全 文 ：邱　璐 ,杨启国 ,范树国 ,等.青羊参愈伤组织对抗生素敏感性研究 [ J].江苏农业科学 , 2010(3):309-310.
青羊参愈伤组织对抗生素敏感性研究
邱　璐1, 2 , 杨启国 1 ,范树国 1, 2 ,杨海艳 1 ,陈　凯1 ,邹银燕 1 ,黄　静 1 ,郑才智1
(1.楚雄师范学院化学与生命科学系 ,云南楚雄 675000;2.滇中高原生物资源开发与利用研究所,云南楚雄 675000)
　　摘要:研究青羊参愈伤组织对 8种抗生素的敏感性 , 结果表明:青羊参对头孢唑林钠极敏感 , 致死浓度为
50μg/mL;对氯霉素 、硫酸庆大霉素 、硫酸链霉素 、氨苄西林钠较敏感 ,致死浓度分别为 300、300、200、 400 μg/mL;而对
硫酸卡那霉素 、青霉素钠和头孢拉定不敏感。头孢唑林钠抗性基因作为标记基因筛选转基因青羊参植株效果最好 , 氯
霉素 、硫酸庆大霉素 、硫酸链霉素 、氨苄西林钠的抗性基因也可作为标记基因 , 而硫酸卡那霉素 、青霉素钠和头孢拉定
的抗性基因不宜作标记基因。
　　关键词:青羊参;抗生素;敏感性;致死浓度;标记;转基因
　　中图分类号:S567.23+9.01　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2010)03-0309-02
收稿日期:2010-01-26
基金项目:云南省自然科学基金(编号:2006C0086M);云南省学术技
术带头人后备人才项目(编号:2006PY01-61);楚雄州学术技术
带头人项目(编号:200401);楚雄师范学院院级重点建设学科(编
号:05YJJSXK03)。
作者简介:邱　璐(1965—),女 ,硕士 , 教授 ,主要从事植物组织培养
及转基因研究。 E-mail:qiulu55@ 163.com。
通信作者:范树国 ,博士 ,教授 ,主要从事生物化学及分子生物学研
究。 E-mail:fansg@cxtc.edu.cn。
　　青羊参(CynanchumotophylumSchneid)是萝摩科牛皮消
属多年生草质藤本 ,在 《滇南本草 》中又名白蔹 ,在云南丽江
又名白首乌 ,是一种重要的药用植物。以根部入药 ,但根有
毒 [ 1 ] 。根主要含有青羊参苷甲和青羊参苷乙 ,临床上具有较
好的抗惊厥作用 ,对抗癫痫和迁延性肝炎有较好的疗效 [ 2 -3] 。
目前关于青羊参组织培养的研究报道较少 ,而关于青羊参对
抗生素的敏感性及遗传转化的研究未见报道 [4 -5] 。本试验研
究了青羊参愈伤组织对 8种抗生素的敏感性 ,旨在为青羊参
的遗传转化中标记基因的选择奠定基础 。
1　材料与方法
1.1　材料
青羊参均采自云南楚雄星升药业有限公司 ,以青羊参愈
伤组织为试验材料 。
硫酸链霉素 、硫酸庆大霉素 、硫酸卡那霉素 、氯霉素 、氨苄
西林钠 、青霉素钠 、头孢唑林钠 、头孢拉定 ,均为注射用针剂。
基本培养基:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2 mg/L[ 1 ] 。
1.2　试验方法
在培养基中加入不同浓度抗生素进行敏感性试验 。硫酸
链霉素与硫 酸卡那 霉素浓 度分别 为 0、 10、 50、 100、
200μg/mL,硫酸庆大霉素与氯霉素浓度分别为 0、50、100、
200、300 μg/mL,氨苄西林钠 、青霉素钠 、头孢唑林钠与头孢
拉定浓度分别为 0、50、100、200、300、400、500μg/mL。
2　结果
2.1　青羊参愈伤组织对硫酸链霉素敏感性测定结果
由表 1可知 ,在含 200μg/mL硫酸链霉素的培养基中 ,所
有愈伤均死亡;而在 100 μg/mL浓度的培养基中 ,仍有材料
正常生长;故 200 μg/mL的硫酸链霉素为青羊参愈伤组织致
死浓度 ,也是转基因植株的最佳选择压力。
表 1　青羊参愈伤组织对硫酸链霉素敏感性测定结果
硫酸链
霉素浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤增大
(mm2)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
10 均为浅黄色 1 +++ 0
50 3块浅黄色, 3块褐色 1 +++ 50
100 2块浅黄色, 4块褐色 1 ++ 66
200 均为褐色 无 - 100
　　注:“ ++++”表示长势优 , “ +++”表示长势良 , “ ++”表示长
势好 , “ +“表示长势中 , “ -”表示长势差。下表同。
2.2　青羊参愈伤组织对硫酸庆大霉素敏感性测定结果
由表 2可知 ,在含 300μg/mL硫酸庆大霉素的培养基中 ,
所有愈伤均死亡 ,故 300μg/mL的硫酸庆大霉素为青羊参愈
伤组织致死浓度 ,也是转基因植株的最佳选择压力 。
表 2　青羊参愈伤组织对硫酸庆大霉素敏感性测定结果
硫酸庆大
霉素浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤
增大
(mm2)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
50 均为黄色 1 ++ 0
100 2块黄色, 4块褐色 2块增大 1 + 33
200 1块黄色, 5块褐色 1块增大 1 + 17
300 均为褐色 无 - 100
2.3　青羊参愈伤组织对硫酸卡那霉素敏感性测定结果
由表 3可知 ,青羊参愈伤组织对硫酸卡那霉素极不敏感 ,
在 10 ～ 200μg/mL硫酸卡那霉素条件下 ,成活率均达 100%。
2.4　青羊参愈伤组织对氯霉素敏感性测定结果
由表 4可知 , 300μg/mL的氯霉素为青羊参愈伤组织致死
浓度 ,也是转基因植株的最佳选择压力 ,因为 300 μg/mL浓度
的培养基中 ,所有愈伤均不能良好生长。而在 200μg/mL浓度
