全 文 ：文章编号:1008-1402(2007)04-0562-03
正交试验法优选铃兰总黄酮的提取工艺①
刘　娟 , 　齐永亮
(佳木斯大学化学与药学院 ,黑龙江佳木斯 154007)
摘　要:　采用正交试验法研究铃兰中总黄酮的提取工艺 ,考察了乙醇含量 、提取时间 、提取次数 、以
及料液比等5个因素对铃兰总黄酮含量的影响.确立了铃兰总黄酮最佳提取条件为:70%的乙醇 ,提取时
间为 0.5h ,提取次数为 3次 ,料液比为 1:15.
关键词:　铃兰;总黄酮;正交试验
中图分类号:　R284.2　　　　文献标识码:　A
　　铃兰(Convallaria keiskei Mip.)为百合科植
物.又名:草玉铃 、香水花 、君影草.主要分布在东
北 、华北地区.铃兰全草入药 ,具有抗炎 、利胆 、利
尿 、强心等功效[ 1] .天然药用植物中总黄酮的提取
有很多方法 ,而有关铃兰中总黄酮的提取方法的研
究未见文献报道.作者通过正交试验考察了提取剂
中乙醇含量 、提取时间 、提取次数以及料液比等因
素的影响 ,确定了最佳提取工艺条件.为铃兰系统
研究提供科学依据.
1　仪器及材料
旋转蒸发器 RE-52A ,上海亚荣生化仪器厂;
UV757CRT 紫外可见分光光度计 ,上海精密分析仪
器厂;无水乙醇试剂为 AR级 ,哈尔滨市新达化工
厂;芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供;
铃兰采于黑龙江省牡丹江市牡丹峰 ,经佳木斯大学
化学与药学院生药学教研室刘娟教授鉴定为百合
科植物铃兰(Convallaria keiskei Mip.).
2　方法及结果
2.1　正交试验设计
采用乙醇回流提取 ,选择主要影响提取效率的
乙醇含量(A)、提取时间(B )、提取次数 (C)、料
液比(D)为考察因素 ,采用 L9(34)表安排正交试
验[ 2] ,总黄酮含量为评价指标见表 1.
2.2　正交试验
准确称取 1.0 g 粉碎后的铃兰干燥品于圆底
烧瓶中 ,加入一定量提取溶剂回流提取总黄酮 ,按
正交工艺设计进行实验 ,在一定温度下提取 ,流水
冷却后过滤 ,合并滤液 ,定容至 50ml ,取 5ml 置于
25ml容量瓶中 ,依标准曲线制备方法测定吸光度 ,
计算总黄酮含量.
表 1　正交试验因素与水平表
水平 乙醇含量 %
A
提取时间 h
B
提取次数
C
料液比
D
1 60 0.5 1 1:5
2 70 1 2 1:10
3 80 2 3 1:15
2.3　含量测定方法
2.3.1　标准曲线制备
准确称取芦丁对照品 4mg , 60%乙醇溶解 ,定
容至 100ml容量瓶中 ,摇匀.准确移取芦丁标准溶
液 1 ,3 ,5 ,7 ,9ml于 25mL 容量瓶中 ,加入 0.50 mol
LNaNO2溶液 1ml , 5min 后加入 0.30 mol L AlCl3溶
液 1 ml ,摇匀 ,加入 1 mol L NaOH 溶液 5ml ,60%乙
醇定容至刻度 ,以 60%乙醇作参比 ,用 1cm 比色皿
于波长 510nm处测其吸光度 ,以吸光度(A)为纵
坐标 ,以芦丁标准溶液的体积为横坐标绘制标准曲
线[ 3] ,如图 1所示.
用最小二乘法进行回归 ,得到吸光度(A)和芦
丁标准溶液的体积 V (ml)的回归方程:A =0.
0265V +0.0535 ,相关系数 R =0.9994 ,线性范围为
0.04 ～ 0.36mg 这表明该方法线性关系良好 ,可用
① 收稿日期:2007-03-12作者简介:刘娟(1949-),女 ,黑龙江佳木斯人 ,佳木斯大学化学与药学院教授 ,主要从事:生药(中药)鉴定及品质评价研究.
　第 25卷 第 4期　　　　　佳 木 斯 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 )　　 Vol.25 No.4　2007　年 07 月　　　　　Journal of Jiamusi University (Natural Science Edition)　　 July 　2007
于铃兰总黄酮含量的测定.
图 1　标准曲线
2.3.2　样品测定
分别取 1 ～ 9号样品溶液 ,精密吸取 5ml置于
25ml容量瓶中 ,依标准曲线制备方法测定吸光度 ,
计算总黄酮含量[ 4] ,结果见表 2.
2.3.3　精密度试验
精密吸取同一样品溶液 5ml ,依标准曲线制备
方法测定吸光度 ,平行操作 6次 ,结果吸光度的
RSD=0.94%.
