全 文 ：第 27卷第 9期
2 01 0年 9月
精 细 化 工
FINECHEMICALS
Vol.27, No.9
Sept.2 0 1 0
中药现代化技术
收稿日期:2010-06-07;定用日期:2010-07-06
基金项目:海南省重点科技计划项目(06202);2006年海口市重点科技计划项目
作者简介:刘平怀(1967-),男 ,湖南永兴人 ,海南大学教授 、药学研究员 、制药高级工程师。
联系人:刘洋洋(1985-),男 ,江西新干人 ,研究方向:生物制药工程 ,电话:13698970323, E-mail:yyliu.ac@gmail.com。
海滩植物厚藤(IpomoeaPes-caprae)抗氧化活性研究
刘平怀 ,陈德力 ,汪春牛 ,许琼情 ,刘洋洋＊
(海南大学 材料与化工学院 海南优势资源化工材料应用技术教育部重点实验室 ,海南 海口　570228)
摘要:采用加速溶剂萃取技术(ASE)快速制备厚藤活性提取物 ,并以 DPPH法对厚藤茎叶不同溶剂提取物抗氧
化活性进行评价。抗坏血酸抗氧化能力 >乙酸乙酯提取物抗氧化能力 >乙醇提取物抗氧化能力 >甲醇提取物
抗氧化能力 >石油醚提取物抗氧化能力 ,其 IC50值分别为 0.203 4、0.836 2、 0.868 8、 1.867 5、6.628 3 g/L。结果
显示 ,厚藤茎叶提取物具有一定的抗氧化活性 , 且以乙酸乙酯为提取溶剂时 , 效果最佳。
关键词:厚藤;加速溶剂萃取;DPPH;抗氧化;中药现代化技术
中图分类号:Q949.777.1　　文献标识码:A　　文章编号:1003-5214(2010)09-0866-04
StudyonAntioxidantActivityofExtractsfrom
IpomeaPes-caprae(Linn.)Sweet
LIUPing-huai, CHENDe-li, WANGChun-niu, XUQiong-qing, LIUYang-yang＊
(KeyLaboratoryofApplicationTechnologyofHainanSuperiorResourcesChemicalMaterials, MinistryofEducation, Col-
legeofMaterialsandChemicalEngineering, HainanUniversity, Haikou570228, Hainan, China)
Abstract:TheIpomeaPes-caprae(Linn.)sweetleaveextractswereextractedwithdiferentpolarsol-
ventsbyacceleratedsolventextraction(ASE).Theantioxidantactivityofdiferentextractswasevalua-
tedbyDPPHassay.Theantioxidantactivityofascorbicacid>ethylacetateextract>ethanolextract>
methanolextract>petroleumetherextracts, itsIC50 valueswere0.203 4, 0.836 2, 0.868 8, 1.867 5
and6.628 3 g/L.ResultsshowedthattheIpomeaPes-caprae(Linn.)sweetleaveextractshadanan-
tioxidantactivity, andethylacetateextractwasthehighestinalextracts.
Keywords:IpomeaPes-caprae(Linn.)sweetleaves;acceleratedsolventextraction;DPPH;antioxi-
dant;modernizationtechnologyoftraditionalChinesemedicines
Foundationitems:SupportedbyagrantfromtheKeyProgramofScienceandTechniqueProjectof
HainanProvinceofChina(06202)andKeyProgramofScienceandTechniqueProjectin2006 of
HaikouCity
　　厚藤 〔Ipomeapes-caprae(Linn.)sweet〕为旋花
科(Convolvulaeeae)番薯属多年生草本植物 [ 1] ,广泛
分布于热带和亚热带沿海滩涂 ,可作海滩固沙或覆
盖植物 。具有祛风除湿 、拔毒消肿之效 ,民间用于治
疗风湿性腰腿疼 、腰肌劳损等症 [ 1-4] 。现已从中分
离得到的化合物近 30个 ,主要为黄酮 、三萜 、甾醇 、
有机酸 、糖苷类物质 [ 1, 5-7] ,但有关其生物活性研究
报道较少 。本文对厚藤提取物的抗氧化活性进行了
研究 ,具有一定的理论和应用价值 。
1　实验部分
1.1　实验用植物
实验用厚藤于 2009年 6月 ,采自海南省万宁市
日月湾海滩 ,经海南大学材料与化工学院生物工程
DOI :10.13550/j.jxhg.2010.09.025
系刘平怀教授鉴定为 Ipomeapes-caprae(Linn.)
