ; “ 十 十 + ” 表示生长最好 ; “ 一 ” 表示不生 长。
表 3 糖和其他碳素化合物发酵试验
T a b l
e 3 F
e r m e n 之a t i o n e x p e r i m e n t s w it h s u g a r a n d o t h e r e a r b o n a e e o u s e o m p o u n d s
菌 株 葡萄糖 蔗 糖 乳 糖 { :
J一阿 甘露糖醇 山梨糖醇 } D , , 、 甘油 乙醇 吐温80麦芽糖 { 半乳糖醇 { 、 丁 ,
{拉伯糖 …纤维二糖
C 一 8 0 9 1 A 人 { ` 八 {; +
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入
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{
A 表示产酸 , + 表示利用 , 一表示不生 长 .
( 2 ) 柠棣酸盐 的利用 : 番茄和聚合草各菌株能在柠檬酸盐培养基上 良好生长 , 经接种 2
天后 , 培养基均逐渐由绿变蓝 , 表现它们都含有异柠檬酸酶和苹果酸合成酶 , 使柠檬酸最后
氧化成 C O Z和水 , 或生成 4碳二狡酸继续进行乙醛酸循环 。 对照培养基不变色 。
( 3 ) 氮素化合物的矛l」用 : 硝酸还原测定用 S k e r m a n 试剂测定 。 培养基的成份是蛋白 10
克 , K N O 3 1克 , 蒸 馏水 1 0 0 0毫升 , 用钓%的 N a O H调节 p H到 7 . 。 , 试管接种后定期测定 。
试剂的成份是碘化淀粉 , 取接种培养几天的培养液 2毫升 , 加入 2一 3滴试剂 , N O : 形成后与
碘化淀粉反应释放出碘 , 碘遇淀粉变蓝色 。 聚合草青枯菌 , 番茄青枯菌有蓝 色反应 , 说明能
还原硝酸盐 , 不接种的对照没有蓝色反应 。
胺的测定用蛋白陈培养液 ( 蛋白陈5克 , 蒸馏水 1 0 0 0毫升 ) , 接种后 在 32 ℃下 培养 , 用
涅斯勒 ( N e s s le r ) 试剂定期测定结果 , 4个菌株加入试剂后 , 都有黄 色沉淀出现 ; 对照不产
生黄色沉淀反应 。
H
:
S的测定采用蛋自陈培养 浪 , 接种后 , 川自滤纸剪成 5 只 1 0 毫米小条 , 在饱和醋酸错
浙 江 农 业 大 学 学 报 1 1 卷
溶液中浸过后放在试管中加热烘千 , 然后夹于试管与棉花塞之间 , 3 2℃下培养 , 观察 30 天 ,
滤纸不变色 , 无 H : S产生 。
酬噪测定采用的培养基是 : 蛋 白膝 2克 , N a : H 尸。 、 2克 , 葡 萄 糖 10 克 , 蒸 馏 水 10 0。毫
升 。 接种后将在饱和草酸溶液中浸过后的白滤纸待烘千后夹于试管与棉 花 塞 之问 。 接 种后
3 2 心培养 , 观察 30 天 , 滤纸未变色 , 不产生叫噪 。
明胶液化试验 , 在肉汁陈琼脂培养墓中加 15 % 的明胶 , 培养基和 明胶分别灭菌后井己台 ,
用平板打孔法接种 , 3 2℃培养 , 定期测定 。 测定方法是在琼脂平板上加 一 层酸性升汞溶液 ,
测定结果 , 4个菌株都不能液化明胶 。
( 4 ) 淀粉水解试验 : 用肉汁膝琼脂培养基 , 加 0 . 2% 的可示容性淀粉 , }月 j卜板 划 线法接
种 , 定期测定 3D 天 , 4个菌株都能水解淀粉 。
( 5 ) 甲基红试验和 V o g e s 一 P r os k a ue r反应 : 定 期 取接种后的蛋白膝葡萄糖 培养液 5毫
升 , 加几滴甲从红指示剂 , 反应为黄色 。 V . P . 试验是取上述培养浪 5 毫 升 , 勺肠毫 升 10 %
K O H 溶液 , 放置过夜 , 呈阴性反应 。
( 6 ) 脱氮能力刚 定 : 先在肉汁炼培养液中加 0 . 1% K N O 3 , 装入试管 )J亏接 种 , 并在培养
液上加 1厘米高度的凡士林密封 。 并以培养液中不加 K N O 3的为对照 。 培养 2 天后 , 4个菌株
都能在含 K N O 3的培养液中生长并产气 , 不加 K N O 3的培养液中 4个菌株都不能生长 。
( 7 ) 接触晦试验 : 取培养 2天后的菌落几菌环于玻片上 , 加儿 滴 过 氧 化氢 ( 3 % ) , 1
个菌株都产生气泡 , 呈阳性反应 。
生理生化测定结果列表于下 :
表 4 生理生化刚 定结 果
T
a
b l
e 4 R
e s u l t s o f P h y
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a n d b i o e h e m i e a l 土e 、 t s
} …甲基红试验…一 试验{一 { {…淀 粉水解 } 一 、 一 {
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一 1}
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}{ 一
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一 {
` 十 ” 表示反应阳性 ; “ 一 ” 表示反应阴性 .
