全 文 ：A S S A Y O F T H E K A R Y O T Y P E S C R O W N V E T C H
( C O R O N I L L A犷 A R I刀 L . )
W
a n S h u z h e n W a n g R u n ji
( T a f g u
,
S h a 月 x i a g r i c “ t “ r a l u n i v e r s ` t y )
T h e e r o w n v e t e h h a s b e e n i n t r o d u e e d i n t o C h i n a r e e e n t l y
.
I t 15 a f i n e l e g u nr e f o d d e l
-
f o r r u m i n a n t s ; I t 1 5 a l s o g o o d f o r w a t e r a n d 5 0 11 e o n s e r v a t i o n s
, a n d 1 5 u s e d a s a e o v e r
p l a n t
.
F u r t h e r m o r e i t e a n b e u s e d f o r g r e e n m a n u r e
, a n d a s a n o r n a m e n t a l p l a n t
.
F o r
s e v e r a l y e a r s w e h a v e e n g a g e d i n i n t r o d u e i n g
, e u l t i v a t i n g
, a n d a n im a l t r i a l s w i t h t h e
e r o w n v e t e h
.
B e s i d e s
,
w e h a v e s t u d i e d i t s e h r o m o s o m e s i n p r o v i s i o n o f t h e o r e t i e a l b a s i s
f o r f u r t h e r i n v e s t i g a t i o n a n d b r e e d i n g
.
F r o rn t h e t r i a l s w e e a m e t o t h e e o n e l u s i o n t h a t : 2
.
T h e h o m o l o g o u s e h r o m o s o m e s o f
t h e e r o w n v e t e h a r e : Z n 二 2 4 ( n = 1 2 ) , a m o n g w h i e h t h e r e a r e 5 p a i r s w i t h m e d i a n c e n t r o -
m e r e s
,
7 P a i r s w i t h s u b皿 e d i a n e e n t r o m e r e s , n o s a t e l l i t e h a s b e e n f o u n d . T h e r e a r e h o r n
l i k e p r o j e
e t i o n o
n b o t h s i d e s o f t h e t o p o f t h e s h o r t a r m o f t h e f i r s t p a i r e h r o m o s o m e
.
T h e y a r e e a s i l y i d e n t i f i e d
.
2
.
T h e k a : y o t y p e f o r m u l a o f t h e e r o w n v e t e h 1 5
:
K ( Z n ) 二
2 4 = A ” + Z B , , , , + B + Z C * + C “ ” + D , , + D ` , + Z E ` n , + E ·” . 3 . T h e e h r o m o s o m e s o f t ll e e r o w n v e t -
￡ h a r e t o o s m a l l t o b e m e a s u r e d b y a m i e r o m e t e r .
朝鲜聚合草生物碱毒性的研究 ’
1
. 总生物硷和聚合草素的提取 、 分离与鉴定
江 傲 雷祖玉
(北京 , 中国农业科学院畜牧研究所 )
丁伯 良二
(武功 , 西北农学院牧医系 )
聚合草又名紫草根 、 肥羊草 , 为紫草科
( B o r r a 夕i n a e e a e ) 聚合草属 ( S 夕m P hyt u 二 )
多年生草本丛生型莲座状植物 , 是一种适应
性广 、 产量高 、 富含蛋白质的青绿饲料 , 近
