全 文 ：第 24卷　第 3期 内蒙古民族大学学报(自然科学版) Vol.24　No.3
2009年 5月 JournalofInnerMongoliaUniversityforNationalities May2009
地梢瓜叶中总黄酮的提取及含量测定＊
李　睿 ,张　力 ,包玉敏 ,刘　妍
(内蒙古民族大学化学学院 ,内蒙古通辽　028043)
〔摘　要〕本实验采用超声波乙醇浸提法从地梢瓜叶中提取总黄酮 ,以单因素实验分析了提取剂浓度 ,提取时
间及料液比 3个因素对得率的影响 ,得到超声法最佳提取工艺 , 即乙醇 80%, 提取时间 30 min,料液比为(g/
mL)1∶30.在最佳提取工艺下 ,地梢瓜叶中总黄酮含量为 2.116 mg/g, 平均回收率为 99.12%, RSD=0.94%
(n=4).此结果为地梢瓜药效功能的进一步研究和资源开发利用提供了科学依据.
〔关键词〕地梢瓜叶;黄酮;超声提取;分光光度法
〔中图分类号〕TQ028　　〔文献标识码〕A　　〔文章编号〕1671-0185(2009)03-0272-03
ExtractionandDeterminationofTotal
FlavoneinLeafofSemenCynanchi
LIRui, ZHANGLi, BAOYu-Min, LIUYan
(ColegeofChemistry, InnerMongoliaUniversityforNationalities, Tongliao028043, China)
Abstract:ThisexperimentadoptsultrasonicwaveaidedextractionfromleafofSemenCynanchitoimmerseethanol.
Threefactorsincludingconcentrationofsolvent, timeandratioofsolidtoliquidwereinvestigatedbyusingsinglefac-
torexperiment.Theoptimalprocessconditionswereobtained:ethanolconcentration80%, ratioofsolidtoliquid1∶
30, andextractingduration30min.TheflavonoidinleafofSemenCynanchiwasdeterminedbyspectrophotometryas
2.116mg/gwithaveragerecoveryof99.12% andtherelativestandardderiationof0.94% (n=4), whichoffers
scientificevidenceforfurtherstudiesofmedicinaleficiencyandcomprehensiveutilizationofSemenCynanchi.
Keywords:LeafofSemenCynanchi;Flavonoid;Ultrasonicextraction;Spectrophotometry
地梢瓜(SemenCynanchi)别名地梢花 ,羊不奶棵 , 小丝瓜 ,浮瓢棵 , 属于萝摩种植物细叶白前的全草及果实 , 多年生草本
植物.分布于东北及河南 、河北 、陕西 、山西 、山东 、安徽 、江苏等地.地梢瓜具有补肺气 、清热降火 、生津止渴 、消炎止痛的功
效 , 提取物具有某些抗病毒作用.地梢瓜资源较为丰富 ,适应性较强 , 为其开发利用提供了一定的物质基础.对于地梢瓜中
总黄酮提取的相关研究 ,目前报道尚少 , 本文利用单因素实验对影响地梢瓜叶中总黄酮提取率的主要因素进行了研究.在
最佳提取工艺条件下 ,对地梢瓜叶中总黄酮的含量进行测定 , 为其在医药 、食品等领域的应用提供了理论依据 〔1〕.
1　实验部分
1.1　仪器 、试剂与实验材料　仪器:T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);FZ102型微型植
物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);KQ-250B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);FA2104N电子天平(上
海民桥精密科学仪器有限公司);KQ-B型玻璃仪器烘干器(河南省巩义市英峪予华仪器厂).
试剂:乙醇等试剂均为分析纯(A.R.);实验用水为二次蒸馏水.供试材料:芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 , 批
号:100080-200306);地梢瓜叶(内蒙古通辽本地产新鲜地梢瓜 ,经清洗 、干燥 、粉碎得地梢瓜叶粉末).
1.2　实验方法
1.2.1　标准曲线的绘制　标准品溶液的制备:准确称取芦丁标准品 25.00 mg于小烧杯中 , 加入少量 80%乙醇 , 超声溶解 ,
定容至 100 mL容量瓶中 , 摇匀 ,得芦丁标准溶液 ,浓度为 0.25 mg/mL.