( 8 ) 石蕊牛乳试验 : 在脱脂牛乳 ( 离心法 ) 中加 l %的石蕊 , 接种 后 理个 菌 株反应一
致 。 石蕊牛乳的颜色由粉红渐变蓝色 , 呈碱性反应 。
4
. 交互接种试验
将番茄青枯菌株 T 一 80 1 0和 T 一 8 15 30 分别在牛肉汁平面培养 基 上 , 30 ~ 3 2 C下生长经
5天 , 于 1 9 8 1年 6月 15 日对无病土 ( 疏浚华家池的陈年塘泥 ) 盆栽或露地 ( 浙农大柿园隙地 ,
久年不种茄科作物 ) 种植的聚合 一草, 割叶后的叶柄伤 口涂接 10 株 , 或用菌液浇注人为伤口的
5盆植株根围 ; 以涂 、 浇清水为对照 。 结果接种株于 6月20 日先后枯萎死去 ; 对照株观察至 8月
底 , 均不发病 。
又将聚合草枯萎烂很菌株 C 一 8 09 1和 c 一名 1 6 1 . 同 _上法培 养, 一卜工9 8工年了月 5 日 , 分另{!对
无病土 ( 同上 ) 盆栽的番茄 ( 苗高约 3 0公分 ) 每盆 1株 , 用细菌液注射番茄茎基 5盆株 , 接种
林玉松 聚合草枯萎烂根 ( 青枯病 ) 病原细菌鉴定
后注 口用湿棉贴附保湿经 1 8小时 , 或用菌液浇注人为伤根的 5盆株 ; 以清水 注 射或浇注的为
对照 。 结果接种株于 7月 8 、 1 0和 12 日先后出现典型的枯萎症状 , 以伤根浇注接种发病最快 。
对照株均不发病 。
( 二 ) 血清鉴定
1
. 凝集反应结果
结果表明聚合草枯萎烂根病原细菌和番茄青枯病原细菌的反应基本一致 , 说明两种细菌
的亲缘关系比较接近 ( 见表 5 ) 。
表 5 聚合草枯姜烂根病原细菌和番茄青枯病菌等凝集反应 测 定
T
a l ) le 5 A g g l u t i n a t i o n t e s t s o f th
e p a 土h o g e n ie b a e t e r ia o f w il t a n d r o o t r o t d is e a s e 王n
S y m p h y t
u m o f f i
e i n a le a n d t
o m a t o r e s P e e t iv i l y
抗血清 测 定 菌 株
稀 释 倍 数
::
320
一一一ǔ
抗叫一川ùō l州
(二一 8 1 6 1
C 一 8 1 6 1
T一 8 15 3 0
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2
. 凝集亲吸附反应测定结果
聚合草枯萎烂根病原细菌的抗血清 , 经番茄青枯病原细菌吸附后 ; 或番茄青枯病原细菌
的抗血清 , 经聚合草枯萎烂根病原细菌吸附后 , 再分别与该两菌进行凝集反应测定 , 结果都
不能发生凝集反应 , 表明以上两菌是同一种细菌 , 见表 6。
表 6 聚合草枯姜烂根病原细菌与番茄 青枯病原细 菌凝集素吸附测 定结果
T a b l e 6 A b s o r p t io n a n d a g g l u t in a t io n t e s t s o f t h e p a t l l o g e n ie b a e t e r ia o f
w i l t a n d r o o t r o t d i s e a s e i n S y m p h y t
u m o f f i e i n a l e a n d t o m a t o
抗 血
` _ ” , 二 ” ” ” 盯 ’ 一 ” ’~ ’ …” ’ ~ 1 ’联 ” 血 清一 稀 蔺 蓓而俏 } 吸 收 抗 原 } 测 定 杭 原 卜 - - -一 - - - - - - 一 -一 - - - - - - - - -一
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T一 8 1 5 3 0
C一 8 1 6 1
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数
5 12。
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浙 江 农 业 大 学 学 报 1 1 卷
三 、 讨论和结论
H
.