年来在我国推广种植很快 。 据 1 98。年初统计 ,
全国种植面积已达 40 余万亩 , 在东北 、 华北 、
西南等地 区成了猪的主要青饲料来源之一 。
据报导 , 聚合草含有多种毗咯双烷类生
物硷 ( P A S ) 。 如 F u r u y a [ ’ · 2 ]从 药 用 聚 合
草 ( 5 . 。了fl’ c’ an eI ) 中分离出聚合草素 ( S y -
m p h了 t i n e ) 、 聚合草醇硷 ( E e h i m i d i n e ) ,
M aH以 。等 〔“ 、 ` 〕从 药用聚合草中鉴定出毛果
天芥莱硷 ( L a s i o e a r p i n ) 、 天芥莱品 ( H e -
l i o s u P i n e )
、 刺凌草得硷 ( E e h i n a t i n e )
和绿花倒提壶硷 ( V i r i d i f l o r i n e ) ; U l u b e l e n
等 [。 、 “ ]从东方聚合草 ( s . o r i e n t a l a ) 中分离
出 S y m p h了 t i n e 、 E e h i m id i n e和 A n a d o l i n e ;
· 该研究蒙 中国医学科 学院药物所黄量教授指导 , 中
国农业科学院畜牧所刘金旭 、 张子仪教授 , 西北农 学院牧
医系卢得仁 、 段得资教授审阅全文 , 中国农业科学院畜牧
所何胜才 同志参加 部分实验准备工作 , 特此致谢 。
. 。 西北农学院 牧医系 7 8届研究生。
稿件 1 9 82年 1 0月 2 3日收到 。
53
U l u b e l e n 〔7 ]并从细节聚合草 ( s . t u b e r o s u 。 )
中 分 离 出 E e h i m i d sn e 和 A n a d o l i n e ;
M a H 、 : o t
6 1从粗糙聚合草 ( S . a s P e r u , ) 中
分离出阿茹明 ( A s P e r u m i n e ) 等 。
现 已查明 , 有些 P A S对家畜肝脏有毒 ,
可引起急性肝组织坏死或慢性实质性肝细胞
肥大 、 胆管增生 、 巨红细胞症 、 肝变硬 、 肝
肿瘤 I。 〕, 并可致癌 I` 。 〕 , 弓!起畸胎和遗传突
变 r ` , 1。
用聚合草饲喂畜禽时 , 尚未见急性中毒
报导 。 但其中所含 P A S是否对动物生长发育
有影响必须查清 , 以确保畜禽健康和畜产品
质量 。
目前 , 我国推广种植的主要是朝鲜聚合
草 , 它含有哪些 P A S , 迄今未见报导 。 我们
的研究 目的在于 由朝鲜聚合草提取总生物碱
和分离主要生物硷单体 , 进而观察其对动物
有无毒性 , 对生长发育有无影响 。
材料和方法
朝鲜聚合草茎叶 : 1 98 0年 7 一 8 月采自
中国农业科学院畜牧研究所试验 猪 场 饲 料
地 。
朝鲜聚合草根 : 1 9 8 0年 9 月采自北京市
畜牧研究所饲料研究室试验地和吉林省公主
岭 。
柱层层析用硅胶系上海五 四农场化学试
剂厂生产 , 过筛后选取粒度 1 80 一 20 。目部分
或细于 20 。目的部分于 1 05 ℃下活化二小时备
用 。 洗脱剂为氯仿 一甲醇 。
薄层层析用硅胶系上海萤光化学厂生产
的硅胶 G , 以适量蒸馏水调匀涂布 , 在 1 10 ℃
下活化半小时备用 。 展开剂为氯仿 一甲醇 一氨
水 ( 6 0 : 1 0 : 1 ) , 显色剂为改良碘化秘钾
试剂 。
制备薄层层析用硅胶 、 展开剂和显色剂
均同薄层层析 。
核磁共振谱用 B r u e k e r W H一 9 0脉冲
1傅立叶变换核磁共振波谱仪测定 , 90 M H ,
{以 C D C 1
3为溶剂 , T M S为内标 。
红外光谱用 S P一 2 0 红外 光谱仪测定 ,
K B r压片 。
质谱用 J M S一 D 30 。质谱仪测定 , 电子能
量 70e v , 电离方式为电子流轰击 和 化 学 电
离 。
实验结果
一 总生物硷的提取
取在 60 ℃下鼓风干燥的朝鲜聚合草茎叶
或根的粗粉 , 用甲醇索氏液提取 36 小时 , 减
压浓缩 , 用 ZN硫酸溶解浓缩物 , 过滤后将不
溶部分再用 ZN硫酸捏溶数次 , 再过滤后合并
滤液 , 加适量锌粉 , 室温下搅拌 5 小时后 过
滤 , 向滤液中加氨 水 调夕H至 9 . 6一 9 . 8 , 用
氯仿提取 5 一 6 次 , 合并提取液 , 减压浓缩
得黄色膏状物 (获得率 : 聚合草茎叶 0 . 0 4% ,
根 0 . 19 % ) , 用改良碘化秘钾 、 碘化汞钾和
硅钨酸等生物硷显色剂检查均呈 生 物 硷 反
应 , 故为总生物硷 。 由根或茎叶提取的总生
物硷用薄层检查 时 在 R f值为 0 . 0 7 、 。 . 1 1 、
0
.
2 2
、
0
.
5 1
、
0
.
5 5
、
0
.