的培养基中 ,愈伤仍有一定长势 ,不宜作为最佳选择压力 。
2.5　青羊参愈伤组织对氨苄西林钠敏感性测定结果
由表 5可知 ,在 400μg/mL氨苄西林钠的培养基中 ,所有
愈伤死亡;而在 300μg/mL浓度的培养基中 ,愈伤仍有一定
—309—江苏农业科学　2010年第 3期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2010.03.176
表 3　青羊参愈伤组织对硫酸卡那霉素敏感性测定结果
硫酸卡那
霉素浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤
增大
(mm2)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
10 均为浅黄色 1 ++++ 0
50 均为浅黄色 1.5 ++++ 0
100 均为黄色 1 ++ 0
200 均为黄色 1.5 ++ 0
表 4　青羊参愈伤组织对氯霉素敏感性测定结果
氯霉素
浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤
增大
(mm2)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
50 4块黄色 , 2块褐色 2块增大 1 ++ 0
100 2块黄色 , 4块褐色 无 + 66
200 2块黄色 , 4块褐色 无 + 66
300 均为褐色 无 - 100
表 5　青羊参愈伤组织对氨苄西林钠敏感性测定结果
氨苄西
林钠浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤
增大
(mm2)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
50 均为浅黄色 1 +++ 0
100 2块黄色 , 4块褐色 无 ++ 66
200 1块黄色 , 5块褐色 无 + 83
300 1块黄色 , 5块褐色 无 + 83
400 均为褐色 无 - 100
500 均为褐色 无 - 100
长势 。故 400μg/mL的氨苄西林钠为青羊参愈伤组织的致
死浓度 ,也是转基因植株的最佳选择压力 。
2.6　青羊参愈伤组织对青霉素钠敏感性测定结果
由表 6可知 ,青羊参愈伤组织对青霉素钠不敏感 ,所有愈
伤都具有一定的生长或分化能力 。
表 6　青羊参愈伤组织对青霉素钠敏感性测定
青霉素
钠浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤
增大
(mm2)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
50 5块有白化趋势 , 1块褐色 无 + 100
100 1块黄色 , 5块有白化趋势 无 + 83
200 2块黄色 , 4块有白化趋势 无 + 66
300 2块黄色 , 4块褐色 无 + 66
400 3块黄色 , 3块褐色 无 + 50
500 3块黄色 , 3块褐色 无 + 50
2.7　青羊参愈伤组织对头孢唑林钠敏感性测定结果
由表 7可知 ,在 50 μg/mL头孢唑林钠的培养基中 ,所有
愈伤均死亡 , 50μg/mL头孢唑林钠为青羊参愈伤组织的致死
浓度 ,也是转基因植物的最佳选择压力 。
2.8　青羊参愈伤组织对头孢拉定敏感性测定结果
由表 8可知 ,在 500μg/mL头孢拉定的培养基中 ,所有愈
伤均死亡;而在 400 μg/mL浓度的培养基中 ,愈伤仍有一定
的长势 。故 500μg/mL的头孢拉定为青羊参愈伤组织致死
浓度 ,也是转基因植物的最佳选择压力 。
表 7　青羊参愈伤组织对头孢唑林钠敏感性测定结果
头孢唑
林钠浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤
增大
(mm2)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
50 均为褐色 无 - 100
100 均为褐色 无 - 100
200 均为褐色 无 - 100
300 均为褐色 无 - 100
400 均为褐色 无 - 100
500 均为褐色 无 - 100
表 8　青羊参愈伤组织对头孢拉定敏感性测定结果
头孢拉
定浓度
(μg/mL)
愈伤
颜色
愈伤
增大
(mm)
愈伤
长势
愈伤死亡率
(%)
0 均为浅黄色 2 ++++ 0
50 均为浅黄色 2 ++++ 0
100 均为浅黄色 1 ++++ 0
200 均为浅黄色 ,有白化趋势 2 +++ 0
300 均为浅黄色 ,有褐化趋势 2 +++ 0
400 4块浅黄色, 2块褐色 无 +++ 66
500 均为褐色 无 - 100
3　小结
综上可知 ,青羊参愈伤组织对 8种抗生素敏感性不同 ,对
头孢唑林钠极为敏感 ,致死浓度为 50 μg/mL;对氯霉素 、硫酸
庆大霉素 、硫酸链霉素、氨苄西林钠较为敏感 ,致死浓度分别
为 300、300、200、400μg/mL;而对硫酸卡那霉素 、青霉素钠和
头孢拉定不敏感 。因此 ,头孢唑林钠抗性基因作为青羊参转
基因的标记基因筛选转基因植株效果最好 [ 6 ] 。另外氨苄西
林钠 、硫酸庆大霉素 、氯霉素 、硫酸链霉素的抗性基因也可作
为标记基因筛选转基因青羊参植株 ,而硫酸卡那霉素 、青霉素
钠和头孢拉定的抗性基因不宜作为标记基因筛选转基因青羊
参植株 [ 7 -8 ] 。
参考文献:
[ 1]邱　璐 ,罗春梅 ,杨启国.青羊参遗传转化中组织培养系统的研
究 [ J].中草药 , 2007, 38(11):1707-1712.
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—310— 江苏农业科学　2010年第 3期