全 文 ：·３７６　 · 中国医院药学　临床专集　２０１６年８月第３６卷
加速溶剂萃取技术提取定心藤中活性成分的研究
何凌云
广州市药品检验所四分所 　广东　广州　５１００００
作者简介：何凌云（１９８０－），女，汉族，广东广州人，本科，广州市食品药品检验所四分所主管药师，研究方向中药化学成分的提取与
测定。
【摘要】　目的　采用加速溶剂萃取技术（ＡＳＥ）对传统瑶药定心藤中所含的雪松醇、芦丁、豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷三种化合物进行提取并优化提
取方法 方法　用中心组合设计 （ＣＣＤ）对ＡＳＥ中影响提取效率的参数进行优化，确定最佳条件后，分别与加热回流和超声法进行比较，根据 ＨＰＬＣ分析所得结
果，观察三者化合物提取总量间的差异 结果　ＡＳＥ对定心藤中三个目标成分提取效率较传统方法高１０．４５％ ～１５．７６％（以总活性成分含量计），由统计分析结
果可知，三者存在显著性差异。结论　ＡＳＥ法相较传统方法更为快速、高效，所得化合物总含量更高，因此具有更大的优势。
【关键词】　加速溶剂萃取技术；中心组合设计
【中图分类号】Ｒ１２７．３　　　　　　【文献标识码】Ａ　　　　　【文章编号】１００１－５２１３（２０１６）０８－０３７６－０１
　　 定心藤（ＭａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｄｅｓＨｅｎｄ．－Ｍａｚｚ．）为茶茱萸科植物甜果藤的干
燥树藤（ＭａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｄｅｓＨａｎｄ．－Ｍａｚｚ）。该类药材活性成分多种多样 ，其
中，含量最为丰富，文献报道较多的为（＋）－雪松醇，芦丁 与色谱分析预实验
中鉴定出的豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷。然而，目前为止，对于定心藤
活性成分的提取方法，仍停留在传统的硅胶柱层析、超声萃取等技术上 。本研
究的目的在于考察及充分利用ＡＳＥ的技术特点，高压条件下快速连续萃取，降
低中药材提取中人工、能源与试剂消耗并简化操作。同时，通过提取效率对
比，探寻其替代传统技术的可能性。
１　方法与结果
１．１　仪器、试剂和材料　 加速溶剂萃取仪为 ＤｉｏｎｅｘＡＳＥ３５０，昆山 ＫＱ－
５０ＤＥ超声净化仪，岛津 ＬＣ－２０Ａ高效液相色谱仪（ＤＡＤ检测器，迪马 Ｃ１８钻
石柱，规格５μｍ，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）。乙醇购自上海化学试剂有限公司；乙腈（色
谱纯）购自默克公司；去离子水由ＭｉＬＬｉ－Ｑ系统制备。（＋）－雪松醇与芦丁
购自中国药品生物制品检定所，定心藤药材来源于广西壮族自治区金秀县山
中，采集后晒干、切片保存，并经广西中医药研究院赖茂祥研究员鉴定为茶茱
萸科定心藤（ＭａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｄｅｓＨｅｎｄ．－Ｍａｚｚ．）。
１．２　豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷单体的制备　 由于未有标准品提供，
故须自行制备其单体。称取定心藤药材粉末５０ｇ，以５ｇ为一份，置于 ＡＳＥ提取
罐中，以 １３０℃，３０分钟，循环两次的提取操作，所用溶剂量为每 ５ｇ药材
５０ｍＬ４５％乙醇，合并所得提取液，旋转蒸发浓缩后，采用大孔树酯以１０％（ｖ／ｖ，
下同）、３０％、５０％、６５％、７５％、９５％乙醇各 ３００ｍＬ，分三次洗脱，取洗脱液进