6 0等处均出现桔红色
斑点 , 并 以R f值为。 . 6的斑点面积 最大 , 颜
色最浓 。 故该点即为朝鲜聚合草的主要生物
硷组分 , 其薄层图谱见图 1 。
二 . 主要生物硷单状的分离
1
. 制备薄层层析 用硅胶 G 湿法铺板 ,
面积 2 4 x 2 2 e 二 2 , 厚度 i m m ,在 1 0 5 ℃下活化
半小时 , 将适量根 提 总 生 物 硷 溶 于 少 量
C H C I
。 中 ,点样 ,用氯仿一甲醇一氨水 (6 归
1 0
: i ) 展开 , 展程 2 2 e n i , 以改良碘化秘钾
显色定位 , 用吸集器收集 R f值 为。 . 60 的 谱
带 , 甲醇洗脱数次 , 浓缩燕干 , 将残渣重复
上述点样展开 , 再收集 R f值为。 . 60 的谱带 ,
洗脱 , 蒸干 , 得淡黄色油状物 , 用 N : 保护 。
2
。 柱层析 用根提总生物硷 ( 3 9) 以
层析硅胶 ( 6 0 0 9) 进行柱层析 , 湿法装柱 ,
依次用氯仿 、 1一 6 % 甲醇一氯仿进行梯度
洗脱 , 每份收集 50 m l , 用薄层层析检查 , 合
并 R f值相同部分 , 分别减压浓缩得淡黄色油
状物 , 用 N Z保护 。 各组
.心QO
卜..lLrJ.r`nù.
:
nù -几仙
份出现在 以下洗脱液馏
分中 : 1 号硷 : R f =
0
.
7 0 ,第 1 2 6一 1 3 5分 ; 2
号硷 : R f 二 0 . 6 0 , 第 1 5 7
一 2 0 5分 ; 3 号硷 : R f =
0
.
5 5 , 第 2 6 1一 2 9 3分 ;
4 号硷 : R f 二 0 . 51 , 第
3 6 2~ 4 6 1分 。 洗脱梯度
为 : 第 1 一 24 分 ,氯仿 ;
第 2 5~ 吐4分 , i % 甲醇~
氯仿 ; 第 4 5一 6 4分 , 2 %
甲醇一氯仿 ; 第 6 5一 8 4
分 , 3 % 甲醇一氯仿 ;第
5 5一 1 1 4分 , 4 % 甲醇一
氯仿 ; 第 1 2 5一 1 3 4分 ,
5 % 甲醇 ~ 氯仿 , 第
1 3 5~ 4 6 0分 , 6 % 甲醇
图 3 。 2 号硷的核磁 共振谱
红外光谱
(经基 ) , 1 7 2 8
二 卜 0 (双键 )
。
I R
。釜誉二(一 ) : 3` 7 0
, 2 7 1 5 , 1 2 60
,
1 1 6 0 (醋基 ) ,
其图谱见图 2 。
卜 p 核磁共振光谱乙值 (9
o M H
Z
)
(3 H
, 双重峰 ,
/ C H
\ C H
抓仿 : 甲醉 : 水 《 60 :1 。 : 1 )
1 6 6 0
0
。
8 4
0
。
9 4
1
。
2 0
1
。
8 0
1
。
8 3
J = 6
.
o H
Z , 一 C H
(3 H
, 双重峰
图 1 . 鲜朝聚合草
总生物硷薄层图谱
J = 6
.
o H
: , 一 C H / C H
\ C H
3
)
~ 氯仿 。 2 号硷得率为 19 % 。 ( 3 H
, 双重峰
H
三 。 主要生物硷单体的鉴定
上述用制备薄层或柱层析分 得 的 2 号
硷 , 用薄层层析展开 , 改良碘化秘钾喷雾显
色均呈桔红色单点 。
!
J = 6
.
o H
Z , 一C 一 C H 3 )
1
O H
( 3 H
, 单峰 ,
C H
5
C O
-
\ /
C = C )
,
/
C H
( 3 H
,
C O
、尸
\/
C H
双重峰 ,
C H
3
图 2 . 2 号硷的红 外光谱
J = 6
.
o H
: ,
C = C
/
C H
1
.
8 7一 3 . 7 7 ( 7 H ,双重峰 ) ,
C H
。
9 7 ( I H
, 4
5 5
重 峰 ,
H
= 6
.
0 H
Z
1一 C一 C H 3 ) , 4 . 3 7 ( IH ,
ol
H
宽峰 , C 。一 H ) , 4 . 73
( Z H宽峰 , C 。一H : ) ,
5
.