2.3.4　稳定性试验
精密吸取同一样品溶液 5ml ,依标准曲线制备
方法 ,每隔 0 , 2 , 4 ,6 ,8 ,24h 连续测定 6次 ,吸光度的
RSD=0.26%,结果表明样品溶液在24h内稳定.
2.3.5　加样回收率试验
精密吸取己知含量的样品溶液 1ml ,以乙醇定
容到 25ml ,得稀释液.精密吸取稀释液 1ml共 6份 ,
及对照品贮备液 2ml ,加入同一 25ml容量瓶中 ,加
乙醇至刻度 ,按标准曲线制备方法测定吸光度 ,每
份测 3 次 , 计算总黄酮含量 , 结果平均回收率为
99.2%,RSD=1.08%.
2.4　实验结果
正交试验结果及方差分析详见表 2 、表 3.
表 2　正交试验结果
序号 A B C D 总黄酮含量%
1 1 1 1 1 0.07510
2 1 2 2 2 0.03622
3 1 3 3 3 0.07320
4 2 1 2 3 0.1042
5 2 2 3 1 0.1372
6 2 3 1 2 0.1196
7 3 1 3 2 0.1206
8 3 2 1 3 0.1117
9 3 3 2 1 0.07472
K1 0.1845 0.2999 0.3064 0.2870
K2 0.3610 0.2851 0.2152 0.2764
K3 0.3070 0.2675 0.3310 0.2891
k1 0.0615 0.09997 0.1021 0.09567
k2 0.1203 0.09503 0.07173 0.09213
k3 0.1023 0.08917 0.1103 0.09637
R 0.05880 0.01080 0.03857 0.004240
表 3　方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 值 P
A 0.005453 2 0.002727 177.9 < 0.05
B 0.0001754 2 0.00008770 5.723 > 0.05
C 0.002481 2 0.001241 80.95 < 0.05
D 0.00003065 2 0.00001533 1.000
　　　　　注:F0.05(2, 2)=19
3　结论和讨论 3.1　对所得数据进行直观分析和方差分析
结果见表 2 、表 3 ,可以看出:各因素影响顺序
563第 4 期 刘　娟 ,等:正交试验法优选铃兰总黄酮的提取工艺
为 A >C >B >D ;由表3方差分析结果表明 ,相
对于 D 因素(误差来源), A 因素有显著性意义 ,
C ,B 因素次之 , D 因素对试验结果的影响最小.最
佳提取工艺为 A2B1C3D3 ,即选用70%的乙醇 ,提
取时间为 0.5h ,提取次数为 3次 ,料液比为 1:15.
3.2　因素水平确定
在预试验中 , 曾对乙醇含量(A)、提取时间
(B)、提取次数 (C)3个因素分别进行了单一因素
筛选试验 ,即固定其他两个因素 ,对其中 1个因素
作大范围变化的试验考察 ,选出每个因素中较好的
3个水平设计正交表.
3.3　工艺验证
按最佳提取工艺 A2B1C3D3进行验证试验(平
行3 次), RSD=1.6%,说明工艺合理 , 提取较完
全 ,稳定性好.
参考文献:
[ 1] 　马成亮.铃兰的栽培及利用价值[ J] .特种经济植物 , 2002 ,
(3):25.
[ 2] 　成明建 ,冯冠英 ,黄齐慧.正交试验法优化连钱草中总黄酮的
提取工艺[ J] .中国医院药学杂志 ,2005 , 25(2):147-149.
[ 3] 　彭秧锡 ,陈启元 ,钟世安 , 赵术娟.玉竹中总黄酮的提取工艺
研究[ J] .武汉理工大学学报 , 2005 ,27(12):38-40.
[ 4] 　罗祖友 ,杨晓萍 ,吴谋成.藤茶水溶性多糖及总黄酮的提取工
艺研究[ J] .食品科学 , 2005 , 26(5):156-160.
Orthogonal Test for the Effect of Alcohol Extracting Process on
Total Flavonoids Contents from Convallaria keiskei Mip.
LIU Juan , 　QI Yong-liang
(Chemistry andMedicine College of Jiamusi University , Jiamusi 154007 , China)
Abstract:　Extraction technology of flavonoids in Convallaria keiskei Mip.was studied by means of orthogonal
experiment.The effects of the ethanol concentration , the extracting time , the number of extraction times , and the ratio
of mass of raw material to the volume of solvent on flavonoid content were investigated.Optimum extraction condition
was determined as follows:70%ethanol as extracting solvent , time is 0.5 h , 3 times of extraction , the ratio of mass
of raw material to the volume of solvent 1:15.
Key words:　Convallaria keiskeiMip.;total flavonoids;orthogonal test
564 佳 木 斯 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 2007年