ＨＰＬＣ后，得知该化合物在５０％乙醇中含量最高，故将该部分合并，旋蒸浓缩
后，挥干溶剂，即得橙黄色粉末状固体。
１．３　药材供试品的制备　 将同一批定心藤药材粉，分为９份，每份５ｇ，平行
操作。使用超声３０ｍｉｎ、加热回流３ｈ、ＡＳＥ按１．２操作，三种方法各提取三份，
提取溶剂均为４５％乙醇５０ｍＬ。
１．４　三种化合物的含量测定
１．４．１　高效液相色谱实验　 具体条件为：流动相 Ａ１％磷酸水溶液，Ｂ乙腈，
采用梯度洗脱，梯度程序为：０～４０ｍｉｎ１５～４０％Ｂ，４０～５０ｍｉｎ４０～６０％Ｂ，５０～
６０ｍｉｎ６０～１５％Ｂ，检测波长２１０ｎｍ，柱温２５℃，流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ。
图１　定心藤ＡＳＥ提取液的最优高效液相色谱图，色谱条件见１．４部分，峰１
为（＋）－雪松醇，２为芦丁，３为豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷
１．４．２　标准曲线绘制　 各取制备的活性成分对照品或单体１０ｍｇ，精密称定，
置于１０ｍＬ容量瓶中，以甲醇定容至刻度即得。取上述标准溶液，精密量取一
定量至同一１０ｍＬ容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得 １，２，５，１０，２０，５０，１００，
２００μｇ／ｍＬ的溶液，进样后记录峰面积。回归方程分别为（＋）－雪松醇 ｙ＝
５６７０．９ｘ＋２５６７９，芦丁ｙ＝２３２３０ｘ＋１５５０３，以及豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄
糖苷ｙ＝９２４５．２ｘ－３７３７．５，相关系数分别为ｒ２＝０．９９９７，０．９９９５和０．９９９６。结
果显示，该方法线性良好，在１～２００μｇ／ｍＬ范围内线性良好。
１．４．３　定心藤药材中各化合物的含量测定　 取定心藤药材粉５ｇ，以１．２部分
所述ＡＳＥ条件提取后，直接进ＨＰＬＣ分析，记录各化合物峰面积。将峰面积代
入标准曲线中，求得各化合物含量。
１．５　ＡＳＥ条件对提取效率影响的考察　 除对不同提取方法进行比较之外，
本实验还对影响ＡＳＥ提取效率的温度、提取时间、提取溶剂及提取循环等四个
因素进行了考察。根据中心组合（ＣＣＤ）设计，选取２０组条件进行 ＡＳＥ提取，
将提取液进 ＨＰＬＣ测定各成分含量，根据 ＤｅｓｉｇｎＥｘｐｅｒｔ分析结果选择最优条
件。结果（见表１）可知，三化合物最优提取条件为提取温度１３０℃，提取时间
５０ｍｉｎ，采用溶剂为４５％乙醇。
表１　ＡＳＥ提取条件ＣＣＤ考察表，化合物１为（＋）－雪松醇，２为芦丁，３为豆
甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷
实验 温度 提取时间 乙醇比例
化合物含量（ｍｇ／ｇ）
１ ２ ３
１ １２０．００ ４０．００ ４０．００ １．７０９ ０．５４９ ９．１７２
２ １２０．００ ４０．００ １０．００ １．８３７ ０．２８６ ６．１９２
３ １２０．００ ２０．００ ４０．００ １．４７５ ０．４４２ ８．５３９
４ １１０．００ ５０．００ ６０．００ １．４４３ ０．４１３ ８．１０６
５ １２０．００ ４０．００ ４０．００ １．６６９ ０．５２９ ８．８５５
６ １３０．００ ３０．００ ２０．００ １．８７５ ０．３３６ ７．５１３
７ １１０．００ ５０．００ ２０．００ １．５１７ ０．４５１ ６．８３５
８ １２０．００ ４０．００ ４０．００ １．７５２ ０．５３８ ８．９７６
９ １００．００ ４０．００ ４０．００ １．５２４ ０．３０７ ７．４５８