38 ( I H
,
2 个双重峰 ,
J = 6
.
o H
Z ,
J = 2
.
o H
Z ,
C
7一 1 1) , 5 . 5 5 ( I H ,
宽峰 , C : 一 H ) , 6 . 78
( z H
: , 2 个 4 重峰 ,
J = 6
.
0H
2 ,
J = 2
.
0H
2 ,
C H ,
C = )
。
/
H
图谱见图 3 。
质谱
电子 流 轰 击 源 ,
m / e 2 2 0
, 1 3 6 , 1 2 1 ,
1 2 0
,
1 1 8 , 1 0 3 , 9 4 , 9 3 ,
8 3 , 5 5 , 图谱见图 4 。
趣升
舰沦
图 4 . 2 号硷的质谱 ( 电子流轰击 源 )
创
价
!
}
, ,
1. 1 }
,{
}
}
. .
.
_ _ `
图 5 . 2 号硷的质语 (化学电离源 )
化学电离源出现似分子离子峰 (M 十 1 ) `
m /
e = 3 5 2 , M和 s y m p h y t i n e ( C Z 。 H 。 , O 。
N ) 的分子量相符 。 图谱见图 5 。
由以上各种光谱数据和薄层数据 , 故认
为上述分离的 2 号硷即聚合草素 ( S y m p h y -
t i n e )
。 其结构式 t “ 1为 :
C H C H
H|
/
.
C H C H C H
C = C O一 C O一 C一C一 C H
\ H
C 一 O 。 : 9 0卜
/ } 0 : /
o’ )一一卞一一 ]尹 1。 . N I_。
\ / \ /
“
o执由
\/
5 3
讨 论 硷成分的研究迄今未见报导 。 我们首次从它
1
. 本实验所采用的样品为我国广泛种植 分离到毗咯双烷类生物硷单体— 聚合草素的朝鲜聚合草 ( S . P e r e s r i n u 。 ) , 其 生 物 ( S y o p h y t` , e ) 犷
旧.
2
. 质谱分析 中F ur u y a 等 t ` 、 “ J 仅报导了
聚合草素的质谱碎片离子峰 , 但其似分子离
子峰迄今未见报导 。 我们通过化学离子质谱
首 次测得聚合草素的似分子离子峰 (M + 1 ) +
的 m e/ = 3 8 2 , 从而直接推算出聚合草 素 的
分子量为 3 8 1 。
3
. 我们除用甲醇索氏提取总生物硷外 ,
还用甲醇进行了聚合草根粉室温渗孺提取 ,
在这种情况下所得总生物硷为淡黄透明膏状
物 , 得率为 0 . 10 % 。
4
.层析分离制备的淡黄聚合 草 素 需 用
N
Z保护 , 若在室温放置 , 则会逐渐变 为 深
棕色油状物 , R f值降低 。 若将 此深棕色油状
物再用 Z n 粉还原 ,仍能变为淡黄色油状物 ,
其 R了值升高为 0 . 60 , 故深棕色油状 物系聚合
草素的氧化物 。
5
. 实验所得总生物硷通过柱层析 甲醇一
氯仿梯度洗脱 , 除分离得 R f = 0 . 60 的 聚 合
草素外 , 还得到 R f值 分 别 为 0 . 70 , 0 . 5 和
。 . 51 等三种生物硷 ,其结构有待进一步研究 。
a n d t r i t e r P o n o i d s o f S y m p h y t u m o f f i e i n a le
.
Ph y t o e h
-
e m i s t r y
,
1 0
:
2 2 17
.
[ 3 〕 M 品 H 石 K o 14 . B . , 1 9 6 9 : H e e 刀 e 江 o B a a l e a 几 K a -
刀 o M a o s n e K o T o p 位 x B班 辽 o n p 。 及 a S y m p h v t u m L .
P E C
.
5 : 50 5
.
[ 遵〕 M a n 五 K o H . B . , 19 20 : C o 及 e p狱 a H H e a 月 K a 月 。 工,八 o a
b
.
S y m p h y t u m o f f i e i n a l e L
.
b 3 a 6 o e , 。 o T o o 。 中a 3二
p a 3 o R T x l只 p a e m e n u 只 P A C T
.
P E C
.
6
: 4 0 0
.
[ 5 3 U l
u b e l e n
,
A
.
a n d S
.
D o g a n e a
, 19 7 0
:
A n a d o li n 。 ,
a n e w s e n e i o a l k a l o i d f r o m s y m p h v tu m o r i e n t a l e
.