A
. 纳乌莫夫 ! ’ 。 l曾提到尸 s o d。 胡 no a: : ol a : ac ea : 2`m能侵害紫草科 。
据对青枯假单胞杆菌 〔P s e o d om o n a : : o la : a e e a , , u , , , ( S ,二 i t ll ) S 。 , i t ll 〕 有关性状 描述 : 不于
状菌大小 0 . 5一 0 . 了欠 1 . 5一 2 . 5 林 m ( 微米 ) 以卜 4根鞭毛运动 。 至 少在复台培养基 上厂生两利,不 同类型的菌落 , 一种是光滑 、 湿润凸起的 ; 另一利”是略粗糙 , 干燥低平的 。 有些菌株在
复合培养基中产生褐色色素 。 有的菌株有脱氮能力 , 大多数菌株在厌气条件下含有硝酸去价 !J
合适的碳源的培养基中能够生长 。
许多菌株能水解聚乙烯山梨糖醇配单油酸盐 ( 即吐温 8 0 ) 蛋黄 反 应 阴 性 。 不能利用 :
工、 一阿拉伯糖 、 木糖 、 酒精和甘油 。 不水解淀粉 , 不液化明胶 。 可利用葡萄糖 、 果糖 、 蔗糖
井产生酸 。
19 78 一 81 年通过对聚合 一草枯萎烂根病株的分离 、 培养 、 接种 , 证实其 致 病 菌 为 一 种细
菌 , 经与番茄 青枯病原细菌 , 进行形态 、 培养性状 , 生理生化 , 和血清学凝集吸附反应等有
关项 目比较测定结果 , 基本与上述一致 。 :可以说明浙江省各地分离到引起聚合草枯萎烂根的
病原细菌 , 即茄科假单胞杆菌 〔P s e Z, d o m o , , a : : o l a : a e e a ,一 u 。: ( S m i t }1 ) S m i t h〕 。 故 聚合草枯
萎烂根病可改称为聚合草青枯病 。
参 考 文 献
〔 1 〕 方中达 : 《 植病研究法 》 , 北京 , 农业出版社 19 了9年 , 第 161 一 2 4页 .
〔 2 〕 全国聚合草组 、 吉林省农科院 : 《聚合草 》 ( 内部资料 ) , 1 0 7了一 1 9 8。 ( 1一 2 ) 。
〔 3 〕 任欣正 、 方中达 : 姜瘟病病原细菌的鉴定 , 《 植物病理学报 》 , 1 1 ( 1 ) 1 9 8 1 : 5飞一 5 .6
〔 4 〕 任欣正 、 韦刚等 : 不同寄主植物青枯菌菌株的比较研究 , 《 植物病理学报 》 , 1 1 ( 4 ) 1 9 8] : 1 一 8 .
〔 5 〕 林玉松 、 楼彭寿 : 聚合草烂根枯萎病的调查和讨 论分析 , 《 聚合草 》 ( 内部资料 ) , 19 78 ( 6 ) : 3。 一 3 3
〔 6 〕 林玉松 、 楼彭寿 : 聚合草细菌性烂根病调大研究 , 《 青 饲料汇编 》 ( 内部资料 ) , 19 8 。 ( 2 ) 和 1 9 81 ( l )
合刊 : 1 6一 1 8 .