１０ １１０．００ ３０．００ ６０．００ １．２５１ ０．２７３ ８．０５２
１１ １３０．００ ５０．００ ６０．００ １．９０６ ０．５６２ ９．３６３
１２ １２０．００ ４０．００ ４０．００ １．６６２ ０．５４５ ８．９９９
１３ １２０．００ ４０．００ ４０．００ １．６７９ ０．５４４ ８．９１４
１４ １２０．００ ４０．００ ７０．００ １．２７５ ０．５２３ ８．９３２
１５ １４０．００ ４０．００ ４０．００ １．４５３ ０．５３２ ９．２５４
１６ １２０．００ ４０．００ ４０．００ １．７６１ ０．５５１ ９．０９５
１７ １２０．００ ６０．００ ４０．００ １．６２１ ０．４７８ ７．９９２
１８ １３０．００ ５０．００ ２０．００ １．６５８ ０．３４２ ８．８２１
１９ １３０．００ ３０．００ ６０．００ １．５７７ ０．５１６ ９．１３５
２０ １１０．００ ３０．００ ２０．００ １．４６３ ０．４０７ ７．２３５
１．６　不同提取方法比较　 取１．３部分所制备的供试品溶液，采用１．４．３部分
所述ＨＰＬＣ条件进行含量测定，以测定结果总量进行统计分析。结果显示，
ＡＳＥ法三种化合物总量 １１．４３ｍｇ／ｇ，超声法为９．６２９ｍｇ／ｇ，回流为１０．２３ｍｇ／ｇ，
ＡＳＥ法相较其他两种方法所得三种化合物总量更高，且由 Ｄｕｎｎｅｔ－ｔ检验，结
果具有显著差异。且在采用ＡＳＥ技术的情况下，雪松醇、芦丁、豆甾醇 －３－Ｏ
－β－Ｄ－葡萄糖苷三种成分的总产量较超声提取高１５．７６％，较加热回流高
１０．４５％。
２　讨论与小结
由表１所列结果可知，当温度由１００℃升至１３０℃时，产量亦随之提升；但当温
度超过这一数值时，各化合物产量，特别是化合物１的产量则出现下降趋势。
这是由于温度升高时，药材中的活性成分与提取溶剂间相互作用更为频繁，更
多化合物分子溶于其中；而过高的温度会使化合物分子受到破坏，致使产量下
降。此外，提取时间对结果也会产生较为显著的影响．随着溶剂分子与药材作
用时间延长，由于二者相互作用更加充分，故产量也会出现上升。对提取溶剂
而言，由于（＋）－雪松醇的极性较大，较高的乙醇比例会使其提取量下降，而
对芦丁与豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷则反之。本文采用 ＡＳＥ对瑶药定
心藤中三种化合物雪松醇、芦丁、豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷进行提取，
该方法快速、高效、自动化程度高，所得目标化合物纯度高，无需前处理可直接
进样。对比传统方法，不但产量上提高程度明显，且更为节能、环保与简便，故
可一定程度上替代传统的中药材提取分离方法。
参 考 文 献
［１］　蔡晨秋，马瑛，唐丽，等，药用植物定心藤的研究进展及民族应用概况，中
央民族大学学报（自然科学版）［Ｊ］，２０１１，０４：６３－６６．
［２］　曾立，向荣，尹文清，等，瑶药定心藤挥发油的提取工艺及其 ＧＣ－ＭＳ分
析，中成药［Ｊ］，２０１２，３４（８），１６１３－１６１５．
［３］　曾立，尹文清，朱琪，欧阳恩鸿，等 定心藤挥发油抗氧化活性研究 广东农
业科学，２０１１，１８：８０－８２．柯永建，乐仁昌等，定心藤中总黄酮的超声波
提取工艺研究，海峡药学［Ｊ］，２００８，２０（１０）：６５－６７．
六七三
网络出版时间：2016-10-31 14:30:37
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/42.1204.R.20161031.1430.072.html