全 文 ：,1 4 4
. 中国药理学通报 19 87 年 第 3 卷 第 3 期
青羊参总武对小鼠脑突触体中某些氨基
酸含量和脑中某些有关酶活性的影响
李建一 赵天睿 南国华 周曦
( 江 西 医学 院生物 化学教研室 南昌 )
XK入义又丫父护ù提要 C O S青羊参的藏仿提取物 , 有杭惊殷作用 。 本文报 道 iP C O S
可升高小 鼠脑突 触体 中G A B A含量及降低 G 比 、 A s p含量 ,抑制 全脑 G D H 、
谷氛酞胺畴及 门冬跳胺酶活性 。 村突触体 中G ln 含量和 脑 中 G O T 、 G P T
和谷氛酞胺合成酶活性 无明显 影响 。 C O S付上述氛基 酸含量和 腾 活 性 的
影响可 能与其杭 惊厥作 用有关 。
关键词 青羊参总武 丫一氛基丁 酸 谷氛酸 门冬氛酸 突触体
酶 脑
K人入x义Xé吞乃八袄丫0妙仆
青羊参总贰 ( C O S )系从萝摩科鹅绒藤
属植 物青羊参 ( C y n a n e孙u m O t o p h y l l u m
cs h ne id ) 的根部提取出 来 的 苗体 醋 贰
类 。 药理实验表明 , C O S对大鼠听源性惊
厥发作有对抗作用 ; 对小鼠最大 电休克发
作单用无效 , 但可增强苯巴比妥钠和苯妥
英钠的抗惊厥作用 ; 对硫酸亚铁引起的家
兔癫痛模型有明显的治疗作用 , 并可使异
常脑电图恢复正常 川 。 临床资料表 明 ,
C O S对治疗各型癫痈均有较好的疗效 , 特
另lJ对大发作型疗效尤佳 , 对用多种抗惊厥
药长期不能控制的癫病大发作 , 在继续服
用抗 癫 痈 药 物的同时 , 加服 C O S , 多 数
可获得较满意的稳定疗效 〔“ ’ 。 但其作用机
制 , 仍不清楚 。 我们曾报道 C O S对硫代 氨
基脉 ( T SC ) 造成的小鼠惊厥 有 对 抗 作
用 , 此作用与其降低小鼠脑中兴奋性氨基
酸谷氨酸 ( G lu ) 和门冬氨酸 ( A s p ) 含
量平行 〔 3 1 。 由于上述氨基酸既是脑 中重要
的兴奋性递质 , 又是脑细胞代谢的中间产
物 , 因此药物的抗惊厥作用不仅与全脑氨
基酸含量改变有关 , 而且与突触体中递质
氨基酸含量变化也有密切关系 。 为了进一
步了解 C O S的抗惊厥作用是否与神经末梢
中递质氨基酸含量改变有关 , 我们测定了
iP C O S后小鼠脑突触体中 G l u 、 A s p等氨
基酸含量 。 为了探讨氨基酸含量变 化的原
因 , 我们 同时测定了全脑中有关氨基酸代
谢酶的活性 , 结果报道如下 。
材料与方法
C O S由中国科学院昆明植物 研 究 所
提供 , 用 4 % 吐温 80 制成注射液 。 T S C用
蒸馏水制成注射 液 。 药物均临用前配制 ,
注射体积为 0 . l m l / 1 0 9体重 。
实验用体重 20 一2 8 9雄性成年小 鼠 ,
随机分组 , 实验组 iP C O S或 ’ f S C , 对 照
组 iP 等量相应溶剂 。
一 、 突触体中氨基酸含量的测定
每个样品用 15 只动物脑合并制备突触
体 , 实验组及对照 组各制备样品 3 个 。 分
离突触体 〔 4 」 , 经电镜鉴定后 , 用蒸馏水胀
破突触体 , 测定突触体中氨基酸 含 量 仁` ’
及突触休蛋自质含量 〔 。 1 。
1 4 5
二 、 脑谷丙转氨酶 ( G PT )和 谷 草
转氨酶 ( O T G )活性的测定
脑中 Ghi 、 A s p的合成与降解和 G PT
C O T 活性有关 , 酶活性的测定参 照 文 献
〔 7 , , 但均以 a 一酮戊二酸为受氨体 。 酶活
性以净生成 G坛 拼m ol / g鲜脑油为单位表
不 。
三 、 脑谷氨酞胺酶活性测定 〔 7 ’
脑中G lu 生成与谷氨酞 胺 酶 活 性 有
关 。酶活性以净生成 G l u 协m o l / g鲜脑 / 1 5
m 访为单位表示 。
四 、 脑谷氨酸脱 氢酶 ( G D H ) 活 性
测定
脑中G D H 的催化反应为可逆 的 , 主
要参予 G lu 合成。 测定此酶活性 f “ ’ , 但 不
加 2 , s , 5 一 t r ip h o n y l t e t r a z o l i u m
e h l o r i d e
, 加 入 酶 后 1 m i n 用 M 7 5 0 一
U V I S型微量分光光度计读取O D 34 。 。 酶
活性以 O D : 4。 增加 0 . 0 1 / g鲜脑 /m i n 为 一
个活性单位表示 。
五 、 脑谷氨酞胺合成酶活性测 定 〔 8 ’
脑 中 G hi 降解与此酶活性有关 。 酶 活
性 以 O D 5 4。 增加 0 . 0 1 / g鲜脑 / h为 一 个 活
性单位表示 。
六 、 脑门冬酞胺酶活性测定
门冬酸胺酶分解门冬酞胺可促进A 印
生成 , 测定此酶活性 t “ ’ , 但酶制剂为 p H
8
.
