全 文 ：１７１２－１７１７
０９／２０１４
草 业 科 学
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ
３１卷０９期
Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．０９
ＤＯＩ：１０．１１８２９＼ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－０６２９．２０１４－０１３３
玉蝉花种胚的丛生芽诱导和
植株再生技术
庄春慧，陈 荀，付 尧，曹 柏，王 玲
（东北林业大学园林学院，黑龙江 哈尔滨１５００４０）
摘要：以玉蝉花（Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ）种胚为外植体来研究其丛生芽诱导和植株再生。玉蝉花种胚的丛生芽诱导最佳培养
基配方为 ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ ０．６ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ ２．０ｍｇ·Ｌ－１，６０ｄ时的增殖系数最大，达到９．６１；
最佳生根培养基为 ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ·Ｌ－１，生根率达到１００％。本研究结果可促进玉蝉花种质资源的有效开发
和利用，为种质保存、育种及其他无性繁殖技术等研究的开展提供无菌植物材料。
关键词：玉蝉花；丛生芽；组织培养；快繁
中图分类号：Ｑ９４５．３９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０６２９（２０１４）０９－１７１２－０６＊
Ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ ｅｍｂｒｙｏ
ＺＨＵＡＮＧ Ｃｈｕｎ－ｈｕｉ，ＣＨＥＮ Ｘｕｎ，ＦＵ Ｙａｏ，ＣＡＯ Ｂａｉ，ＷＡＮＧ Ｌｉｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ １５００４０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅ－
ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ １．０
ｍｇ·Ｌ－１ ６－ＢＡ ｐｕｒｉｎｅ，０．６ｍｇ·Ｌ－１ ＮＡＡ，ａｎｄ ２．０ｍｇ·Ｌ－１ ＫＴ．Ｔｈｅ ｇｒｅａｔｅｓｔ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
ｆｏｒ ｂｕｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ（９．６１）ｗａｓ ａｃｈｉｅｖｅｄ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ６０ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅ－
ｄｉｕｍ ｗａｓ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ０．５ｍｇ·Ｌ－１ ＮＡＡ ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ａ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ １００％．Ｔｈｅ ｐｒｅｓ－
ｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉ．ｅｎｓａｔａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ，ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｓｔｅｒｉｌｅ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｓｅｘｕａｌ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｒｉｓ ｅｎｓａｔａ；ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＷＡＮＧ Ｌｉｎｇ Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｌｉｎｇｈｌｊ＠１２６．ｃｏｍ
