全 文 ：（总 ） 广西中医药 2012年 2月第 35卷第 1期
·中药方剂·
HPLC测定匙羹藤根乙酸乙酯部位
中牛弥菜醇A的含量
姜建萍 广西中医学院 530001 南宁市明秀东路179号
曹 音 广西中医学院护理学院 530023
马雯芳 广西中医学院 530001
摘 要 目的：测定匙羹藤根乙酸乙酯部位中牛弥菜醇A的含量。方法：采用高效液相色谱法，菲罗门氨基
色谱柱，检测波长207 nm，流动相为乙腈-水（90∶10），流速为0.8 ml/min。结果：牛弥菜醇A进样量在1.02～6.12 μg
之间线性关系良好（r=0.9997）；匙羹藤根乙酸乙酯部位中牛弥菜醇A平均回收率为100.57%，RSD=1.5%（n=6），
方法重现性好（RSD=1.3%）。结论：高效液相色谱法测定匙羹藤根乙酸乙酯部位中牛弥菜醇A的含量，操作简便，
专属性好。
关键词 匙羹藤根；乙酸乙酯；牛弥菜醇A；HPLC
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003－0719（2012）01－0058－02
基金项目：广西自然科学基金课题（桂科自0832165）
匙羹藤来源于萝藦科匙羹藤
属植物匙羹藤Gymnema sylvestre
（Retz.）Schult，别名武靴藤、金刚
藤、蛇天角、饭杓藤，以根及全株入
药。全年可采，晒干或鲜用［1］。匙羹
藤根用于治疗脓肿、乳腺炎、痈疮
肿毒；嫩枝叶用于治疗枪弹伤、杀
虱等［2］。近年来，国内外学者已对
匙羹藤作了多方面的研究，发现它
具有降血糖、降血脂、抑制甜味反
应、抗龋齿等作用［3］。有药理学研
究表明，牛弥菜醇A为匙羹藤药材中
起降血糖作用的活性成分之一［4］。
但是目前对匙羹藤的研究主要集
中在叶和茎，而对于匙羹藤根的药
理作用和化学成分的研究很少。为
了充分合理利用匙羹藤资源，扩大
药用部位，实现中草药资源的可持
续利用，本文以牛弥菜醇A为对照
品，进行了匙羹藤根乙酸乙酯部位
的高效液相色谱法的方法学考察，
为匙羹藤根的开发利用和质量控
制提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 美国安捷伦科技有限
公司的Agilent 1100 高效液相色谱
仪：G1311A QuatOump四元梯度泵；
G1313A ALS自动进样器；AT-130
柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限
公司）；G1314A VWD可变波长检
测器；G1314B DAD二极管阵列检
测器；Agilent 1100 Series色谱数据
工作站。
1.2 试剂与试药 牛弥菜醇A（自
制，经UV、IR、MS、1H-NMR和13C-
NMR鉴定并确定结构，采用HPLC
面积归一化法测定其纯度，大于
98%）；水（娃哈哈纯净水）；甲醇、
乙腈（天津市四友生物医学技术有
限公司，色谱纯）；其余试剂均为分
析纯，均经过0.45 μm微孔滤膜滤
过后使用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 菲罗门氨基柱
（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈-
水（90∶10）为流动相，柱温为25 ℃，
进样量为5 μl，流速为0.8 ml/min，
检测波长为207 nm。
2.2 对照品溶液的制备 精密称
取牛弥菜醇A对照品适量，加甲醇
制成0.51 mg/ml的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取匙羹
藤根药材20 Kg，粉碎成粗粉，用
70%乙醇浸泡24 h后，加热回流提
取3次，每次2 h，收集回流提取液，
减压回收乙醇，浓缩，干燥后得总
干膏。取总干膏1 000 g和硅胶
（100~200目）1∶1拌匀后，依次用石
油醚（60~90 ℃）、乙酸乙酯溶剂减
压回流提取，回收溶剂，浓缩得到
乙酸乙酯部位干膏。取上述乙酸乙
酯部位干膏0.5 g，精密称定，置100 ml
容量瓶中，加适量甲醇，超声处理
使其溶解后，加甲醇定容至刻度，
滤过，取续滤液经0.45 μm微孔滤
膜滤过，即得。
2.4 系统适用性试验 在上述色
谱条件下，各精密吸取供试品和对
照品溶液各5 μl，进样测定，色谱
图见图1和图2。
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表2 匙羹藤根乙酸乙酯部位中牛弥菜醇A的含量测定结果 （n=3）
产地 含量（mg/g） RSD（%）
广西融安 71.05 1.27
广西来宾 70.88 1.83
广西隆安 71.21 1.59
表1 牛弥菜醇A加样回收率试验结果 （n=6）
取样量
（g）
样品含量
（mg）