4 , 0
.
0 1 3 M硼酸缓冲 液 制 成 的 1 : 1 0
脑匀浆 。 酶活性以净生成 A s p 卜m ol / g鲜
脑 / h为单位表示 。
结 果
一 、 青羊参总试对小鼠脑突触休中某
些氨基酸含量的影响
动物分为 4 组 : 对照组 ; iP T S C组 ;
i p C O S组 ; i p C O S 后 4 h 再 i p T S C
组 。 T S C 组动物于最大惊厥发作时断头 ,
其余各组动物于相当于 T S C最大惊厥效应
时断头 , 动物脑突触体中氨基酸含量见表
表 i 青羊参总戒对 T S C诱发惊厥小鼠脑突触体中氮基酸含量的影响 ( n二 o1 /口 g蛋白质 )
△ǔ. 1汪1
+-
G A B A A
s p G I
n
G l u
G l
u +
A
s p
灼邪13
对照组
T S C
( 15 m g / k g )
C O S
( 5 0 m g / k g )
C O S + T S C
( 5 0 + 里5口 g / k g )
2 2
.
8 0士 2 19
1 4
.
8 8士 2 . 2 7 .
2 1 0 7士 2 6 9 8 . 5 7土 0 . 8 6
2 9
.
14士 2 6 0 . 9 . 3 1士 1 . 0 r
2 8
.
2 3士 2 . 2 9
3 8
.
2 3士 2 . 0 0 .
G A BA
2
_
16
2 7
.
8 6士 1 . 5 6二 1 5 . 7吐土 2 . 1 9二 8 . 3 5土 0 . 8 4 2 2 . 9 1土 r . 3 6
1 8
.
74土 2 . 0 3二 令 x 5 . 7 7土 1 . 8 9 . 申 8 . 4 一土 0 . 5 6 2 4 . 2 1士 l . 7 a . 申
表中数据为 3 次实验的平均数土标准差 。 * 与对照组比较 P < 。 . 0 1 ; ’ . 与对照班比较 P < 0 . c5 , 与 T S C组比较
P < 0
.
0 1 ;
. 巾 申与对照组 、 T S C 胡比较均 P < 0 . 05 ( F检验 )
由表 1可见 , iP T S C 可导致小鼠脑 谷氨酸胺 ( G ln ) 含量 无 明 显 影响 。
突触体中 Y一氨 基丁酸 ( G A B A ) 明显降 二 、 青羊参总贰对小鼠脑中某些酶活
低 , 亦可明显升高G lu 和 A sP 含量 , 而 iP 性的影响
C O S的结果与此正好相 反 , 明 显 升 高 动物分为 2组 : 对照组 ; iP C O S组 。
G A B A 和降低 G lu 、 A sP 含量 。 预先给予 于 iP 后 4 h测定 动物脑中酶的活性 , 结 果
C O S再给予T S C 时 , 可明显防止 T S C 对 见表 2 。
G A B A
、
G lu 和 A s p水平的 影 响 , 提 示 由表 2 结果可 以看出 , C O S可显著抑
C O S的抗惊厥作用很可能与其升 高抑 制 制谷氨酞胺酶 、 G D H和门冬酞胺酶活性 ,
性氨基酸 G A B A水平及降低兴奋 性 氨 卯: 但对 G \ P T 、 G O T和谷氨酞胺合成酶 活 性
酸 G ih 、 A sP 水平有关 。 C O S对突触体中 无明显影响 。
ó..门
· 士4 6 ·
表 2 青羊参总俄对小鼠脑中酶活性的影响
8只 /组 ( X士 S D )
对照组
G P T 25
.