鸢尾科（Ｉｒｉｄａｃｅａｅ）鸢尾属（Ｉｒｉｓ）植物是多年生宿
根的著名观赏花卉，园艺品种达数千个，以其花大、色
艳、花形奇特、适应性强而广泛应用于园林绿化和鲜
切花生产［１－２］。该属植物可以通过播种繁殖或无性繁
殖，在北美和西欧鸢尾鲜切花及优良庭园品种的推广
苗多是通过无性的快速繁殖供应市场［３－４］。
玉蝉花（Ｉ．ｅｎｓａｔａ）是鸢尾属植物中耐寒性较强
且分布较广的种，性喜水湿，宜栽于浅水当中；土壤
条件较好的旱生条件下也能正常生长。玉蝉花每年
６、７月份开花，花形和花色变化很大，连续花期较
长；叶片青翠似剑，绿期长［５］，是非常好的切花和园
林绿化材料，在我国开发利用的较少，为了有效地保
护野生资源并实现玉蝉花的开发利用，开展玉蝉花
组织快速繁殖方法研究是非常必要的。
在植物的快速繁殖途径中，通过丛生芽诱导实
现扩繁目的的方法受到广泛关注，大到湿地松（Ｐｉ－
＊ 收稿日期：２０１４－０３－２５ 接受日期：２０１４－０８－２０
基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金资助（ＤＬ１３ＥＡ０７）；国家林业局９４８项目（２０１３－４－４３）；黑龙江省博士后启动金（ＬＢＨ－
Ｑ１２１６８）；哈尔滨市应用技术研究与开发项目留学基金（２０１３ＲＦＬＸＪ００１）；国家林业局留学基金项目
第一作者：庄春慧（１９８７－），女，辽宁昌图人，在读硕士生，研究方向为园林植物种质资源。Ｅ－ｍａｉｌ：９０５５０８９７７＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：王玲（１９７２－），女，山东掖县人，教授，博士，研究方向为园林植物种质资源。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｌｉｎｇｈｌｊ＠１２６．ｃｏｍ
０９／２０１４ 草 业 科 学 （第３１卷０９期）
ｎｕｓ ｅｌｌｉｏｔｔｉｉ）［６］、青钱柳（Ｃｙｃｌｏｃａｒｙａｐａｌｉｕｒｕｓ）［７］、
牡丹（Ｐａｅｏｎｉａ ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ）芍药（Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉ－
ｆｌｏｒａ）［８］等乔木和灌木的培育，小到香石竹（Ｄｉａｎ－
ｔｈｕｓ ｆｒａｇｒａｎｓ）［９］、文心兰属（Ｏｎｃｉｄｉｕｍ）［１０］等草本
花卉的培育；从园林植物的培育，再到甜菜（Ｂｅｔａ
ｖｕｌｇａｒｉｓ）［１１］、大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ）［１２］、花生（Ａｒａｃｈｉｓ
ｈｙｐｏｇａｅａ）［１３］等经济农作物的繁育，丛生芽诱导的
方法起着非常重要的作用。丛生芽途径进行扩繁具
有快速、稳定的特点。丛生芽诱导常用外植体主要
是茎尖、幼叶、腋芽、休眠芽、顶芽等，而对于通过种
子或种胚来获得丛生芽的研究仅在经济农作物大
豆［１４］、花生［１５］、玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ）［１６］等的繁殖培育当
中有所应用，在观赏花卉中的应用报道却很少，包括
鸢尾属植物。以种胚为外植体，消毒容易，试验方法
简单，与种子相比出苗率高，生长快，可以有效缩短
繁殖周期，有利于实现快速繁殖的目的，所以本试验
以玉蝉花种胚为试验材料进行丛生芽诱导快速繁殖
技术研究，可为玉蝉花体胚丛生芽诱导研究奠定基
础。
１ 材料与方法
１．１ 材料
玉蝉花种子成熟后于２０１３年９月采自东北林
业大学试验基地，采收后将种子放在室内自然阴干。
１．２ 方法
１．２．１ 种子消毒方法和最佳外植体的筛选 玉蝉
花种子在使用前用适量的、稀释后的洗洁精浸泡１０
ｍｉｎ，且边浸泡边搅拌，冲洗掉种子表面的灰尘及其
他杂质；于流水下冲洗２ｈ，在室温下用４０℃温水浸
泡２４ｈ后放于超净工作台中，先用７５％酒精消毒１
ｍｉｎ，然后用不同浓度的 ＮａＣｌＯ消毒不同时间（表
１），再用无菌水冲洗５～６次，每次１ｍｉｎ，整个消毒
过程不断搅拌。接种前在滤纸上吸干种子上多余的
水分，接种置于 ＭＳ培养基中，统计不同浓度 Ｎａ－
ＣｌＯ消毒和不同时间处理后种子的污染率和萌发
率。每个处理３０粒种子，重复３次。
将已经消毒的种子分成３部分，进行不同的处
理：一部分种子置于显微镜下去掉全部胚乳，剥出种