对照品加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
（%）
0.2504 17.7584 15.7 33.1883 98.28
100.57 1.50
0.2502 17.7442 15.7 33.4673 100.15
0.2502 17.7442 15.7 33.8645 102.68
0.2505 17.7665 15.7 33.5240 100.37
0.2503 17.7513 15.7 33.6186 101.07
0.2501 17.7371 15.7 33.5713 100.85
融安、来宾、隆安的匙羹藤根部的
药材，按2.3项方法制备乙酸乙酯
部位干膏，取干膏约0.5 g，精密称
定，按“供试品溶液制备方法”项下
方法制备供试品溶液，吸取供试品
溶液5 μl及对照品溶液5 μl，注入
液相色谱仪中，测定峰面积。按色
谱条件进行测定，以外标一点法计
算牛弥菜醇A的含量，测定三个产
地的药材乙酸乙酯部位中牛弥菜
醇A的含量，结果见表2。
2.5 线性关系考察 分别吸取浓
度为10.2 mg/ml的牛弥菜醇A对照
品溶液1，2，3，4，5，6 ml置于50 ml
容量瓶中，配制成浓度为0.204，
0.408，0.612，0.816，1.02，1.224 mg/ml
的牛弥菜醇A对照品溶液，测定峰面
积，以进样量为横坐标（X），峰面积
为纵坐标（Y），绘制标准工作曲线，
并求出回归方程式：Y=395.7169 X+
27.6306，r=0.9997，结果表明牛弥
菜醇A对照品进样量在1.02～6.12 μg
之间与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验 取同一份对照
品溶液5 μl，注入高效液相色谱仪，
按上述色谱条件连续进样6次，牛
弥菜醇A峰面积RSD=0.91%（n=6）。
2.7 稳定性试验 取同一份供试
品溶液，分别在0，2，4，8，10，12 h
进样5 μl，注入高效液相色谱仪，测
定牛弥菜醇A峰面积值，结果牛弥
菜醇A峰面积的RSD=0.84%（n=6）。
结果表明供试品溶液在12 h内稳
定性良好。
2.8 加样回收率试验 取已测定
含量的同一批号供试品6份，每份
约0.25 g，精密称定，分别精密加入
一定量的牛弥菜醇A对照品，按2.3
项下的“置100 ml容量瓶中”开始
操作测定，计算回收率，结果见表1。
2.9 含量测定结果 取采自广西
图1 牛弥菜醇A对照品HPLC色谱图
图2 供试品HPLC色谱图
3 讨 论
3.1 本实验考察了三种色谱柱：
Diamonsil-C18（4.6 mm × 250 mm，
5 μm）、Inertsil ODS-3（4.6 mm×
250 mm，5 μm） 和菲罗门氨基柱
（4.6 mm×150 mm，5 μm）。因为牛弥
菜醇A是极性比较大的化合物，在使用
通常用于分析极性较小的化合物的C18
和ODS柱时，会使牛弥菜醇A出峰时
间过早，分离度不好。在选用氨基柱，
并且用正相条件分析的时候适合用
于极性较大的化合物，可以使牛弥
菜醇A能有较好的分离度，故选择菲罗
门氨基柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）。
3.2 本试验采用紫外全波长扫描，
牛弥菜醇A对照品的最大吸收波长
在207 nm，故确定牛弥菜醇A含量测
定所用的紫外吸收波长为207 nm。
3.3 选择了不同比例的甲醇-水、乙
腈-水为流动相进行试验，根据分离
度，保留时间以及有无干扰等因素，
最后确定流动相为乙腈-水（90∶10）。
3.4 在供试品溶液的制备中，分别
采用了乙醇和甲醇溶媒对供试品
进行提取方法的考察，从超声、回
流和浸渍等方法中选择提取方法，
结果以甲醇超声提取方法，牛弥菜
醇A提取较完全，且该提取方法操
作较简便，快捷。
参考文献
［1］全国中草药汇编编写组.全国中草药
汇编［M］.北京：人民卫生出版社，
1978：573.
［2］张壮鑫，陈纪军，周俊.云南匙羹藤苷
A和B的结构［J］. 云南植物研究，
1991，13（1）：75-80.
［3］谢晚彬.匙羹藤的化学成分、药理活
性及应用［J］.宜春学院学报：自然科
学版，2007，29（6）：83-85.
［4］Miyatake K.Isolation of conduritol A
from gyranema sylvestre and its effects
against intestinalshcose absorption in
rats［J］.Bioscience，Bioeehonology，and
Biochemistry，1993，57（12）：2184.
（2011-10-28 收稿/编辑 陈明伟）
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