sweet的茎叶 。采后自然阴干 ,再置 50 ℃烘箱中烘
干 ,粉碎 ,放置暗处贮存备用。
1.2　主要试剂与仪器
2, 2-二苯基 -1-苦基苯肼(DPPH, AJohnsonMat-
theyCompany),抗坏血酸(广州化学试剂厂 , AR),
石油醚 、乙酸乙酯 、乙醇 、甲醇 、二甲基亚砜均为
AR。
ASE150加速溶剂萃取仪(美国 Dionex公司)、
xMARK微孔板分光光度计(美国 BIO-RAD公司)、
RE-52AA旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂)、
BT224S电子天平(德国 Sartorious公司)、移液器(20
μL、200μL, DRAGON-MED)。
1.3　方法
1.3.1　试样的制备
1.3.1.1　ASE法提取活性成分 [ 8-10]
取 50g粉碎的厚藤茎叶 ,装入 100 mL不锈钢
萃取池中 ,萃取池底部提前加装纤维素过滤膜 。置
于 ASE萃取仪中 ,逐次使用溶剂极性由小到大的石
油醚 、乙酸乙酯 、乙醇 、甲醇为萃取剂 ,设定 ASE提
取方法参数(温度 120℃、静态提取时间 5min、循环
次数 2次 、供液压力为 10 MPa、以占池体积 60%的
溶剂冲洗 、N2吹扫时间 120 s),启动加速溶剂萃取
仪 ,提取完成后 ,提取液减压浓缩至干 ,待用。
1.3.1.2　不同质量浓度试样的配制
用电子天平准确称取 50 mg干燥提取物溶于 5
mL二甲基亚砜中 ,制成质量浓度为 10 g/L的母液
试样 ,再分别稀释成 8、5、1、0.5、0.1 g/L。
1.3.1.3　抗坏血酸溶液的配制
准确称取 100 mg抗坏血酸 ,用蒸馏水溶解并定
容至 100 mL容量瓶中 ,即得 1 g/L抗坏血酸的母
液 ,再稀释配制质量浓度分别为 0.6、 0.55、 0.5、
0.45、0.4、0.35、0.3、0.25、0.2、0.15、0.1 g/L的样
品溶液 。
1.3.2　DPPH贮存液的制备
准确称取 25.8 mgDPPH自由基溶于少量体积
分数为 95%的乙醇中 ,最后定容至 10 mL(即 6.5×
10
-3 mol/L)。于 4 ℃冰箱中存放 ,用时将储液用体
积分数 95%的乙醇稀释至 6.5×10-4 mol/L。
1.3.3　清除 DPPH自由基能力的测定
参照 Larrauri[ 11] , Yokozawa[ 12]和陈丛瑾等 [ 13]的
方法 ,进行改进优化。在 96孔板中按表 1加样 ,分
别在 517 nm处测定 A0 , Ai, Aj在 20min内每 30 s的
吸光度 ,每一个试样做 3个平行样 ,取平均值。按式
(1)计算样品对自由基的清除率:
　　　　清除率 /%=(1-Ai-AjA0 )×100 (1)
并采用药物代谢动力学模型拟合 ,计算不同样品在
对 DPPH清除率为 50%时的质量浓度(即 IC50),对
不同溶剂提取的样品抗氧化能力进行评价 ,即 IC50
越小 ,抗氧化能力越强。
表 1　DPPH加样表
Table1　Parametersofinjectionsamples
加样参数
A0 100μL6.5×10-4mol/LDPPH溶液 +20μL试样的溶剂(DMSO)
Ai 100μL6.5×10-4mol/LDPPH溶液 +20μL试样
Aj 100μLDPPH溶液的溶剂(体积分数 95%乙醇)+20μL试样
2　结果与分析
2.1　不同极性溶剂提取物的抗氧化活性比较
在同一质量浓度下 ,比较石油醚 、乙酸乙酯 、乙
醇 、甲醇 4种极性由小到大的溶剂对厚藤茎叶提取
物清除 DPPH的能力 ,见图 1。
试样质量浓度:a— 10g/L;b— 5g/L;c— 1g/L
图 1　不同溶剂的厚藤茎叶提取物对 DPPH清除率的比较
Fig.1　ComparisonofDPPHscavengingrateswithdiferentsol-
ventextractsfrom IpomeaPes-caprae(Linn.)sweet
leaves
结果表明 ,不同溶剂提取的厚藤茎叶都对 DPPH
有很强的清除作用。由图 1可知 ,在样品为同一质量
·867·　第 9期 刘平怀 ,等:海滩植物厚藤(IpomoeaPes-caprae)抗氧化活性研究
浓度时 ,乙酸乙酯提取物对 DPPH的清除率 >乙醇提