胚；另一部分在胚周围去掉部分胚乳；剩下的种子消
毒后不经任何处理。不同处理后的外植体材料接种
于所筛选出的最佳诱导分化培养基中，每个培养基
配方接种３０个处理材料，重复３次。培养室培养温
度为（２５±２）℃，光照强度为１ ５００～２ ０００ｌｘ，光照
时间为１０ｈ·ｄ－１。观察记录玉蝉花种胚、带部分
胚乳的种胚和完整种子的丛生芽诱导情况。
１．２．２ 玉蝉花丛生芽的诱导培养基的筛选 在
ＭＳ基础培养基的基础上，利用Ｌ９（３４）正交试验设
计研究不同浓度的６－ＢＡ（０．０、１．０和２．０ｍｇ·
Ｌ－１）、ＮＡＡ（０．２、０．４和０．６ｍｇ·Ｌ－１）和 ＫＴ （０．
０、１．０和２．０ｍｇ·Ｌ－１）组合对玉蝉花种胚丛生芽
诱导的作用（表２），以上培养基均添加３０ｇ·Ｌ－１蔗
糖、３．８ｇ·Ｌ－１琼脂粉，ｐＨ值为６．７，溶解好的培养
基冷却凝固前分装到１００ｍＬ的三角瓶里，以不超
过其容积的一半为宜，用封口膜封口，放在灭菌锅中
经１２１℃高压灭菌２０ｍｉｎ后取出，备用。
１．２．３ 生根培养 当丛生芽生长至４ｃｍ左右时，
接种至 ＭＳ附加 ＮＡＡ（０．２、０．５和１．０ｍｇ·Ｌ－１）
或ＩＢＡ（０．２、０．５和１．０ｍｇ·Ｌ－１）的生根培养基
中。每个处理接种２０个丛生芽，重复３次。观察统
计其生根情况。
１．２．４ 组培苗移栽 取生长一致、生长状况良好的
组培苗，去掉封口，在室温条件下炼苗２ｄ后，用镊子
夹出，清洗根部残留的培养基，移栽于园土∶蛭石＝
１∶１的栽培基质中，２０ｄ后统计移栽的成活情况。
１．３ 数据分析
观察记录的数据分别为：
污染率＝（污染个数／接种个数）×１００％；
萌发率＝（萌发个数／存活个数）×１００％。
诱导率＝（诱导丛生芽个数／接种个数）×１００％；
增殖系数＝增殖后的丛生芽数／接种的幼苗数。
生根率＝（生根的幼苗数／接种的幼苗数）×１００％；
生根系数＝根的总数／生根的幼苗数。
采用ＳＰＳＳ １７．０软件对所测数据统计分析，用
平均值和标准误表示测定结果，并用Ｄｕｎｃａｎ法对
各测定数据进行多重比较。
２ 结果与分析
２．１ 不同次氯酸钠浓度及消毒时间对种子接种污
染率的影响
本试验在对种子材料用７５％酒精消毒１ｍｉｎ
后，采用了不同浓度 ＮａＣｌＯ继续消毒处理（表１），
结果表明，玉蝉花种子的消毒处理结果不仅与 Ｎａ－
ＣｌＯ浓度有关，而且受ＮａＣｌＯ消毒时间的影响也比
较大。当消毒时间一致时，随 ＮａＣｌＯ浓度升高，污
３１７１
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ（Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．０９） ０９／２０１４
染率下降；当ＮａＣｌＯ浓度一致时，污染率也会随着
消毒时间的延长而降低。在本试验中消毒时间为
３０ｍｉｎ时，ＮａＣｌＯ浓度达到４０％时污染率降至最
低，为５．６７％，与其他处理间存在着显著差异（Ｐ＜
０．０５），基本上达到培育无菌苗的要求。
表１ 不同消毒处理接种后玉蝉花种子污染情况
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｉ．ｅｎｓａｔａｓｅｅｄｓ ａｆｔｅｒ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
消毒时间
Ｔｉｍｅ ｏｆ
ｄｉｓｆｅｃｔｉｏｎ／ｍｉｎ
ＮａＣｌＯ／％
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
１ １０ １０ ９３．３３±３．７６ａ
２ １０ ２０ ９２．３３±３．９３ａ
３ １０ ３０ ８９．００±２．００ａｂ
４ １０ ４０ ８５．６７±２．９６ａｂ
５ ２０ １０ ９１．００±１．００ａｂ
６ ２０ ２０ ８６．６７±３．５１ａｂ
７ ２０ ３０ ８６．３３±３．３３ａｂ
８ ２０ ４０ ８２．３３±２．３３ｂ
９ ３０ １０ ８４．３３±１．３３ａｂ
１０ ３０ ２０ ６９．００±１．００ｃ
１１ ３０ ３０ ５４．３３±４．６７ｄ
１２ ３０ ４０ ５．６７±２．９６ｅ
注：表中数据为平均值±ＳＤ。同列不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜
０．０５）。下表同。
Ｎｏｔｅ：Ｖａｌｕｅｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ａｓ ｍｅａｎ±ＳＤ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒ ｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ
ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｓｈｏｗ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ０．０５ｌｅｖｅｌ．
Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
２．２ 玉蝉花种子诱导结果分析
２．２．１ 丛生芽诱导增殖培养基的筛选 以玉蝉花
种子胚作为丛生芽诱导试验的外植体，进行了丛生
芽诱导增殖培养基筛选（表２），结果表明，在继代培
养６０ｄ时统计，不同激素水平中单独使用ＮＡＡ的
培养基配方不能实现丛生芽的诱导，６－ＢＡ或ＫＴ与
ＮＡＡ组合均能诱导出少量不定芽，说明６－ＢＡ 或
ＫＴ与ＮＡＡ的互作对玉蝉花种子胚的丛生芽诱导
非常关键。并且６－ＢＡ、ＫＴ和 ＮＡＡ三种激素组合
的培养基配方对玉蝉花种胚丛生芽诱导的效果更明
显，丛生芽诱导率和增殖系数上存在显著差异（Ｐ＜
０．０５）。而当６－ＢＡ浓度一定时，随着 ＫＴ浓度的增
加，诱导的丛生芽数不断增加，增殖系数加大，显著高
于低浓度的ＫＴ激素水平；但当ＫＴ浓度一致时（１．０
或２．０ｍｇ·Ｌ－１），随着６－ＢＡ浓度的增加，诱导的丛
生芽数和增殖系数呈现先增加后降低的趋势，尤其是
增加到２．０ｍｇ·Ｌ－１时，反而会对玉蝉花丛生芽的增
殖有一定的抑制现象，丛生芽诱导率下降。所以，从
试验结果中优选出玉蝉花丛生芽的最适诱导增殖培
养基 为 ＭＳ＋ ６－ＢＡ １．０ ｍｇ·Ｌ－１ ＋ＮＡＡ ０．６
ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ ２．０ｍｇ·Ｌ－１，此时的增殖率为
７７．３３％，增殖系数达到最大值９．６１，苗高最高可达
１０ｃｍ。
玉蝉花丛生芽的整个诱导增殖过程周期比较
长，丛生芽培育期间每隔１５ｄ换一次培养基，这样
有助于提高丛生芽的增殖速度，增加长势。
２．２．２ 不同外植体的玉蝉花种子丛生芽诱导结果
比较 在 诱 导 分 化 培 养 基 （ＭＳ＋６－ＢＡ １．０
ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ ０．６ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ ２．０ｍｇ·Ｌ－１）
上，对玉蝉花种子消毒后外植体材料的丛生芽诱导
表２ 不同植物生长调节剂对丛生芽诱导增殖的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
６－ＢＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
ＫＴ／
ｍｇ·Ｌ－１
诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
增殖系数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ
生长状况
Ｇｒｏｗｔｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
０．０ ０．２ ２．０ ４６．６７±４．８１ｃ ３．０５±０．１５ｅ 细弱，底部发白Ｓｌｅｎｄｅｒ，ｂｏｔｔｏｍ ｗｈｉｔｉｓｈ
０．０ ０．４ １．０ ２６．６７±２．６７ｄ ２．５０±０．１４ｆ 细弱，浅绿Ｓｌｅｎｄｅｒ，ｐａｌｅ ｇｒｅｅｎ
０．０ ０．６ ０．０ ０．００±０．００ｅ ０．００±０．００ｇ 健壮，浅绿 Ｈｅａｌｔｈｙ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ，ｐａｌｅ ｇｒｅｅｎ
１．０ ０．２ １．０ ６１．３３±５．８１ｂ ７．５０±０．１４ｂ 健壮，绿色 Ｈｅａｌｔｈｙ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ，ｇｒｅｅｎ
１．０ ０．４ ０．０ ２１．３３±１．３３ｄ ５．８３±０．２２ｃ 健壮，绿色 Ｈｅａｌｔｈｙ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ，ｇｒｅｅｎ
１．０ ０．６ ２．０ ７７．３３±３．５３ａ ９．６１±０．２０ａ 粗壮，深绿色Ｔｈｉｃｋ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ，ｄａｒｋ ｇｒｅｅｎ