〔 7 〕 林玉松 : 聚合草枯萎烂根病原细菌侵袭途径初步探索 , 《 青饲料 》 ( 内部 资料 ) , 1 9 8 2 ( 1 ) : 41 一们
〔 8 〕 林王松 、 楼彭寿 : 聚合草不同品种对枯萎烂根病的抗性研究初报 , ( 青饲料 》 ( 内部资料 ) , 1 9 3 2 ( 2 ) :
1 乙~ 2 1 。
〔 9 〕 廖景亚 、 吴笠等 : 聚合草青枯病的发生规律及病原菌的研究 , 《 植物病理学报 》 , 1 2 ( 4 ) 1 9 8 2 : 叨~ 4 8 。
〔 1。 〕 纳乌莫夫 H · A · ( 方巾达等译 ) : 《 农业植物病理学 》 , 北京 , 财经 出版社 1 9 5 5年第 51 。~ 51 了页 .
〔1 1〕 B u e h a n a n , R . F . a n d N . E . G ibb o n s : B e r g y 产 5 M a n u a l o f D e t e r m in a t i v e B a e t e r io l o g y : E i g ll t l , (、 d工一
t i o n
,
1 9 7 4
.
〔1 2 〕 C o l e n o , A . : S o m o A , p e e t s o f th e S e r o l o g y o f 卫吕四旦。卿 n a s s , la n a e e旦华里卫 . F . Sm i t h 1 0 7已 1 1。一
1 19
.
〔生3〕 D i x o 。 , G . R . : P s e o d o m o n a s s o la n a e e a r u n i ( h a e老e r i a l w 主l之) , 《 V e g。之a b l e C r o p D is o a 、 。 , 》 , P r 主n -
t e d i
n 工l o n g K o n g 1 9 8 1 , 3 38~ 3 4 0 .
〔1 4 〕 玉I a y w a r d . 人 la n C . : S o m e T e e h n i q u e s o f l , li p o r t a n e e i n rh e I d e n t i f ie a t i o n o f p s e , , d旦m q旦丝、 5 0 ! a -
n a e e a r u fn
.
1 9了6 , 2 3 7~ 卫4 2
.
〔1 5 〕 H a y w a r ( 1. 人l ; ,“ C . S y s t e o a t i e s a n d R e l a t io n s h i p o f 玲 e甘亘,贝旦旦旦冬_ _ _圣少鱼生世塑些皿 , ` 9 了6 ,
6一 2 1 、
期 林玉松 聚合草枯萎烂根 ( 青枯病 ) 病原细菌鉴定 3 9
〔1 2 〕 、 〔1 4 〕 、 《 P r o e e e d in g o f t h e F i r s t I n t e r n a t io n a l P la n t in g C o n f e r e n e e a n d W o r k
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〔1 5 〕 引 库
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o n e e a u s i n g s i m i l a r s y m p t o m s i n t o m a t o e s d e m o n s t r a t e d t h a t t h e s e t w o b a e
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.
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T h e t w o b a e t e r i a w e r e t h e n i n j e e t e d s e p a r t e l y a s a n t i g e n s i n t o r a b b i t s
,
a n d t w o a n t i s e r a w e r e o b t a i n e d
.
T h e a g g l u t i n a t i o n t e s t s w i t h t h e t w o b a e
-
t e r i a s h o w e d t h a t w h e n t h e i r r e s P e e t i v e a n t i s e r u n l w a s d i l u t e d 、 v i t l i s a l i n e
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t h e b a e t e r i u m i n t o r n a t o w a s f i r s t a b s o r b e d b y t h e b a e t e r i u m i n s ,州 P再夕艺瓦执
o f f i e i” a l e , w h e n t h e t w o b a e t e r i a w e r e t h e n a d d e d t o t h e i r t r e a t e d , o r i g i n a l
a n t i s e r u m s o l u t i o n
, n o f u r t h e r P r e e i p i t a t e w a s o b s e r v e d
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r h e s e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e p a t h o g e n i e b a e t e r i u m e a u s i n g w i l t a n d
r o o t r o t d i o e a s e i n s 夕脚Ph夕 tu 汁` o f厂i e犷刀 a l e i 、 p s e o d o m o 刀a ; s o l a n a c e a , 。 m E . F , S m i t h .