0 4士 2 .9 2
G O T 1 0 3土 8
G D H 2 29土 79
谷氮酸胺酶 1 03 士 7
谷氨酞 胺合成酶 1 87 土 23
门冬醉胺酶 r s . 7 3士 r . g o
CO S ( s om g / k g)
25
.
01士 1 . 2 3
1 1 5士 9
r 1 1土 5 4二
1 19士 8 。
1 7 3土 1 0
1 6
.
1 1士 主 , 3 1二
与对照织比较 . P < 。 . 05 , 二 P < 。 . 。孟 (t 检验 )
讨 论
T S C 是 一种致惊厥剂 。 我们在实验中
观察到 , iP T S C的小鼠脑 神 经 末 梢 内
G A B人含量比对照组少 ( P < 0 . 以 ) 。 A be
等 〔 ’ 。 ’ 也有过相似报道 。 此外 我 们 还 发
现 , T S C可使 G lu 和 A s p含量增高 ( 均 为
P < 0
.
01 )
。 说明 T S C的致惊厥作用不 仅与
突触体中G A DA含量紊乱有关 , 可能也与
G l u
、
A s p 含 量紊乱有 关 。 S a d a s i v u d u
等川 1 认 为 , 当G l u + A s p / G A B A 比
值下 降 时 , 脑 的 兴 奋 性 降 低 。 如 将
表 l 结果代入上式 , T S C可使该值升高 1 10
%
, 提示惊厥时脑处于高度兴奋的状态 。
而C O S的作用与此相反 , 可使 G lt + A s p
/ G人 B A 比值降低 36 % , 表 明 C O S有降低
脑兴奋性的作用 。 C O S + T S C组 动 物脑
突触体 G A B A 含量明显高于 T S C组 ( P <
0
. 肠 ) , G加与 A s p 含量明显低于 T S C组
( 均为 P < 0 . 0 1 ) , G l u + A S p / G A B A 比
值接近正常 , 也显示 C O S的抗惊城 作 用
与升高突触体中 G A B A 和降低 G l u 、 A s p
含量有关 。
脑中参予合成 G lu 的酶主要有谷氨 酞
胺 酶 、 G D H和 G O T 。 现有资料表明 , 谷
氨酞胺酶主要定位于神经末梢 , 参予递质
G lu 的合成 。 而 G D H在神经末梢 和 胶 质
细胞中活性均很高 , 既参与递质 C lu 的 合
成 , 也参与非递质 G hi 的合成 。 C O S可明
显抑制谷氨酚胺酶和 G p H活性 , 这 可 能
足 C O S使突触体中G lu 含量减少的原 因 。
G ih 主要在大脑皮层输出纤维及海马等处
发挥兴奋性递质作用 , 兴奋性 G lu 含量 减
少使中枢神经系统处于抑制状态 , 因而可
能与 C O S的抗惊厥作用有关 。 脑中A sP 可
由 G O T催化生成 , 本文未观察到 C O S 对
G O T 的明显影响 。 R e u b i等 〔 ’ 2 ’ 认为 , 门
冬酞胺很可能是脑某些神经通 路 中 递 质
A sP 的重要前体 , 并且门冬 酞 胺 转 化 成
A s p是受门冬酞胺酶催化的 。 我们在实验
中发现 C O S可明显抑制脑门冬酸胺 酶 活
性 , 因此可能是 C O S导致突触 体中A s p含
量降低的原因 。 脑中 A s p的神经通路与生
理功能和 G lu 相似 , A s p 含量下降也 具有
降低脑兴奋性的作用 , 这可能与 C O S的抗
惊厥作用有关 。 C O S导致突触体中G A B A
含量改变的原因尚有待进一步研究 。
参考 文献
1
. 裴印权等 : 北京医学院 学报 1 9 8 1 1 3
2、 玉
2
. 匡培 根 : 北京中医 1 0 8 4 ( 3 ) : 2 3
2
. 李建一等 : 江西医学院学报 10 8 5 25 (
2 一 3 ) : 3
,玺. C o t m a n CW ; I n F lo i 、 c飞l o r s , ( t a 屯
。 d : 卜l e t h o d s i n e n z y m o lo g y V o l 3 1 P a r t A
N
e w Y o r k A e a d e川 i e P r I O 7 4 P 或吐5 一 4 5 2
5
. 周曦等 : 江西医学院学报 1 9 8 5 25 ( 2 一
3 ) 1 7
6
. 管原洁 · 副岛正 美著 , 张旭译 : 蛋白质 的
定量法 第二版 北京 农业出版社 19 81 第 1 53 页
7
. 蜚景明等: 中国药理学报 1 9 8 4 5 : 4
8
.
R
a
i
a
l
a k s五m i R , 。 t a l : 工 N e u r o e h e m
1 9 6 5 1 2 : 2 6 1
0
.