２．０ ０．２ ０．０ ３０．００±２．３１ｄ ４．２４±０．２１ｄ 健壮，嫩绿Ｈｅａｌｔｈｙ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ，ｔｅｎｄｅｒ ｇｒｅｅｎ
２．０ ０．４ ２．０ ５３．３３±２．６７ｂｃ ７．７８±０．１５ｂ 粗壮，绿色Ｔｈｉｃｋ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ，ｇｒｅｅｎ
２．０ ０．６ １．０ ４９．３３±５．３３ｃ ６．２８±０．１１ｃ 粗壮，深绿色Ｔｈｉｃｋ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ，ｂｏｔｔｌｅ ｇｒｅｅｎ
４１７１
０９／２０１４ 草 业 科 学 （第３１卷０９期）
情况比较发现（表３），不同外植体的污染率、萌发
率、开始发芽时间及开始分化时间上均有所不同，并
在分化时间上差异显著（Ｐ＜０．０５）。剥出的种胚具
有明显的优势，其污染率为０，第４天开始萌发，萌
发率可以达到１００％；分化时间比带部分胚乳的胚
处理提前，比种子缩短了１２ｄ，且差异显著。所以，
玉蝉花种胚直接做外植体进行丛生芽的诱导是比较
适宜的材料。
２．３ 丛生芽最适生根培养基的筛选
选取继代培养后生长至４ｃｍ左右，长势比较
好、健壮的丛生芽，自基部１．５ｃｍ左右处剪掉叶片
后接种至生根培养基中。培养４ｄ后，从瓶底部就
可以看到白色的生根点，７ｄ后大部分均开始生根，
培养２０ｄ时有些根最长可达２ｃｍ。各培养基配方
的生根率均超过６０％（表４），在基础培养基中只添
加ＮＡＡ或ＩＢＡ的处理，生根率都会随激素浓度升
高而升高，但只添加ＮＡＡ的处理生根效果更明显，
ＮＡＡ浓度０．５ｍｇ·Ｌ－１或１．０ｍｇ·Ｌ－１时，生根率都
可达１００％。但ＮＡＡ浓度在１．０ｍｇ·Ｌ－１时生根系
数为９．８９，生根少、短粗；浓度０．５ｍｇ·Ｌ－１时生根系
数却达到１１．３７，且根粗壮密集，二者差异显著（Ｐ＜
０．０５）。当使用ＩＢＡ时，根的生长较细弱，随着浓度的
升高，根的畸形情况逐渐明显。因此，综合生根率、生
根系数和根生长状况，认为玉蝉花丛生芽的最适生根
培养基配方为 ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ·Ｌ－１。
２．４ 丛生芽组培苗的炼苗及移栽
接种４ｄ后的种胚即开始萌发变绿，随后开始
变得嫩绿、粗壮，１５ｄ后在幼芽底部即开始分化出
其他嫩芽，继续继代培养就会从底部分化出越来越
多的小苗（图１）。当每株组培苗分化出７～８株小
苗，并继代生长稳定后转移至生根培养基中，每株苗
至少有５个根，然后转移到栽培基质中，２０ｄ时统计
其成活率可达８３％，且移栽后植株长势很好，从开
始移栽时的高度４ｃｍ左右长至１５ｃｍ左右。
３ 讨论与结论
研究发现，玉蝉花种子胚组织培养继代芽丛大
小对丛生芽增殖有显著影响，将芽丛切割成单个芽
进行继代培养，丛生芽虽还会继续增殖，但增殖时间
很长，单株芽一般长势会先下降，恢复一段时间后才
会开始继续增殖，分化率降低。未切割分株的丛生
芽则会不断分化，且生长良好，叶片嫩绿有光泽。而
把玉蝉花丛生芽切割至每丛４～６个芽或不切割的
增殖效果要明显好于切割成单株或２～３个芽的芽
表３ 玉蝉花种子不同外植体胚的诱导分化情况
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉ．ｅｎｓａｔａｓｅｅｄｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔ
外植体
Ｅｘｐｌａｎｔ
接种数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
开始发芽时间
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ／ｄ
开始分化时间
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ／ｄ
种胚Ｅｍｂｒｙｏ ３０ ０．００±０．００ａ １００．００±０．００ａ ４．００±０．３３ｂ １５．００±１．７３ｃ
带部分胚乳的胚
Ｅｍｂｒｙｏ ｗｉｔｈ ｐａｒｔ ｏｆ ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ
３０ ６．６７±２．０３ａ ９８．００±１．００ａ ４．００±０．６７ａｂ ２１．００±０．５８ｂ