T e
-
t r a h e d r o n
〔 6 〕 U l u b e le n ,
L e t t e r s
, 3 0
: 2 5 8 3
。
A
。
a n d o th
e r e o n s t i t u e n t s
o e h e m i s t r y
, 1 0
〔 7 〕 U lu b e l e n , A .
a n d o t h e r e o m p o u n d
s
a n d 5
.
D o g a n e a
, 1 0 7 1 : A 工k a ! o id a
o f S y m p h y t
u m o r i e n t a l e
,
P il y t
-
4 4 1
a n
d F
.
o o a l
,
y t o e h e nt i s t r y
[ 8 二 M a H 石 K o H
。
1 6
o f S y m P h y t u m
: 4 99
1 0 7 7
:
A lk a l o id 、
t u b e r o s u m
.
P h
一
l
B
. , 19 2 0
p a e T e H u 只 S y m P h y t u m a s P e r u m
e几 0 e T P o e n n 只 . 狱 , o 6 u 之
H
o B H 盆 a 几 K a 卫 o u双 n 3
L e p e e h一 A e u e p y M u n u
X U妞
〔 。 习 B u z l L . B . , C . C . J . C u lv e n o r a n d
P y r r o l i之i d i n e A l k a l o i d s , W i le y ,
40
: 2 5 1 9
。
A
.
T
.
D止 k . T h e
N e w Y o r k
。
口 . 〔 1 0〕
1 9 6 8
。
A ll e n J
.
R
. ,
I
.
C
.
H
s u a n d G
.
A
.
C
a r t e n s , 19 7 5
:
C a n e e r R e s
. , 35 : 9 9 7
今 考 文 献
〔 i 〕 F u r 以y a , T . a n d K
i t u e n t o f e r u d e d r u g s
.
A r a k i
, 1 9 6 8
.
A l k a l o i d s
S t
u d i e s o n e o n s t
-
I o f S y m p h y t u m
o f f ie in a l
e L i n n
.
C h
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.
P h a r m
.
B u ll
. , 1 6 ( 1 2 )
: 2 5 22
.
〔 2 〕 F u r u y a , T . a n d M . H i k i e h i , z , 7 2 : A lk a lo i d s
〔 1 1〕 C l a r k , A . M . i 9 76 : M u t a t i o n R e s . , 3 2 : 5 6 1
〔12 〕 马炳宣 , 19 8 0 : 对西北农学院引种聚合草属
s( y m p h yt u m
.
L
.
) 几个种的鉴定 。 《聚合草》 , 第
12期。 2 5 3页 。
〔 1 3〕 李振 山等 , 19 81 : 聚合 草的细胞逮传学研 究一朝鲜
聚合 草的染 色体数 目。 青饲料资料汇编 , 第 1 期 , 2 9页 。
S T U D I E S O N T O X I C IT Y O F A L K A L O I D S IN
S y M尸H y T U M 尸E R E G R I N U M L E D E D
1
.
T H E E X T R A C T IO N
,
I S O L A T IO N A N D I D E N T I F I C A T IO N O F C R U D E
A L K A L O 工D S A N D S Y M P H Y T I N E
J
.
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.
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.
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( I n s t` r o t e O f A ” `爪 a l S c ￡e o e e o f C人i o e s e ( D e户a r r m e o t O f A ” f , a l H u s b a ” d r夕
A e a d
a川 夕 o f A夕 r ` e “ l t u r a l S c i e n e e s ) a o d 犷 e t e r i o a r夕 M e d` e i o e o f N O r t h
附 e : r C o l l e夕 e o f A口 r` c o l t u r e )
T h e p y r o l i z i d i n e a l k a l o i d
, s y m p h y t i n e h a s f i r s t b e e n i s o l a t e d f r o m t h e d r i e d
。 f s 夕优P h夕 t“ 巾 P e 之。 夕r ￡n u 协 L e d e d b y o u r l a b o r a t o r y a n d t h e 5 im i l a r m o l e e u l e 一 i n n
( M + 1 )
+
( m /
e = 3 5 2 ) o f s y m p h y t i n e h a s f i r s t b e e n d e t e r m i n e d b y I O n 1l l a S S
目. 山
t r o s e a p 了 . C t h e r t h r e e p y r r o l i z i d i n e a l k a l o i d s h a v e b e e n i s o l a t e d
e t h e i r s t r u e t u r e s w i l l b e s t u d i e d f u r t h e r
.
e h e m i e a l
b e s i d e s s y m p h y t i n e
,
5 7