取物对 DPPH的清除率 >甲醇提取物对 DPPH的清
除率 >石油醚提取物对 DPPH的清除率。
研究发现 ,在 20min内 ,抗氧化反应基本达到平
衡。因此 ,平衡时的清除率可以作为此样品对自由基
的最终清除率 ,即 20min可以作为最终反应时间。
2.2　不同质量浓度提取物样品溶液抗氧化活性比较
选择高 、中 、低 3种质量浓度(10、5和 1g/L)的
样品 ,比较同一溶剂提取物 ,在不同质量浓度时对自
由基 DPPH清除率的影响 ,结果见图 2。
a—MSO提取物;b—EtOAc提取物;c—EtOH提取物;d—MeOH提取物
图 2　不同质量浓度的同一溶剂厚藤茎叶提取物对 DPPH
清除率的比较
Fig.2　DifferentconcentrationsofthesamesolventofIpomea
Pes-caprae(Linn.)sweetleavesextractsonDPPH
scavengingratescomparison
　　结果表明 ,样品质量浓度越大 ,清除率越大 ,清
除 DPPH自由基能力越强 ,且由观察可知 ,乙酸乙
酯 、乙醇 、甲醇提取物在质量浓度为 5g/L与 10g/L
时 ,其对 DPPH的清除率相当 ,但远大于质量浓度为
1g/L时对 DPPH的清除率 ,而石油醚提取物的高 、
中 、低 3个质量浓度的样品 ,抗氧化能力存在显著差
异。
2.3　抗坏血酸对 DPPH自由基清除能力的效果分
析和评价
抗坏血酸是公认的具有较强抗氧化能力的对照
品 ,以其反应 20 min后的最终清除率对质量浓度作
图 ,采用药物代谢动力学函数拟合 ,结果见图 3,计
算得抗坏血 酸的 IC50 =0.203 444 g/L, R2 =
0.997 93,具有很好的相关性 ,说明样品对 DPPH的
清除反应符合药物代谢动力学函数。
图 3　抗坏血酸对 DPPH自由基清除率曲线
Fig.3　CurveofascorbicacidonDPPHradicalscavengingrates
由于对照品符合药物代谢动力学 ,具有很好的
相关性 ,故以厚藤提取物样品对 DPPH的最终清除
率 -样品质量浓度作图 ,采用药物代谢动力学函数
模型进行拟合 ,并计算其 IC50值 ,结果见图 4。
由图 4得出:(a)石油醚提取物的 IC50值为
6.628 3 g/L(R2 =0.996 37);(b)乙酸乙酯提取物
的 IC50值为0.836 2g/L(R2 =0.991 27);(c)乙醇提
取物的 IC50值为 0.868 8 g/L(R2 =0.999 48);(d)
甲醇提 取 物的 IC50 值 为 1.867 5 g/L(R2 =
0.995 81)。比较可知 ,乙酸乙酯提取物效果最好 ,
其次分别为乙醇 、甲醇 、石油醚 ,与图 1所得预期结
果一致;而且清除率与样品质量浓度相关系数 R>
0.995 ,相关性很好 ,也符合药物代谢动力学函数。
通过上述数据分析表明 ,厚藤茎叶乙酸乙酯提
取物清除 DPPH自由基能力稍差于抗坏血酸 ,但考
虑到其提取物只是个粗提物 ,说明厚藤茎叶提取物
具有较好的抗氧化活性 ,有望开发成天然抗氧化剂 ,
在医药 、保健 、化妆品等行业具有广阔的研究与应用
前景 。
·868· 精 细 化 工　FINECHEMICALS　　　　　　　　　　　　第 27卷　
图 4　不同样品质量浓度与其最终清除率的关系图
Fig.4　Diagramofrelationshipbetweendiferentsamplemass
concentrationsandfinalclearancerates
3　结论
(1)采用 DPPH法 ,以 IC50为指标 ,评价厚藤不
同提取物的抗氧化活性 ,实验表明厚藤不同提取物
抗氧化活性依次为:乙酸乙酯提取物 >乙醇提取物
>甲醇提取物 >石油醚提取物 ,其 IC50值分别为
0.836 2, 0.868 8, 1.867 5, 6.628 3 g/L。说明厚藤
粗提取具有一定的抗氧化活性 ,而且溶剂的极性对
厚藤抗氧化物质的提取具有很大的影响 ,以乙酸乙
酯为溶剂提取效果最佳 。
(2)本文引入加速溶剂萃取技术制备厚藤提取
物 ,与索氏提取法等常规提取法相比 ,具有耗时短 、
耗样少 、耗萃取剂少 、操作简单等优点。
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