种子Ｓｅｅｄ ３０ ５．６７±２．９６ａ ９１．００±１．００ｂ ６．００±０．５８ａ ２７．００±０．８８ａ
表４ 不同生根培养基对丛生芽生根情况的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ
ＮＡＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
ＩＢＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
接种幼苗数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ／％
生根系数
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
生长状况
Ｇｒｏｗｔｈ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
０．２ ０．０ ２０ ８０．００±２．８９ｃ ９．２５±０．２６ｃｄ 少，短粗Ｌｅｓｓ，ｓｈｏｒｔ ａｎｄ ｔｈｉｃｋ
０．５ ０．０ ２０ １００．００±０．００ａ １１．３７±０．３２ａ 短粗，密集Ｓｈｏｒｔ ａｎｄ ｔｈｉｃｋ，ｄｅｎｓｅ
１．０ ０．０ ２０ １００．００±０．００ａ ９．８９±０．０７ｂｃ 少，短粗Ｌｅｓｓ，ｓｈｏｒｔ ａｎｄ ｔｈｉｃｋ
０．０ ０．２ ２０ ６６．６７±４．４１ｄ ８．５３±０．２９ｄ 细长，长势低Ｓｌｅｎｄｅｒ，ｇｒｏｗｉｎｇ ｗｅａｋ
０．０ ０．５ ２０ ８３．３３±４．４１ｂｃ ７．１０±０．０９ｅ 愈伤组织状，畸形Ｒｏｏｔ ｌｉｋｅ ｃａｌｕｓ，ｄｅｆｏｒｍｉｔｙ
０．０ １．０ ２０ ９１．６７±３．３３ａｂ １０．１９±０．３４ｂ 畸形，长势低Ｄｅｆｏｒｍｉｔｙ，ｇｒｏｗｉｎｇ ｗｅａｋ
５１７１
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ（Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．０９） ０９／２０１４
图１ 玉蝉花丛生芽诱导不同阶段的培养情况
Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｈａｓｅｓ ｏｆ Ｉ．ｅｎｓａｔａｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ
注：Ａ，接种４ｄ后的玉蝉花种胚；Ｂ，接种１０ｄ后的种胚苗；Ｃ，接种２５ｄ后的丛生芽；Ｄ，接种４０ｄ后的丛生芽；Ｅ，接种６０ｄ后的丛生芽；Ｆ，丛生
芽生根诱导；Ｇ，生根２０ｄ的植株；Ｈ，移栽２０ｄ后的植株。
Ｎｏｔｅ：Ａ，Ｉ．ｅｎｓａｔａｅｍｂｒｙｏ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｅ ４ｄａｙｓ；Ｂ，Ｓｐｒｏｕｔ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｅ １０ｄａｙｓ；Ｃ，Ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ ａｆｔｅｒ ２５ｄａｙｓ；Ｄ，Ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ ｉｎ－
ｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ４０ｄａｙｓ；Ｅ，Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｅｄ ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ ａｆｔｅｒ ６０ｄａｙｓ；Ｆ，Ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒ ｂｕｄｓ；Ｇ，Ｐｌａｎｔ ｒｏｏｔｉｎｇ ａｆｔｅｒ ２０ｄａｙｓ；Ｈ，Ｐｌａｎｔ ａｆｔｅｒ
ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ ２０ｄａｙｓ
丛。此研究结果与黄苏珍等［１７］对杂种鸢尾（Ｉ．ｈｙ－
ｂｒｉｄｓ）在茎尖丛生芽增殖研究结果和陈晨等［１８］对德
国鸢尾（Ｉ．ｇｅｒｍａｎｉｃａ）品种在花器官不定芽诱导方
面的继代增殖过程研究结果一致，因此，为了不影响