M o i s t e r A : I n C o l o w i e k S P
, 。 t a l
e d : M e t h o d s i n e n z y m o lo g y V o l 2 N Y
A e a d o m i e P
r 1 0 5 5 p 3 8 o 一 3 6 5
一0 . A b e M : J N u t r S e i V i t a m i n o l 1 9 7 8
2 么: 4 盆〕
1 1
.
S
a d a s i v u d u B
,
c t a l
: A r e h I n t P h y 一
5 10 1 B i
o e h e m 1 0 7 9 吕7 8 7 1
盆2 . 1之e u b主 J C , r t a l : J N e u r o c l、 e m l , 5 0
35 : ! 0 1吕
( l , 8 3
.
5
.
x 3 I仪稿 , 1 , 5 6 6 . 2 3修 〔d )
1 4 7
目阮
浏卜
/
E F FE CT O F I
’
OT A LG LY C OS ID E O F CY N A N C LIUM OT OP H Y L L UM
S H N CE ID ON S Y N A P T OS OM A LA M N I OA C ID N C OT E N T S A N D
W H O LE B A R IN E N Z Y M E A T V T C I I IE S IN M I CE
L1 J i an yi
,
Z h a o T i a n r u i
,
N a n G
u o h u a e t a l
( D e P t
.
o f B i
o e
il
e m i s t r y
,
J i a n g x i M e d i e a l C o l l e它e , N a n e h a n g )
A b s t r a e t
T h e t o t a l g l y e o s i d e e x t r a e t e d f r o m t h e r o o t o f e y n a n e h u m o t o P h y -
1l u m s o h n e i d ( C O S ) h
a s a n t i e o n v u l s a n t a e t i v i t y
.
I t s e f f e e t o n s y n a p 一
t o s o m a l a m i n o a e i d e o n t e n t s a n d b r a i n e n z y m e a e t i v i t i e s i n m i e e w e r e
5 t u d i e d i n t h i
s p a p e r
.
A f t e r t il e i p a d m i n i s t r a t i o n o f C O S
, t h
e e o n 一
t e n t o ￡ G A B A w a s i n e r e a s e d , a n d t h a t o f G l u a n d A s p d e e r e a s e d , i n
s y n a p t o s o m e s o f b o t il n o r m a l a n d T S C i
n d u e e d e o n v u l s a n t m i e e
, w h i l e
t h e e o n t e n t o f G l n r e m a i n e d u n e h a
n g e d
.
A f a l l i n t h e 匕 e t i v i t i e s o f
G D H
, g l u t a m i n a s e a n d a s p a r a g i n a s e i n w 五o l e b r a i n w a s s e e n . N o e h -
a n g e s w e r e o b s e r v e d i n t h e a e t i v i t i e s o f G P T
,
G O T
a n d g l
u t a m i n e
s y n t h
e t a s e
.
K
e y , o r d s
:
T o t a l g l y e o s i d e o f e y n a n e h u nt o t o p h y l l u m s e h n e i d ( C O S )
;
G A B A ; G l u t a m a t e ; A s p a r t a t e ; S y n a p t o s o m e : E n z y扭` e ; B r a i n
切阮 今临床用药问答今
何谓时间药理学? 有何意义?
脚自
时间药理学 ( C h r o n o p h a r m a e o l o g y )
是近年来迅速发展起来的一门科学 , 它属
于药理范畴 , 同时也是时间生物学 ( C h r -
o n o b i o l o g y ) 的一个分支 。 时间生物学是
研究 “ 时间因素 ” 对生物体影响的一门科
学 , 从单细胞生物到人类的各种 机 能 活
动 、 生长繁殖等都可能随着时间而呈现某
种规律性反复变化 , 这就是生 物 的 周 期
性 , 人的睡眠与觉醒就是生物周期性的明
显例子 ; 此外 , 人的正常体温在一天内也
有规律性变化 , 下午最高 夜间最低 ; 某
些激素的分泌也存在着昼夜波动 , 如肾 _ L
腺皮质激素从午夜后 分泌开始增多 , 至上
午 6 ~ 9 时血中浓度达最高 , 随 后 分 泌
逐渐减少 , 到次 日午夜血中浓 度 降 至 最
低 , 如此周而复始 , 产生节律性变化 ; 生
长激素的分泌规律是 白天处于低水平 , 而
夜间则升得很高 。 人体机能的周期性变化
对药物作用将会产生很大的影响 , 时间药
理学就是研究生物的周期性对药效学 、 药
动学及药物毒性等影响的科学 。 因此开展
时间药理的研究将会对临床合理用药具有
重要的意义 , 受到药理学工作者及临床医
师极大的重视 . )
( 今传及 )