＊收稿日期:2008-02-18
项目基金:内蒙古自治区自然科学基金资助项目(200607010209)
作者简介:李睿(1983-),女 ,内蒙古土默特左旗人,在读硕士研究生 ,主要从事天然产物研究.
DOI :10.14045/j.cnki.15-1220.2009.03.005
第 3期 李睿等:地梢瓜叶中总黄酮的提取及含量测定
标准曲线的绘制:准确称取芦丁标准品溶液 0.00、0.40、0.80、 1.20、1.60、 2.00、2.40 mL分别置于 10 mL的比色管中 ,
均用水稀释至 2.40mL,各加 5%亚硝酸钠 0.40 mL,混匀 ,放置 6min,加 10%硝酸铝 0.40mL混匀 ,放置 6min,加 4.30%
氢氧化钠 4.00 mL最后用水稀释至刻度 ,混匀 ,放置 15 min.以试剂空白为参比 ,在 506 nm处测定吸光度值(A), 以 A为纵
坐标 , 浓度 C为横坐标绘制标准曲线 〔2〕 ,得回归方程:A= -0.01587 +1.0434C(mg/10mL), R=0.9993.
1.2.2　提取方法 〔2〕　准确称取 1.0000 g地梢瓜粉置于 100 mL锥形瓶中 , 加入一定浓度的乙醇适量 , 浸泡 20 h, 超声提
取 , 过滤 ,洗涤 , 滤液用该浓度的乙醇定容于 50 mL容量瓶 ,得到黄酮类化合物的提取液 , 待测.
1.2.3　测定方法　精确量取提取液适量于 10mL比色管中 ,加水至 2.40 mL, 加 5%亚硝酸钠 0.40 mL,混匀 , 放置 6min,
加 10%硝酸铝 0.40mL, 混匀 ,放置 6min, 加 4.30%氢氧化钠 4.00 mL, 最后用水稀释至刻度 ,混匀 , 放置 15min.以试剂空
白为参比 , 在 506nm处测定吸光度值(A), 带入回归方程 ,计算提取液中黄酮类化合物的含量.
1.2.4　回收率的测定方法　精确量取提取液适量于 10 mL比色管中 , 加芦丁标准液 0.50 mL, 按 1.2.3步骤操作 ,得加入
芦丁标准液的样品的吸光度值 ,根据下列公式计算回收率.
回收率 =样品加标样测得总黄酮含量 -样品中总黄酮的含量芦丁加入量 ×100%
2　结果与讨论
2.1　 最佳提取条件的选择 〔3〕
2.1.1　乙醇浓度对超声法提取效果的影响　准确称取 1.0000g地梢瓜粉末 4份 ,分别用不同浓度的乙醇溶液 30 mL超
声提取 60min,测定提取液的吸光度值(A), 计算提取液中黄酮的得率.
表 1　乙醇浓度对能率的影响
Table1　Effectoftheethanolconcentrationonextractionrate
实验序号 1 2 3 4
乙醇浓度(%) 20% 40% 60% 80%
吸光度值(A) 0.244 0.470 0.301 0.472
总黄酮得率(%) 12.45 23.28 15.18 23.38
由表 1可知 , 地梢瓜叶中总黄酮类物质随乙醇浓度的增大 , 其得率有所提高 , 当乙醇浓度为 80% 时 , 总黄酮类物质的
得率最高.故当乙醇浓度为 80%时提取效果最好.
2.1.2　提取时间对超声法提取效果的影响　准确称取 1.0000g地梢瓜叶粉末 4份 ,分别用 80%的乙醇溶液 30mL浸泡 ,
选取不同的超声提取时间测定提取液的吸光度值.由表 2可知 , 在其他条件相同的情况下 ,提取时间为 30min时 , 地梢瓜叶
中总黄酮类物质的得率最高 ,故以提取时间 30 min为宜.