增殖，过小的丛生芽不宜切割，切割也要最低程度地
减少对丛生芽的损伤。在统计诱导率、增殖系数后
随着培养时间延长丛生芽数量还会不断增加。
鸢尾属植物丛生芽诱导常用的外植体有茎
尖［１７，１９］、根茎［２０］、花苞［２１］、鳞片［２２］还有其他花器
官［２３－２４］，最佳丛生芽增殖系数一般都在５．５左右；而
本试验以种胚为外植体，其增殖系数达到９．６１，明
显高于以往的研究成果，而且继续培养还会不断增
殖。另外，茎尖、根茎等植物材料作为外植体不仅不
易消毒、污染率高、存活率低，而且对植物体伤害较
大，常用 ＨｇＣｌ２ 消毒还会产生有毒废液［２５－２６］。本试
验以玉蝉花种胚为试验材料，由于有种皮包被，消毒
方法简易、方便，不易对种胚造成伤害，还可以保证
发芽率，获得了较满意的诱导效果。
此外，玉蝉花丛生芽诱导过程中组培苗出现了
严重的褐化现象，根据王文静等［２７］研究可知褐化现
象是由于植物组织中激活了多酚氧化酶，使细胞代
谢发生了变化，酚类物质被氧化后产生棕褐色醌类
物质，该类物质扩散到培养基中会抑制其他酶的活
性，进一步毒害整个植株体组织，从而使植株发生褐
变；外部环境的影响，也会一定程度上抑制或促进组
织块或培养基中多酚氧化酶的活性，抑制或促进多
酚物质的氧化过程，从而影响组织褐变的程度［２８－２９］。
褐化在鸢尾属植物组织培养中是非常普遍而且很难
避免的现象，今后可以借鉴本试验中通过减少光照
时间、增加继代频率等措施避免或减少了褐化现
象［３０］。鸢尾属植物的诱导分化到出苗时间一般都
很长，需２、３个月左右，加快分化成苗速度将是今后
的研究重点。
本研究得出，玉蝉花种子采用７５％酒精消毒１
ｍｉｎ，４０％ ＮａＣｌＯ消毒３０ｍｉｎ污染率最低；玉蝉花
种子胚是丛生芽的诱导最佳外植体，最佳的诱导增
殖培养基配方为 ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ
０．６ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ ２．０ｍｇ·Ｌ－１，６０ｄ时统计增殖
系数最高可达９．６１；最适生根培养基配方为 ＭＳ＋
ＮＡＡ ０．５ｍｇ·Ｌ－１，生根率１００％，生根效果最好；
在园土∶蛭石＝１∶１配比的基质中２０ｄ时成活率
达８３％。本研究为获得大量无菌苗、种质保存、育
种及其他无性繁殖技术研究奠定了材料基础。但本
研究在丛生芽诱导生根后的移栽没有做栽培基质对
照试验，今后可以通过不同栽培基质选择试验确定
更为适宜的栽培基质进一步提高移栽成活率。
６１７１
０９／２０１４ 草 业 科 学 （第３１卷０９期）
参考文献
［１］ 王玲，张伟艳，卓丽环，孙颖．东北３种野生鸢尾种子生物学比较研究［Ｊ］．种子，２００６，２５（１２）：３４－３７．
［２］ 王玲，卓丽环．鸢尾属植物部分种幼苗发育形态学的比较［Ｊ］．东北林业大学学报，２００６，３４（８）：４７－４９．
［３］ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｗ Ｃ，Ｍｉｌｅｒ Ｐ Ｎ，Ｍｉｅｌｋｅ Ｋ Ａ，Ａｌｅｎ Ｔ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｕｌｂｅｔ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｆｒｅｅ ｄｕｔｃｈ Ｉｒｉｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒ－
ａｓ，１９９０，２６６：７７－８１．
［４］ Ｍｉｌｅｒ Ｐ Ｎ，Ａｎｅｄｒｓｏｎ Ｗ Ｃ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｕｌｂｌｅｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｄｕｔｃｈ Ｉｒｉｓ［Ｊ］．Ｈｏｒｔｉｓｃｉｅｎｃｅ，１９８９，２４（６）：１０２８－１０３１．
［５］ 牟少华，郄光发，彭镇华，孙振元，殷继艳．我国鸢尾属植物种质资源的研究与利用［Ｊ］．草业科学，２００７，２４（８）：２１－２３．
［６］ 何月秋，叶建仁．湿地松丛生芽的诱导及试管苗的生根研究［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２００５，２９（５）：１３－１５．
［７］ 谢寅峰，张志敏，尚旭岚，杨万霞，王纪，方升佐．青钱柳茎段腋芽萌发和丛生芽增殖［Ｊ］．林业科学，２０１１，４７（１）：５０－５５．