表 2　提取时间对得率的影响
Table2　 Effectofextractingdurationonextractionrate
实验序号 1 2 3 4
提取时间(min) 30 40 50 60
吸光度值(A) 0.510 0.478 0.465 0.463
总黄酮得率(%) 25.20 23.67 23.04 22.95
2.1.3　料液比对超声法提取效果的影响　准确称取 1.0000g地梢瓜叶粉末 4份 ,分别用 80%的乙醇溶液 , 以不同料液比
(g/mL)超声提取 30 min, 测定提取液的吸光度值(A).由表 3可知 , 地梢瓜叶中总黄酮类物质的得率在料液比值为 (g/
mL)1∶30时最高 , 故以料液比为 (g/mL)1∶30为宜.
表 3　料液比对得率的影响
Table3　 Effectofrateofsolidtoliquidonextractionrate
实验序号 1 2 3 4
料 液比(g/mL) 1∶10 1∶20 1∶30 1∶40
吸光度值(A) 0.4038 0.3975 0.4265 0.4160
总黄酮得率(%) 20.11 19.81 21.20 20.70
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内　蒙　古　民　族　大　学　学　报 2009年
由以上单因素实验结果:表 1、表 2、表 3可以看出 , 用 80%的乙醇在料液比 (g/mL)1∶30, 提取时间为 30 min的条件
下 , 地梢瓜叶中总黄酮的提取效果最佳.
2.2　黄酮含量测定 〔4〕　准确称取的地梢瓜叶粉末 1.0000 g, 在最佳提取条件下提取 , 得待测液.按 1.2.3项测定方法操
作 , 计算提取液中总黄酮的含量.结果见表 4.
表 4　总黄酮含量的测定结果(n=4)
Table4　 Thedeterminationofthetotalflavonoidcontent
序号 样品加入量(mL)
加入量
(mg)
测得值
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1 1.00 0.438 2.175
2 1.00 0.423 2.103
3 1.00 0.422 2.098
4 1.00 0.420 2.089
2.116 0.94
2.3　回收率的测定　分别精确量取地梢瓜叶的待测溶液 1.00mL8份 ,按 1.2.4项测定方法操作 , 测定各吸光度值(A),
计算样品的回收率.结果见表 5.
表 5　回收率的测定结果(n=4)
Table5　Theresultsofthetestaboutrecoveryrate
序号 样品量(mg)
加入量
(mg)
测得值
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1 0.3976 0.125 0.5212 98.88
2 0.3947 0.125 0.5203 100.48
3 0.3938 0.125 0.5165 98.16
4 0.3899 0.125 0.5136 98.96
99.12
3　结论
黄酮类化合物具有众多生理功能和药用价值 ,其主要作用有活血化淤 , 保肝抗炎 , 抗菌 , 抗病毒 ,抗辐射及抗肿瘤及延
缓衰老 , 增强心血管功能等生理活性 〔5〕.因此 , 地梢瓜叶中总黄酮的有效提取及含量测定 , 是了解其药理作用和综合开发利
用的重要基础工作.试验结果表明 ,总黄酮提取的最佳条件是:用 80%乙醇超声波提取 30 min, 料液比为 (g/mL)1∶30.
地梢瓜叶中总黄酮的含量为 2.116 mg/g,平均回收率为 99.12%, RSD=0.94%(n=4).此结果为地梢瓜叶总黄酮的提取方
法 , 药效功能的进一步研究及资源开发利用提供科学依据.
参　考　文　献
〔1〕张德权 , 台建祥 ,付勤 ,等.生物类黄酮的研究及应用概况〔J〕.食品与发酵工业 , 1999, 25(6):25.
〔2〕房芳 , 张广强 ,谢新年.用分光光度法进行黄酮类化合物含量测定的研究〔J〕.河南中医药学刊 , 1997, 12(2):17-
19.
〔3〕黄俊盛 , 任乃林 ,郑楚珊.桑叶中总黄酮类化合物提取工艺的研究〔J〕.食品研究与开发 , 2005, (2):82-84.
〔4〕杨小凤 , 仇佩虹 ,叶筱琴.马蹄金中黄酮成分分析〔J〕.光谱实验室 , 2005, 22(6):1211-1215.
〔5〕高锦明 , 廖蓉苏 ,高黎明 ,等.植物化学〔M〕.北京:科学出版社 , 2003.21.
〔责任编辑　郑　瑛〕
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