［８］ 李海刚，孔祥生．牡丹和芍药的组织培养［Ｄ］．洛阳：河南科技大学，２０１０：１７－４１．
［９］ 杨进，钟利华．香石竹组织培养丛生芽分化的初步研究［Ｊ］．湖北农学院学报，２００４，２４（１）：４５－４７．
［１０］ 谷凤，侯卓捷，张志平，夏慧敏，付玉兰．文心兰丛生芽组培快繁研究初报［Ｊ］．中国农学通报，２００７，２３（２）：８５－８８．
［１１］ 张红，杨爱芳，张举仁．沿海甜菜（Ｂｅｔａ ｍａｒｉｔｉｍａ Ｌ．）高频率丛生芽诱导和植株再生［Ｊ］．中国糖料，２００３（４）：１－４．
［１２］ 蒋向辉，佘朝文，李丹，郝博飞．野生大豆丛生芽诱导及快速繁殖［Ｊ］．大豆科学，２００８，２７（４）：６９７－７００．
［１３］ 苗利娟，张新友，黄冰艳，董文召，汤丰收，秦利，高伟，韩锁义．不同花生品种幼叶丛生芽诱导研究［Ｊ］．河南农业科学，
２０１２，４１（１１）：４５－４８．
［１４］ 袁鹰，刘德璞，郑培和，徐文静，李海龙．大豆组织培养再生植株研究［Ｊ］．大豆科学，２００１，２０（１）：９－１２．
［１５］ 徐平丽，单雷，王传堂，柳展基，李广存，路艳辉．花生胚轴丛生芽的诱导和植株再生［Ｊ］．花生科技，１９９９（增刊）：２５４－
２５６．
［１６］ 李国圣，张卿伟，张举仁，毕玉平，单雷．玉米丛生芽体系的建立及抗除草剂转基因植株再生［Ｊ］．中国科学，２００１，３１（５）：
３８５－３９１．
［１７］ 黄苏珍，韩玉林，谢明云，孙桂弟．杂种鸢尾的组织培养和植株再生［Ｊ］．植物生理学通讯，２００３，３９（６）：６３８．
［１８］ 陈晨，毕晓颖，卢明艳．德国鸢尾组织培养快速繁殖技术研究［Ｊ］．沈阳农业大学学报，２０１０，４１（１）：２７－３２．
［１９］ 黄苏珍，韩玉林，谢明云，汪泓江．德国鸢尾的组织培养［Ｊ］．江苏林业科技，２０００（６）：３７－４４．
［２０］ 江明，谢文申．香根鸢尾的组织培养和快速繁殖［Ｊ］．园艺学报，１９９５，２２（３）：３０１－３０２．
［２１］ 张金政，石雷，王平，孙国峰．有髯鸢尾“常春黄”的组织培养［Ｊ］．植物生理学通讯，２００４，４０（２）：２１０．
［２２］ 黄苏珍，谢明云，佟海英，韩玉林，顾姻．荷兰鸢尾（Ｉｒｉｓ ｘｉｐｈｉｕｍ Ｌ．ｖａｒ．ｈｙｂｒｉｄｕｍ）的组织培养［Ｊ］．植物资源与环境，
１９９９，８（３）：４８－５２．
［２３］ 陈德芬，杨焕婷，马钟艳．外源激素对鸢尾组织培养的影响［Ｊ］．天津农业科学，１９９７，３（３）：１８－２０．
［２４］ 吴月燕，毛军平，周倩倩．路易斯鸢尾组织培养过程中愈伤组织的诱导和芽的分化［Ｊ］．浙江农业科学，２００９（１）：８６－８９．
［２５］ Ｍｅｙｅｒ Ｍ Ｍ，Ｆｕｃｈｉｇａｍｉ Ｌ Ｈ，Ｒｏｂｅｒｔｓ Ａ Ｎ．Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｌ ｂｅａｒｄｅｄ ｉｒｉｓｅｓ ｂｙ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｈｏｒｔｓｃｉｅｒｎｃｅ，１９７５，
１０（５）：４９７－４８０．
［２６］ Ｂｅｒｇｅｒ Ｆ，Ｗａｉｔｅｓ Ｗ Ｍ，Ｌｅｉｆｅｒｔ Ｃ．Ａｎ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｈｏｏｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｆｒｏｍＩｒｉｓ ｒｈｉｚｏｍｅｓ ｉｎｆｅｃ－
ｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｏｆｙ ｒｏｔ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆Ｂｉｏｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ，１９９４，６９（３）：４９１－４９４．
［２７］ 王文静，王鹏，左金淼．鸢尾组织培养中防褐化技术研究［Ｊ］．安徽农业科学２００９，３７（１５）：６８５８－６８５９，６８９１．
［２８］ 余叔文，汤章城．植物生理与分子生物学［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９８．
［２９］ 冉懋雄．中药组织培养实用技术［Ｍ］．北京：科学技术文献出版社，２００４．
［３０］ 周俊辉，周家容，曾浩森，王国彬，祝展平．园艺植物组织培养中的褐化现象及抗褐化研究进展［Ｊ］．园艺学报，２０００，２７
（增刊）：４８１－４８６．
（责任编辑 武艳培）
７１７１